ＲＰ－ＨＰＬＣ测定杜仲叶京尼平苷的含量

陈燕平　孙利伟　邓卫清

【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱法同时测定杜仲叶京尼平苷含量的方法。方法 高效液相色谱法。结果 杜仲叶京尼平苷在0.26~2.60 μg范围内线形关系良好（r=0.999 9），平均加样回收率99.94%，RSD=0.6%（n=6）。结论 成分的峰分离效果好，其测定方法操作简便、准确、重复性良好，可作为杜仲叶中京尼平苷的质量控制方法。

【关键词】 RP-HPLC法；杜仲叶；京尼平苷

The determination of geniposide in folium cortex eucommia by RP-HPLC

CHEN Yan-ping, SUN Li-wei, DENG Wei-qing.Xinxiang Central Hospital,Henan Xinxiang 453000，China

【Abstract】 Objective To establish a new RP-HPLC method for simultaneous determination of geniposide in folium cortex eucommia.Methods HPLC method.Results The standard geniposide(showed a good linear correlation within the concentration of 0.26~2.60 μg，（r=0.999 9），the average recovery of the sample was 99.94%，RSD=0.6%（n=6）.Conclusion The peaks of the components were separated effectly，the method is simple，accurate and reproducible and can be used for the quality control of geniposide in folium cortex eucommia.

【Key words】 RP-HPLC； Eucommia ulmoides oliv.leaf；Geniposide

杜仲（Eucommia uimoides Oliv.）具有消炎抑菌、补肾降压、增强免疫功能及抗癌、抗疲劳、抗衰老、止痛镇静、补肝肾、强筋骨和安胎等作用［1，2］，是我国珍稀濒危二级保护植物，传统以皮入药。杜仲叶因其化学成分、药效与杜仲皮相似而代皮入药［3］，2005版中国药典将绿原酸定为评价杜仲叶质量优劣的主要技术指标［4］。有报道京尼平苷(geniposide,GP) 、京尼平苷酸( geniposidic acid,GA) 及绿原酸(chlorogenic acid,CGA) 为杜仲中重要的生物活性成分［5,6］，近几年，以杜仲叶为主开发了很多系列保健品、药品。为了有效地控制杜仲叶的质量，本文采用反相高效液相色谱法测定了杜仲叶中京尼平苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10A型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10AVP紫外检测器（日本岛津），浙大智达N2000色谱工作站，METILER TOLEDO AG135十万分之一电子天平；TP300超声波清洗机（北京天鹏电子新技术有限责任公司）。

1.2 试药 甲醇为色谱纯（天津四友精细化工试剂厂），水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯；京尼平苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号 110749-200613，供含量测定用）；杜仲叶2008年9月采自河南省灵宝市中国林科院经济林研究开发中心杜仲研究基地，经笔者鉴定为杜仲科植物杜仲Eucommia uimoides Oliv.的干燥叶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil-C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(17:83:1.5),流速1.0 ml/min；检测波长240 nm；柱温25℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取京尼平苷（GP）对照品1.3 mg置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得。

2.3 供试品溶液的制备与测定 精密称取杜仲叶粉末（过三号筛）约0.25 g，定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25 ml，称定重量，超声处理60 min 3次，放冷至室温用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，再经0.45 μm微孔滤膜滤过，备用。

2.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2”项下的对照品溶液2、4、6、10、15、20 μl进样。按HPLC条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，进行线性回归分析,京尼平苷回归方程Y=2×10 6X+54 355，r=0.999 9，在0.26~2.60 μg有很好的线性。

2.5 稳定性试验 取杜仲叶供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h进样20 μl，计算京尼平苷峰面积积分值的RSD=1.50%，样品在12 h内稳定。

2.6 精密度试验 对同一杜仲叶供试品溶液连续进样5次，每次20 μl，分别计算含量，结果京尼平苷含量的RSD=0.58%（n=5）。

2.7 回收率试验 取同一批已知含量的杜仲叶粉末6份，分别加入0.13 mg/ml的京尼平苷对照品溶液1 ml、按“2.3”项下的制备与测定项下所述方法制得溶液并测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.8 样品测定 取同一批样品6份，按“2.3”项下供试品溶液的制备项下所述方法进行操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，京尼平苷保留时间45 min，计算得京尼平苷含量0.07%。样品溶液、对照品溶液的色谱图见图1、2。

3 小结

在测定波长的选择上，取京尼平苷对照品置于190~400 nm波长范围内进行光谱扫描，选定240 nm为测定波长，分离效果好，无干扰。在提取溶媒选择上，笔者分别用纯水、25%、50%、75%、纯甲醇提取，测定结果显示50%甲醇溶液提取率相对最高。

笔者采用RP-HPLC法测定了杜仲叶中京尼平苷的含量，该方法快速、准确、操作简便，重现性好，可作为杜仲叶中重要成分质量控制的方法；从而为杜仲叶综合研究开发提供依据一定理论依据。

参 考 文 献

［1］ 赵军太，张诚.杜仲的不同部位的化学成分研究与应用.实用医技杂志，2003，10（9）：1025-1026.

［2］ 戚向阳，陈维军，张声华.反相高效液相色谱法测定杜仲中京尼平苷、京尼平苷酸及绿原酸的含量.药物分析杂志，2000，20（1）：22.

［3］ 李家实,阎玉凝.杜仲皮与叶化学成分初步研究.中药通报,1986,11(8):41.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典.化学工业出版社,2005:114-115.

［5］ 张康健,张檀.中国神树-杜仲.经济管理出版社,1997.

［6］ 肖崇厚.中药化学.上海科学技术出版社,1987：396.