抗溃结复发方对UC模型大鼠血浆TXB2、6-Keto-PGF1α 含量的影响

安贺军 ，王新月 *，于 玫 ，沈 静

（1.解放军第306医院中医科，北京 100101；2.北京中医药大学东直门医院消化科，北京100700；3.北京中医药大学，北京 100029）

·方药研究·

抗溃结复发方对UC模型大鼠血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量的影响

安贺军1，王新月2*，于 玫3，沈 静3

（1.解放军第306医院中医科，北京 100101；2.北京中医药大学东直门医院消化科，北京100700；3.北京中医药大学，北京 100029）

目的 探讨抗溃结复发方对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值的影响。方法 用三硝基苯磺酸（TNBS）复制实验性大鼠UC模型，随机分为模型组、正常组、奥沙拉秦钠胶囊剂（畅美）对照组、抗溃结复发方组。结果 给药10 d后，两个给药组皆可降低血浆TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值；给药 30 d后，西药组血浆 TXB2水平及 TXB2/6-Keto-PGF1α比值低于中药组(P＜0.01，P＜0.05）；停药10 d后，中药组TXB2/6-Keto-PGF1α比值低于西药组(P＜0.01）。结论 抗溃结复发方与奥沙拉秦钠胶囊剂（畅美）比较，发挥作用较晚，维持时间长，在抑制血小板活化方面远期效果优于西药畅美，可能在UC缓解期促进病情康复和减少复发方面发挥作用。

抗溃结复发方；溃疡性结肠炎；TXB2；6-Keto-PGF1α；大鼠；黄芪；白术；蒲黄

溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种以慢性炎症和溃疡形成为主要病理特点的消化道疾病。由于其患病率逐渐增加、高复发率和结肠直肠癌发生关系密切而成为目前研究热点；本研究观察了以益气活血解毒立法的抗溃结复发方对三硝基苯磺酸（TNBS）诱发的UC模型大鼠血浆 TXB2、6-Keto-PGF1α含量及 TXB2/6-Keto-PGF1α比值的影响，探讨其抗溃疡性结肠炎复发的作用机制。现将实验方法及结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级健康雄性SD大鼠，体质量160～200 g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（京）2006-0006。

1.1.2 药物 抗溃结复发方（生黄芪30 g，炒白术10 g，炒五灵脂 10 g，赤白芍各 10 g，生蒲黄 10 g，当归10 g，焦槟榔 10 g，煨木香 10 g，黄连 10 g，黄柏 10 g，连翘20 g），由北京中医药大学东直门医院制剂室煎制；浓煎为生药量5 g/mL灌胃用。奥沙拉秦钠胶囊剂（畅美）：由天津力生制药有限公司生产，国药准字H20000247，0.25 g/粒，蒸馏水配成混悬液，0.067 g/mL溶液，给药剂量均按60 kg成年人体表面积换算。

1.1.3 试剂 2,4,6—三硝基苯磺酸（TNBS），为 Sigma公司产品，批号：074K007；水合氯醛，购自恒业中远化工有限公司。

1.1.4 仪器 离心机：北京医用离心机厂生产，型号：LDZ5-2；Labsystems Dragon Wellscan MK-3 全自动多功能酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 造模[1-2]将大鼠正常饲养1周后，禁食24 h（不禁水），称体质量，100 mg/L水合氯醛（3.8 mL/kg）腹腔麻醉，将一直径2 mm、长约12 cm的橡胶管由大鼠肛门轻缓插入，深约8～10 cm，然后以0.85 mL TNBS/乙醇液（120 mg/kg TNBS+体积分数 50%乙醇 0.25 mL）,约 5 s灌注完毕；将造模鼠倒置8 min后（尽量减少造模试剂流出）放回笼内。

1.2.2 分组及给药方法 动物分组及给药 将120只大鼠随机分为4组，其中模型组、奥沙拉秦钠胶囊剂（以下简称西药组）、抗溃结复发方（以下简称中药组）每组各30只，均予造模；正常组30只，不予造模，但与其余3组同步禁食、麻醉，同步饲养观察。于造模后第2天起：正常组、模型组以蒸馏水灌胃，每次1 mL/只；西药组以畅美混悬液按0.266 g/（kg·d）剂量给药；中药组以抗溃结复发方按 20 g/（kg·d）剂量给药，均每天 1 次，共 40 d。

1.2.3 标本处理 分别于给药后10、30 d和停药后10 d，各组随机取10只大鼠，以100 mg/L水合氯醛（3.8 mL/kg）腹腔麻醉，腹主动脉取血，2%EDTA-Na2-0.7%NaCl（2%乙二胺四乙酸二钠盐及0.7%氯化钠）抗凝，立即分离血浆，放-70℃冰箱保存待检。

