自动生化分析仪参数设置技巧

孟献荣　丁书亚　甘来军

【摘要】随着检验医学的发展，自动化仪器在一些大中小医院都得到了进一步使用，尤其是自动生化分析仪基本普及到了乡镇卫生院一级，正确设置参数是使用好仪器得出可靠结果的重要环节。

【关键词】参数；设置；生化分析仪

【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)10-0136-01

1基本原理及主要参数

了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。生化分析仪根据自动化程度分半自动和全自动，从目前试剂盒供应情况来看，主要的测定方法为：终点法（包括一点终点法和两点终点法）、速率法（连续检测法）、速率两点法（两点法），后两种统称动力学法。

2主要参数设置的技巧

2.1方法类型可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法，全自动生化仪单试剂选择一点终点法，而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法，尿素氮、肌酐测定等用两点法。

2.2测定波长测定波长选择有三个主要条件：(1)待测物质在该波长下的光吸收最大。(2)其吸收峰宜较宽而钝，(3)常见干扰物在该波长下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。有些仪器波长选择受滤光片数量限制，应该就近选择为原则。

2.3测定温度一般全自动生化仪都是37℃，而半自动生化仪有室温、25℃、30℃、37℃等，终点法由于反应在机外进行，选择室温可以减少仪器温度调整时间，提高工作效率，而速率法和两点法都选择37℃比较合适。

2.4样本体积分数样品体积分数即样品体积与反应液总体积的比值(SV／TV)。酶活力测定中，样品在总体积中的比例应在10％以下。一般来说，待测物质在样品中含量低的、生理波动范围大的，样品用量较大。如Trinder反应测定血清葡萄糖、胆固醇等，样品试剂比例多为1：100，测定血尿酸或高密度脂蛋白胆固醇，常增加为1：50；ALT和AST的样品试剂比例多为1：10至1：20。方法灵敏、吸光度高的实验方法，样品试剂比例小,如白蛋白BCG法，样品试剂比例常为1：200。肌酐Jaffe氏法监测时间短、吸光度值较低，样品试剂比例多为1：10。一般应以试剂说明为准，不宜轻易改动。可根据最终反应液的量来计算样本量和试剂量。

2.5吸液量主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数，原则是吸入量不得大于或等于反应液总体积，否则会导致吸空形成比色池气泡，最好留100～200μl的余地。

2.6延迟时间延迟时间(Delay Time)指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。延迟时间的选择取决于被测物质的浓度（酶的活性）大小、反应速度的快慢、酶促反应的级数、样品中干扰物消除所需的时间等。比如：CHE活性高仅需20～30秒，LDH一级反应需30～40秒，ALT需40～60秒，AST需60～75秒，CK需90～120秒。半自动生化仪上酶活性连续监测法的延迟时间设定,由于只能单份样品逐一测定，若延迟时问全部设置在仪器内，每个延迟时间加监测时间至少1分钟以上，守候时间较长。工作量大时，可以根据仪器控温、加样及读数和试剂特点，以及室温情况，将延迟时问挪一部分到机外，套式操作，但要确保机内延迟时间不要进入线性反应期。兼顾延迟时间和监测时间反应时间是有限制的。在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底物耗尽。

2.7监测时间酶促反应延迟期后，在过量底物的存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即酶促反应以恒定的速率进行，不受底物浓度的影响，这段时间称为线性反应期或零级反应期，自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90-120s或至少4点（3个ΔA），少于3个ΔA不能称为连续监测法，因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽，可测范围变窄。

2.8标准液浓度终点法和两点法必须设置标准，选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液，但是部分项目标准液定标偏差太大，我们使用的是干粉复合罗氏校准液，复溶后分装冷冻保存，只要复溶的水质保证，避免反复冻融，校准的结果还是很满意的。注意校准液靶值获得的方法学，方法不同耙值是有差异的，比较典型的是ALP测定有IFCC和DGKC法，差异比较大，不可简单套用。

2.9K值速率法测定无需带标准或做标准曲线，首先确定样本量和工作试剂量，再根据被测物质的摩尔消光系数，就可按速率法计算公式计算出因素K值了。K=TV×106/(ε×SV×L), TV为反应液总体积，SV为样本体积，L为比色杯光径（cm），ε为毫摩尔消光系数，如NADH/NADPH340nm为6.22，对硝基苯胺405nm为9.9，5-氨基-2-硝基苯甲酸405nm为9.5，对硝基酚405nm为10.5，5-硫代-2-硝基苯甲酸405nm为13.3。

2.10试剂吸光度上下限有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限，主要是用来监测试剂的质量的，但是试剂吸光度上限和下限不是试剂质量的唯一指针。因此，一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规定限值内，但质控物测定结果连续偏低，病人结果因每天标本少而难以判断，最后发现是试剂质量下降。

(收稿日期：2009.04.09)