半枝莲水提工艺中野黄芩苷降解动力学研究

李一圣， 陈剑平， 何耀慧， 林荣锋， 黄晓其， 曾惠芳， 苏子仁*

(1.广州中医药大学，广东广州510006;2.广州中医药大学一附院药剂科，广东广州510405)

半枝莲是唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，其性味微苦、凉，具有清热解毒、化瘀利尿的功效［1］，主要化学成分为黄酮类、多糖、甾醇、有机酸、生物碱及其它类成分［2］;其主要有效成分野黄芩苷具有扩张血管、减少血小板数量和抑制血小板凝集等作用［3］。在半枝莲水提的试验过程中，发现不同浸泡条件下半枝莲水提液中野黄芩苷含量变化较大。因此，本文通过测定不同温度和浸泡时间下半枝莲水提液中野黄芩苷的含量，进而研究其降解动力学，为有效地提高野黄芩苷的提取率提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 DIONEX SUMMIT P680高效液相色谱仪(美国戴安公司)，Sartorius CP225D电子天平(北京赛多利斯公司)，实验室专用超纯水机(重庆利迪现代化技术设备有限公司)。

1.2 药材 半枝莲药材购自玉林市玉州区亿方中草药材经营部，经广州中医药大学苏子仁研究员鉴定系为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草。

1.3 试剂 野黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110842-200605);甲醇为色谱纯。

2 实验方法

2.1 半枝莲的提取 取半枝莲药材粗粉20 g，精密称定，加入12倍量相应温度的水浸泡，恒温保持相应的时间后(见表1)，迅速加热至沸腾，并保持微沸状态1 h，过滤，药渣再加10倍量的水煎煮2次，每次1 h，过滤，合并滤液，加水定容至1 000 mL。每个温度的每个时间点分别制备一份样品。

表1 半枝莲不同浸泡条件的温度-时间考察指标点

2.2 色谱条件［1］色谱柱为Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇-水-醋酸(35 ∶61 ∶4)为流动相，检测波长为335 nm，柱温为25℃，流速为1.0 mL/min。理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于1 500。

2.3 供试品溶液的制备 取上述定容后的半枝莲水提液，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学确认

2.4.1 线性范围的考察 精密吸取野黄芩苷对照品溶液(68.48 μg/mL)1、2、4、6、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标进行线性回归分析，得出回归方程为Y=2 489 599.70X－2 196.6(r=0.999 9)，表明野黄芩苷进样量在 0.068 48～1.369 6 μg范围内线性关系良好。

2.4.2 精密度试验 精密吸取野黄芩苷对照品溶液(68.48 μg/mL)10 μL，重复进样 5 次，测定峰面积。结果峰面积值的RSD=1.24%。表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 分别于0、2、4、6、8 h精密吸取同一供试品溶液10 μL进样，测得峰面积。结果RSD为2.45%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验 取同一样品，平行制备成5份供试品溶液，按上述色谱条件进样10 μL，测定峰面积并计算其含量。结果RSD=1.34%，表明该法重复性良好。

2.4.5 回收率试验 取已知含量的水提液5份，各精密加入野黄芩苷适量，制备成供试品溶液，按上述色谱条件分别进样10 μL，测定野黄芩苷含量并计算回收率。结果其回收率均在95%～105%之间，平均回收率为99.65%，RSD为0.84%，表明该法加样回收良好。结果见表2。

表2 回收率测定结果

2.5 样品测定 分别精密吸取各份供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定野黄芩苷含量。对照品及供试品的色谱图见图1，野黄芩苷含量的测定结果见表3。

表3 不同浸泡条件下半枝莲水提液中野黄芩苷的含量测定结果

图1 野黄芩苷对照品(A)和供试品(B)HPLC图

2.6 降解动力学方程的拟合 对不同浸泡条件下半枝莲水提液中野黄芩苷的含量测定结果，以野黄芩苷含量(C)和时间(t)作图，得出不同浸泡条件下半枝莲水提液中野黄芩苷的含量变化曲线(见图2);再分别按零级、一级和二级动力学方程进行拟合，得出相应的动力学方程和线性相关系数，拟合结果见表4。

表4 不同温度下半枝莲水提工艺中野黄芩苷降解动力学方程

图2 不同浸泡条件下半枝莲水提液中野黄芩苷的含量变化曲线

3 结果与讨论

3.1 由图2的变化曲线可见，在20～60℃浸泡条件下，半枝莲水提液中野黄芩苷含量的变化呈降解特征，以30～40℃降解速度最快;而在70℃以上浸泡，半枝莲水提液中野黄芩苷含量保持不变，提取率较高。同时结合表4可知，半枝莲药材在20℃浸泡时野黄芩苷的降解动力学符合一级动力学特征，而30℃、40℃和50℃浸泡时野黄芩苷的降解动力学符合二级动力学特征。

3.2 半枝莲药材在水提过程中，不同的温度和浸泡时间对水提液中野黄芩苷的含量变化有明显的影响，初步推断半枝莲药材在浸泡的过程中，野黄芩苷存在酶降解反应。实验结果表明，野黄芩苷的含量变化与酶降解反应的规律相吻合，即温度由低升高时，酶降解反应速率加快，但随着温度的进一步升高，酶蛋白受热逐渐变性失活，反应速率降低。

3.3 在实际生产的过程中，若处方中含有半枝莲，水提时宜在70℃以上进行投料或浸泡处理，使酶失去活性而减少野黄芩苷的降解，起到“杀酶保苷”的作用，从而有效地提高野黄芩苷的提取率。

［1］中国药典［S］.一部.2005:77-78.

［2］郑虎占，董泽宏，余 靖.中药现代研究与应用［M］.北京:学苑出版社，1997:1685.

［3］崔建梅，吴 淞.野黄芩苷的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2003，15(3):255.