黄花补血草组织培养试验研究

常黎民　张文莲

摘要通过对野生黄花补血草组织培养与快速繁殖的研究,得出:丛生芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;丛生芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;在1/2 MS+NAA 0.5mg/L培养基中培养健壮单芽4周内生根率达63%;瓶苗常规驯化后选用国产泥炭土炼苗成活率最高,为46%。

关键词黄花补血草;组织培养;丛生芽;增殖培养;生根率;炼苗

中图分类号 S567.23+9 文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)15-0080-02

黄花补血草(Limoniumaureum),白花丹科补血草属植物,多年生草本,株高9～40cm,叶基生,灰绿色,矩圆状匙形至倒披针形,伞房状圆锥花序,花萼金黄色,漏斗状,膜质,因其金黄色膜质花萼长时间不落,在干旱、植物稀少的荒漠地区极为醒目,且具有补血作用,故又称金色补血草、金匙叶草。多生于滩地、湖盆、戈壁、石质山坡、流动沙丘等干旱荒漠生境下。该植物耐盐碱、耐贫瘠、耐干旱,是一种耐盐性很强的旱生泌盐植物,在年降雨量300mm以上的地区不需浇水可正常生长,是草坪用水量的1/10;在气温-36℃以内可安全越冬;土壤pH值9以下、含盐量0.4%以内可正常生长开花。尤为奇特的是其膜质花萼在6～9月无风季节,保持不落,如一团团金色火焰傲立于荒漠戈壁甚至流动沙丘上。是干旱荒漠地区为数不多的野生花卉之一,花色艳美,繁密华贵,保持时间极长,可作插花中的配材和衬花,也可用来制作干花,其韵味独特,是插花艺术中不可多得的花材,又是防风固沙的优良植物。其开发利用前景广泛。

1材料与方法

1.1试验材料

外植体材料是2003年9月从西宁市火烧沟野生植株上采收的种子。

1.2试验方法

1.2.1外植体的清洗、灭菌。种子流水冲洗30min→超净台上无菌水冲洗2次→75%的酒精浸泡30s→无菌水冲洗4次→0.1%升汞浸泡10min→无菌水冲洗8次→无菌滤纸吸干水分→接到预备好的培养基中。

1.2.2基本培养基及培养条件。以MS为基本培养基,分别附加激素6-BA(0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L)和NAA(0mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L)进行丛生芽的诱导及增殖培养;以MS为基本培养基,选择1/2无机盐浓度和NAA(0mg/L、0.1 mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L)、IBA(0mg/L、0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、 1.0mg/L)进行不定根的培养。以上培养基中均附加食用白糖30g/L、琼脂5.3g/L,pH值5.8。培养条件:温度(20±2)℃;光照强度2 000～2 500Lx;光照时数12h/d。

2结果与分析

2.1不同激素浓度及配比对丛生芽诱导的影响

接种3d后种子开始萌发;5d时30%展叶,芽苗叶片大部分呈红色,少数呈绿色;15d时展叶芽苗基部肿大生长愈伤组织;29d时发现明显的丛生芽生长(见表1)。

从表1可看出,黄花补血草种子在添加或不添加激素的培养基中均能发芽,含有激素的培养基发芽率较高,其中6-BA/NAA为5.0mg/L的培养基最高。与不加任何激素的对照培养基对比,发现含有激素的培养基均能诱导出愈伤组织和丛生芽,且6-BA/NAA为5.0mg/L的培养基其愈伤组织和丛生芽诱导率最高且相等。因此,综合激素浓度对芽苗生长的影响,在黄花补血草种子无菌播种诱导培养中选择MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L培养基比较理想。

2.2不同激素浓度及配比对增殖培养的影响

根据诱导培养中6-BA/NAA为5.0mg/L时丛生芽过于茂盛的试验结果,在增殖培养基设置中,以尽量降低单项激素浓度为原则进行设置,筛选最佳增殖培养基。接种后30d统计结果见表2。

从表2可看出,在不含任何激素的增殖培养基中黄花补血草表现出良好的生长状态,但增殖系数太低;激素总含量较大时,增生的丛生芽较多、较密,且长势表现不好;在激素总含量较低的培养基中,丛生芽生长表现良好,且增殖系数较高。因此,在黄花补血草的增殖培养中,选择MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.10mg/L比较经济、快速、保质保量。

2.3不同的激素浓度及配比对生根培养的影响

在黄花补血草增殖培养不含激素的培养基中,个别植株有根系生长现象,说明黄花补血草生根,在没有外源生长素存在的情况下也能生根,但生根率很低。因此,在黄花补血草的生根培养中采用了常规的1/2 MS附加一定浓度的NAA或IBA进行生根培养,并筛选最佳生根培养基。25d观察结果见表3。

从表3可看出,生长素IBA和NAA对黄花补血草的生根均有影响。就生根率进行比较,在浓度相同的情况下,含有NAA的培养基比含有IBA的培养基生根率高,且根系健壮。通过生根培养发现,黄花补血草生根较慢,生根时间不一致。从试验结果可看出,NAA在0.5mg/L与1.0mg/L的浓度下生根率及根系长势无明显的区别,故在黄花补血草的生根培养中选择1/2 MS+NAA 0.5mg/L为生根培养基。

2.4不同炼苗基质对生根苗炼苗移栽的影响

黄花补血草生根时间不一致,给炼苗移栽带来了一定的难度。在炼苗试验时,选择平均根长达5cm左右的瓶苗,在温室闭瓶炼苗3d,开瓶炼苗2d后,将根部培养基冲洗干净,用1 000IU农用链霉素和多菌灵浸根后栽入经消毒处理过的不同基质设置中。栽植后土壤湿度不宜过大,保持空气湿度不低于80%,种植后前7d用50%遮荫网进行遮盖,20d后调查其成活率,以植株直立、萌发新叶为幼苗成活的标准(见表4)。

由表4可知,黄花补血草组培瓶苗经过常规驯化后移栽,国产泥炭生长情况比黑土和园土好,但成活率依然小于50%。要最终达到快速繁殖进行大批量开发应用的目的,还有许多问题有待于进一步研究和探讨。

3结论与讨论

采用种子无菌播种诱导进行快速繁殖黄花补血草,从根本上解决了黄花补血草因结种量少、采收困难等原因造成的常规繁殖慢、需求多的难题,在短期内可为苗木市场提供大量的优质种苗。试验研究表明:选用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基,其外植体诱导率达28.6%,丛生芽诱导率达28.6%;选用MS+6-BA0.5mg/L +NAA0.1mg/L培养基进行丛生芽增殖培养,可得到健壮的黄花补血草无菌丛生芽,增殖系数达10;在1/2MS+NAA0.5mg/L培养基中培养健壮单芽4周内生根率达63%;瓶苗常规驯化后选用国产泥炭土炼苗,成活率为46%。

4参考文献

[1] 西宁市植物志编辑委员会.西宁植物志[M].青海:中国藏学出版社,1999.

[2] 郝玉兰,徐杰,闫瑞霞.黄花补血草的组织培养及快速繁殖[J].内蒙古师范大学学报,2006(4):482-483.