1.2.4血浆 TXB2、6-Keto-PGF1α含量测定 大鼠血浆TXB2、6-Keto-PGF1α试剂盒，购自苏州医学院血栓和止血研究室。按放射免疫分析试剂盒说明书操作。

1.3 统计学分析

所有数据均采用SPSS 13.0 for Windows统计软件。组间比较用单因素方差分析，多个样本均数比较用重复测量数据的方差分析，采用LSD检验方法。

2 结果

2.1 各组血浆TXB2含量的比较

模型组造模10 d时，血浆TXB2含量显著升高，与正常组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；给药30 d后，西药组含量显著降低，与中药组相比差异有统计学意义（P＜0.01）；停药10 d时中药组含量明显降低，与西药组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

表1 各组UC模型大鼠血浆TXB2含量的比较（±s，pg/mL）

表1 各组UC模型大鼠血浆TXB2含量的比较（±s，pg/mL）

注：与正常组比较 *P＜0.05；与西药组比较◆P＜0.01，△P＞0.05。

组 别正常组模型组中药组西药组给药后10 d 386.500±218.623 990.811±560.593*756.014±574.440 893.781±698.700给药后30 d 388.415±218.625 409.213±337.622 728.711±324.030◆284.721±197.525停药后10 d 390.325±218.622 240.341±170.122 248.531±139.831△230.372±92.982

2.2 各组血浆6-Keto-PGF1α含量比较

给药10 d后，各组血浆6-Keto-PGF1α含量与正常组相比均升高，以西药组升高明显，与正常组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。给药30 d后，模型组、西药组含量下降，中药组升高，与模型组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。停药后 10 d时，各组含量均下降，中药组、模型组、西药组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。

2.3 各组血浆TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比较

模型组造模10 d后，TXB2/6-Keto-PGF1α比值明显高于正常组（P＜0.01）；中药组给药10 d后与同期各组相比差异无统计学意义（P＞0.05），停药后10 d中药组与各组相比差异有统计学意义（P＜0.01）；结果见表3。

表2 各组UC模型大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量的比较（±s，pg/mL）

表2 各组UC模型大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量的比较（±s，pg/mL）

注：与正常组比较*P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05；与西药组、中药组比较□P＜0.05。

组 别正常组模型组中药组西药组给药后10 d 37.531±13.060 56.746±24.952 57.963±33.581 80.084±41.575*给药后30 d 35.380±13.066 44.792±18.701 62.555±19.673△65.426±13.681△停药后10 d 34.445±13.066□41.391±15.981 58.072±32.431 49.103±10.792

表3 各组UC模型大鼠血浆TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比较（±s）

表3 各组UC模型大鼠血浆TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比较（±s）

注：与正常组比较*P＜0.01；与停药10 d后各组比较△△P＜0.01。

组 别正常组模型组中药组西药组给药后10 d 8.929±5.847 17.905±1.320*13.295±5.262 12.191±4.090给药后30 d 9.426±5.847 10.615±8.782 11.117±3.353 6.761±1.844□停药后10 d 8.913±4.525 7.099±1.356 3.598±0.558△△6.973±0.651□

3 讨论

溃疡性结肠炎发病与血小板活化关系密切，血小板增多是炎症性肠病活动期的一种标志[3]；血小板活化临床上常用的标记物有血栓烷A2（TXA2）、血小板表面纤维蛋白原受体（PAC-1）、血小板第四因子（PF4)及血小板α-颗粒膜糖蛋白（CD62P）等，其中血栓烷A2(TXA2)常作为测定血小板活化程度的敏感与特异性高的指标之一。TXA2具有很强的促进血管收缩和血小板聚集的作用，可导致血管内广泛微血栓形成，并能加速和促进血小板活化，血栓烷B2(TXB2)是TXA2的无活性代谢产物，研究[4-5]表明，UC患者体内TXB2升高，血小板黏附、聚集等功能增强。6-酮前列腺素 F1α(6-keto-PGF1α)是前列环素(PGI2)的代谢产物，PGI是血管内皮细胞合成和释放的一种抗血小板聚集和具有舒张血管功能的生物活性物质，TXA2和PGI2形成了一对生理作用完全相反的调控系统，是机体内调节血小板聚集的一对生物活性物质，二者的平衡是影响血小板动能的主要因素。正常情况下两者处于动态平衡，从而维持着血液的正常状态，它们的活性很强，PGI2和TXA2在体内均不稳定，迅速代谢生成 TXB2与 6-Keto-PGF1α，TXB2及 6-keto-PGF1a分别是这两者的稳定代谢产物，通过检测血浆TXB2和6-keto-PGF1α的水平，可以间接了解TXA2和PGI2的水平，借以评价机体内血液循环状态。

