83例原发性肝癌患者自身抗体检测结果分析①

赵海琳 闫惠平 张海萍 （首都医科大学附属北京佑安医院感染与免疫研究中心,北京 100069）

83例原发性肝癌患者自身抗体检测结果分析①

赵海琳②闫惠平 张海萍 （首都医科大学附属北京佑安医院感染与免疫研究中心,北京 100069）

目的:探讨原发性肝癌患者自身抗体产生的规律及临床意义。方法:以临床诊断为原发性肝癌患者83例作为研究对象,采用间接免疫荧光法及免疫印迹法检测患者血清中自身抗体。结果:83例肝癌患者自身抗体检出率为37.3%（31/83）,其中HBV感染患者检出率35.9%（23/64）,HCV感染者检出率50.0%（8/16）,二者差异无统计学意义（P＞0.05）。能检测到一种、两种及三种自身抗体的患者分别为24.1%、12.1%和1.2%。抗核抗体（ANA）、抗细胞骨架抗体（CS）、抗平滑肌抗体（SMA）和抗线粒体抗体（AMA）的检出率分别为24.1%、13.3%、9.6%和4.8%。抗核抗体谱分析有Ro-52、CENP-B（着丝点B抗原）等自身抗体阳性。AFP（甲胎蛋白）异常及AFP正常的患者自身抗体检出率分别为36.8%和22.2%,差异无统计学意义（P＞0.05）。HBV-DNA阳性与HBV-DNA阴性患者自身抗体检出率分别为40.5%和27.3%,差异无统计学意义。女性患者自身抗体检出率明显高于男性,差异有统计学意义。结论:37.3%的原发性肝癌患者能检测到非器官特异性的自身抗体:ANA、CS、SMA和AMA,大多患者以检出其中一种抗体为主,部分患者能检出二至三种自身抗体。ANA、CS、SMA和AMA四种自身抗体中检出率最高的是ANA,其次是CS和SMA,检出率最低的是AMA。各抗体均以低滴度为主。ANA荧光模型以颗粒型为主。血清AFP含量的高低与自身抗体检出率之间未见明显相关性。HBV-DNA阳性患者与HBV-DNA阴性患者自身抗体检出率差异无统计学意义。女性患者自身抗体检出率明显高于男性。

原发性肝癌;自身抗体;检测

近年来,关于病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等患者体内能检测到自身抗体的报道越来越多[1-9]。本文通过对83例原发性肝癌患者血清抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗线粒体抗体（AMA）及抗细胞骨架抗体（CS）等自身抗体的检测结果进行分析,探讨原发性肝癌患者自身抗体产生的特点,分析自身抗体与AFP、DNA及年龄、性别之间的关系及其临床意义,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 本组83例均为北京佑安医院2008年1～12月临床诊断为原发性肝癌的住院患者。其中男58例,女25例。年龄29～89岁,其中≤30岁者2例,31～39岁3例,40～49岁18例,50～59岁27例,60～69岁18例,70～79岁14例,80～89岁1例。

HBV表面抗原阳性者（乙肝肝癌组,A组）64例（77.1%）,男51例、女13例;HCV抗体阳性者（丙肝肝癌组,B组）16例（19.3%）,男4例、女12例;HBV表面抗原及HCV抗体阴性者（非乙非丙组,C组）3例（3.6%）,均为男性。

1.2 检测试剂及方法 本组患者自身抗体检测均采用德国欧蒙（Euroimmuno）公司产品,采用间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体（ANA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗细胞骨架（CS）、抗肝肾微粒体（LKM）等自身抗体。血清自1∶100起稀释,选择的抗原基质有Hep-2细胞,猴肝和心肌组织,大鼠肝、肾和胃组织。操作步骤按欧蒙公司生物薄片马赛克TM技术试剂盒说明书进行,封片后用荧光显微镜观察结果,组织或细胞内出现特征性绿色荧光,血清稀释度≥1∶100为阳性。欧蒙免疫印迹法进行抗核抗体谱检测,检测膜条包被抗原有:nRNP/Sm 、Sm 、SS-A 、Ro-52、SS-B 、Scl-70 、Jo-1 、CENP-B 、dsDNA 、Nukleosomen 、Histone 、Rib.p-Rrot,操作按说明书进行。AFP采用美国雅培试剂盒微粒子酶免疫法（MEIA）进行检测,AFP＞10.9 ng/ml为异常。HBVDNA检测采用荧光定量PCR法,检测下限为500 copies/ml,＞500 copies/ml为阳性。