抗溃结复发方以黄芪、白术为君，黄芪益卫固表，补中气，升清气，托疮毒，利小便，能补脾胃之不足，并促进局部内疡之收敛；白术甘温补中，苦温燥湿，既能补脾益气，又能燥湿利水。赤、白芍伍用，白芍敛阴，赤芍凉血，二药相合，而退血分之热，白芍柔肝，赤芍行血，二药参合，止痛之功益彰。当归补血活血，消肿止痛，排脓生肌。五灵脂炒用气味俱厚，专走血分，功专活血行瘀，行气止痛；蒲黄生用辛香行散，性凉而利，专入血分，功善凉血止血，活血消瘀。二药伍用，通利血脉、活血散瘀、消肿止痛力量增强。焦槟榔消积行气力强，用于治疗泻痢后重。黄连配黄柏燥湿清热，凉血解毒而止大便脓血。木香行肠胃滞气，疏肝开郁，和胃健脾。木香配黄连，以木香行肠胃滞气而除里急后重，兼能芳香化湿。连翘清热解毒，消痈散结，前人称之为疮家圣药，用于热毒蕴结所致的各种疮毒痈肿，与溃结之内疡病机暗合。

3.1 抗溃结复发方对UC模型大鼠血浆TXB2含量的影响

在UC模型大鼠炎症急性期（造模10 d时）血小板被大量激活，血液处于高凝状态；在中期（治疗30 d时）西药在降低血浆TXB2含量方面作用明显，优于中药组；在缓解期（停药10 d时）中药下调血浆TXB2含量方面作用明显，说明中西药物均有抑制血小板活化作用，从而减轻血管收缩和血小板聚集状态；中药起效较西药慢，在缓解期抑制血小板活化明显，这一点可能在减少溃结复发方面发挥作用。

3.2 抗溃结复发方对UC模型大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量影响

在UC急性炎症期血小板活化，机体为调节血小板聚集状态，造模各组血浆6-Keto-PGF1α含量升高，以维持TXB2及6-keto-PGF1a两者相对的动态平衡，此阶段西药抗血小板聚集和舒张血管功能明显。在中期，大鼠应激或调节能力减弱，模型组含量下降；此期西药作用减弱，西药组含量亦下降；中药组在药物作用下上调。中西药物在抗血小板聚集和舒张血管方面均有作用，西药较中药发挥作用早，但持续时间短；中药发挥作用较晚，但维持时间长。

3.3 抗溃结复发方对UC模型大鼠血浆TXB2/6-Keto-PGF1α 比值的影响

在UC模型大鼠炎症急性期血小板被大量激活，血液处于高凝状态；中西药物在抑制血小板活化方面均发挥作用，但西药作用明显；在中期西药继续发挥作用，缓解期作用减弱；中药发挥作用起效慢，在急性期和中期与西药相比作用不明显，缓解期作用明显，将比值降到正常以下并低于模型组和西药组。中药发挥作用较晚，维持时间长，在抑制血小板活化方面远期效果优于西药，可能在UC缓解期促进病情康复和减少复发方面发挥作用。

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Influence of prescription for ulcerative colitis relapse on content of TXB2and 6-Keto-PGF1αin rats with US

AN He-jun,WANG Xin-yue,YU Mei,SHEN Jing
（306 Hospital of People's Liberation Army,Beijing 100101,China）

ObjectiveTo investigate influence of prescription for ulcerative colitis anti-relapse(PUCA)on content of TXB2and 6-Keto-PGF1αand ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin blood plasma of ulcerative colitis model in rats.MethodsThe rat models were duplicated with TNBS and randomly divided into model group,normal group,olsalazine sodium control group and PUCA group.ResultsPlasma 6-Keto-PGF1αcontent in both treatment groups was advanced,but not significantly difference（P＞0.05）.After treating 10 days,TXB2content and ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin both treatment groups were reduced.After treating 30 days,TXB2content and ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin western medicine group was remarkably lower than these in Chinese medicine group(P＜0.01 and P＜0.05).After stopping treatment 10 days,the ratio in Chinese medicine group was obviously lower than that in western medicine group(P＜0.05).ConclusionCompared with western medicine,theprescription iseffectivelater,butmaintenancetimemore,and strongerto inhibitthe active blood platelet,which suggeststhattheChinese medicine maybe plays a role in promoting convalescence and decreasing the relapse in the remission period of UC.

prescription for anti-relapse of UC;ulcerative colitis;TXB2,6-Keto-PGF1α;ratio of TXB2/6-Keto-PGF1α;rats;Radix astragal;white atractylodes rhizome;cattail pollen

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2010.11.005.015.03

2010-11-02

国家自然科学基金资助项目（30572390）。

安贺军（1969-），女，北京人，医学博士，主治医师，主要从事中医内科学专业临床、科研工作。

* 王新月，女，主任医师，博士研究生导师，Tel：010-84013361。

（本文编辑 彭芝配）