1.3 统计学处理 统计版本为SPSS17.0,数据处理采用 χ2检验。

2 结果

2.1 自身抗体检测结果

2.1.1 自身抗体检出率 83例原发性肝癌患者中,共有31例患者检出自身抗体阳性,总阳性率为37.3%（31/83）。检出的自身抗体包括抗核抗体（ANA）、抗细胞骨架抗体（CS）、抗平滑肌抗体（SMA）和抗线粒体抗体（AMA）。ANA、CS、SMA及AMA的检出率分别为 24.1%（20/83）、13.3%（11/83）、9.6%（8/83）和4.8%（4/83）。见表1。

20例（24.1%）患者仅检出一种自身抗体阳性,分别为:ANA 9 例、CS 5例 、SMA 5例 、AMA 1 例;10例（12.1%）同时检出两种自身抗体阳性,分别为:（ANA+AMA）4 例 、（ANA+CS）3 例 、（ANA+SMA）2例、（SMA+CS）1例;同时检出三种自身抗体的1例（1.2%）,为（ANA+SMA+CS）。

A组（乙肝肝癌组）自身抗体检出率为35.9%,B组（丙肝肝癌组）为50.0%,两组自身抗体检出率的差异无统计学意义（χ2=1.07,P＞0.05）。见表1。

2.1.2 自身抗体滴度分布 20例ANA阳性患者中 ,12例（60%）滴度为 1∶100,7例（35%）1∶320,1例（5%）1∶1 000;11例CS阳性患者中,8例（73%）滴度为1∶100,2例（18%）1∶320,1例（9%）出现了1∶1 000高滴度;8例SMA 阳性患者中,4例1∶100,4例1∶320;4例AMA阳性患者的滴度全部为1∶100。

2.1.3 ANA谱 8例ANA滴度≥320的患者采用欧蒙免疫印迹法进行了ANA谱检测,结果显示:一例（男63岁乙肝肝癌）Ro-52阳性,一例（女49岁丙肝肝癌）CENP-B阳性,一例（男61岁乙肝肝癌）抗组蛋白及抗dsDNA阳性,一例（女62岁乙肝肝癌合并类风湿关节炎）SS-A阳性。

2.1.4 ANA荧光模型 20例ANA阳性患者的荧光模型分别为:颗粒型10例,均质型4例,核仁型2例,核膜型1例,着丝点型1例,核仁+颗粒1例,核膜+核点1例。

2.2 自身抗体检出率与血清甲胎蛋白（AFP）含量的关系 83例原发性肝癌患者中75例进行了血清AFP检测,分析血清AFP含量与自身抗体检出率的关系,结果显示,AFP异常（AFP＞10.9 ng/m l）的患者与AFP正常的患者自身抗体检出率分别为36.8%（21/57）和22.2%（4/18）,二者差异无统计学意义。另外,AFP含量在10～500 ng/m l的患者与AFP大于1 000 ng/m l的患者自身抗体检出率很接近（38.2%及37.5%）,而AFP含量在500～1 000 ng/m l的患者自身抗体检出率稍低（28.6%）。但经 χ2检验,各组之间自身抗体检出率的差异无统计学意义。见表2。

表1 83例原发性肝癌患者自身抗体检测结果[例（%）]Tab.1 The detective Results of autoantibodies in 83 patients with HCC[n（%）]

表2 75例原发性肝癌患者血清AFP与自身抗体检出率的关系[例（%）]Tab.2 The association between AFP and autoantibodies in 75 patientswith HCC[n（%）]

表3 乙肝肝癌患者自身抗体检出率与HBV-DNA的关系[例（%）]Tab.3 The association between autoantibodies and HBV-DNA[n（%）]

2.3 乙肝肝癌组自身抗体检出率与DNA的关系乙肝肝癌组42例DNA阳性患者中17例（40.5%）自身抗体检测阳性;22例DNA阴性组中6例（27.3%）自身抗体阳性。两组自身抗体检出率进行比较,差异无统计学意义（χ2=1.09,P＞0.05）,见表3。

2.4 自身抗体与年龄及性别的关系 本次研究中对患者进行了年龄段的划分,结果显示自身抗体检出率最高的是60～69岁年龄组（66.7%）,＜70岁患者随年龄增长,自身抗体检出率呈现逐步上升的趋势,之后又呈下降趋势。80岁以上患者总共只有1例,为自身抗体阳性。

83例肝癌患者中男性58例,自身抗体检出率29.3%（17/58）;女性25例,自身抗体检出率56%（14/25）,男女患者自身抗体检出率差异有统计学意义（χ2=5.32,P＜0.05）。

3 讨论

83例肝癌患者血清中主要检出了ANA、CS、SMA和AMA四种自身抗体,总阳性率为37.3%（31/83）,未检出LKM（肝肾微粒体抗体）和LSP（肝特异性蛋白）抗体。检出率最高的是ANA,最低的是AMA,各抗体均以低滴度为主,这一结果与大多文献报道相一致[4-7]。资料显示病毒性肝炎及其相关疾病患者可产生LSP抗体,但这次研究中未检出,可能与研究病例少有关。

本次研究中对部分患者进行了抗核抗体谱分析,从检测结果显示肝癌患者抗核抗体靶抗原有Ro-52、CENP-B 、dsDNA、SS-A（出现 SS-A 阳性的患者同时伴有类风湿关节炎,所以此抗体的出现也可能与类风湿关节炎相关）等,这似乎提示肝癌患者的抗核抗体可以有多种靶抗原,或许还有某一特定靶抗原尚未发现,但本次研究中检测例数相对少,希望通过以后进一步增加研究对象加以证实,同时也期待着包被有更多抗原分子的检测膜条或其它更先进检测手段的出现,从而为各种自身抗体靶抗原特征研究创造条件,并进一步阐明它们与疾病发生发展的关系。通过对ANA荧光模型的观察发现,肝癌患者ANA虽可出现多种荧光模型,但仍以颗粒型为主。

ANA、CS、SMA和AMA都是非器官特异性自身抗体,它们可能不直接参与肝细胞的损伤,但可能以免疫复合物的形式加重肝脏损伤并引发肝外相关疾病,所以对于肝病患者如何调整机体免疫状态很重要,既要提高抗病毒抗肿瘤免疫力又要控制自身免疫反应,这也是免疫学领域的一大难题。本次研究中虽然丙肝肝癌例数少,但其自身抗体检出率（50.0%）高于乙肝肝癌（35.9%）这一结果却与文献报道[8,9]相符,即丙肝比乙肝患者更易出现自身免疫紊乱现象,所以,临床上对于丙肝的干扰素抗病毒治疗应该比乙肝更为谨慎。研究结果显示SMA在丙肝肝癌患者体内的检出频率高于乙肝,SMA是否是丙肝患者特征性自身抗体有待于进一步研究。

AFP是诊断原发性肝癌比较可靠的指标之一,在这次研究的83例患者中,有75例都进行了AFP的检测。为了了解AFP与原发性肝癌患者体内自身抗体之间的关系,本文对75例患者血清AFP含量与自身抗体检出率进行了分析,结果显示AFP异常的患者自身抗体检出率高于AFP正常的患者,另外,AFP含量10～500 ng/ml及＞1 000 ng/m l的患者自身抗体检出率很接近（38.2%及37.5%）,且均高于AFP含量 500～1 000 ng/m l的患者（28.6%）,这是不是提示我们,AFP含量处于中间水平时自身免疫反应弱,而过高或过低时自身免疫反应增强。检测结果显示肝癌患者自身免疫反应的强弱似乎体现在AFP含量的变化上,但就个案看,有五例患者AFP值一度超过35 350 ng/ml,但他们的自身抗体检出率为零,而18例AFP低于正常值的患者中却有4例检出自身抗体。血清AFP含量的高低与自身抗体检出率之间的关系还有待进一步探讨。

在我国,HBV及HCV的慢性感染是导致原发性肝癌最常见的原因。在本次研究中,83例原发性肝癌患者中64例都存在HBV慢性感染,占77.1%;16例有HCV慢性感染,占19.3%。这一结果符合我国乙肝高发的特点。另有三例既无HCV感染史（HCV IgG、IgM及HCV RNA阴性）,也没有HBV的现症感染情况（HBV DNA小于500 copies/m l,HBsAg阴性）,但这三例患者都有HBV既往感染史（三位患者都出现了HBV一至三种抗体阳性）,所以这三例患者仍不排除存在HBV的隐匿性感染现象,也就是说这三例患者肝癌的发生可能仍与HBV感染有着密切的关系。因此,从导致原发性肝癌的原因看,预防HBV及HCV感染就等于预防了90%以上肝癌的发生,所以预防接种及避免医源性病毒感染仍是我国避免肝癌发生的重要手段。

1 闫惠平,Winfried Stocker,贺立香.肝病患者自身抗体特征性的研究[J].中国免疫学杂志,2003;19（4）:278-281.

2 张海萍,闫惠平,冯 霞etal.乙肝病毒感染者血清抗核抗体特征及其临床相关性[J].首都医科大学学报,2007;28（2）:154-157.

3 李 颖,徐 鑫,刘 沛etal.慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义[J].肝脏,2007;12（1）:17-19.

4 冯 灏,殷国庆.抗核抗体在乙肝患者中的表现及意义[J].临床肝胆病杂志,2010;26（2）:189-193.

5 张利方,付丽萍,徐 娟etal.自身抗体在肝病患者诊断中的意义[J].现代检验医学杂志,2006;21（2）:70-71.

6 Squadrito G,PrevitiM,Lenzi Metal.High prevalence of non-organ-specific autoantibodies in Hepatitis C virus infected cirrhotic patients from southern Italy[J].Dig Dis Sci,2003;48:349-353.

7 周 力,王长嘉,路洪艳etal.慢性乙肝患者血清自身抗体检测的临床意义[J].中国卫生检验杂志,2007;17（9）:1662-1663.

8 吴赤红,徐小元,田庚善etal.慢性丙型肝炎患者自身抗体检测的研究[J].中华医学杂志,2006;86（6）:390-393.

9 周厚清,董 敏.丙型肝炎患者血清自身抗体检测的临床研究[J].中国卫生检验杂志,2009;19（1）:131-132.

[收稿2010-06-17 修回2010-07-13]

（编辑 倪 鹏）

Analysis of autoantibodies in 83 patientswith primary hepatic carcinnoma

ZHAOHai-Lin,YANHui-Ping,ZHANGHai-Ping.InfectionandImmunologyResearchCenter,BeijingYou′anHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China

Objective:To study the characteristics of autoantibodies in patientswith primary hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods:83 patients with primary hepatocellular carcinoma（HCC）were studied.Different autoantibodies were detected by indirect immunofluorescent assay（IIF,Euroimmuno,Germany）.Results:31 of 83 caseswere found autoantibodies（37.3%）,in whom 64 patientswere in HBV infection,with 23 autoantibodies positive（35.9%）.8were autoantibody-positive in 16 patientswith HCV infection（50.0%）.Therewas no significant differences between the two groups（P＞0.05）.24.1%（20/83）or12.1%（10/83）or 1.2%（1/83）patientswere positive forone,two or three kinds of autoantibodies respectively.Anti-nuclear antibody（ANA）was themost popular（24.1%）than others.Anti-cytoskeleton（CS）was 13.3%,whereas anti-smoothmuscle antibody（SMA）was 9.6%and anti-m itochond ria antibody（AMA）4.8%respectively.Itwas shown thatanti-Ro-52 or anti-CENP-Bwas positiveby ANA analysis.Comparing AFP normalwith abnormal patients,antoantibody rate（22.2%vs 36.8%）had no significantdifference.There were no remarkable difference between autoantibodies positivegroup and autoantibodies negative group forHBV-DNA.Conclusion:Non-organ-specific autoantibodies—ANA,CS,SMA and AMA can be detected in 37.3%patientswith HCC.The highest detection rate is ANA,the next is CSand SMA,and the lowest is AMA.Allof detected autoantibodies are shown with low titer（1∶100）.Concentration of AFP and autoantibodies is not shown significant correlation.There is no remarkable difference in autoantibodies between HBV-DNA positive group and negative group.

Hepatocellular carcinoma;Autoantibodies;Detection

R735.7

A

1000-484X（2010）12-1127-04

10.3969/j.issn.1000-484X.2010.12.016

①本文为北京市自然科学基金资助项目（No.7092046）

②云南省曲靖医学高等专科学校微生物与免疫教研室,曲靖 655000

赵海琳（1970年-）,女,硕士,副教授,主要从事微生物与免疫学教学工作;

及指导教师:闫惠平（1955年-）,女,研究员,主要从事自身免疫性肝病研究,E-mail:yhp503@vip.sina.com。