分子信标检测限制性内切酶活性的新型荧光分析方法

霍希琴　颜鸿飞　李　军　周兴旺　李　伟　羊小海

摘要：利用分子信标被切割后荧光信号的变化，发展了一种简便的检测限制性内切酶活性的新型荧光分析方法。以限制性内切酶Xsp I为例，将其识别位点嵌入具有茎环结构的分子信标探针(Molecular Beacon，MB)的环状部分。利用这种分子信标在溶液中形成的瞬时二聚体结构，实现了限制性内切酶对分子信标的切割。在优化的条件下。反应初速度与酶的浓度成正比，线性范围为0.05～50U/mL，检测限为0.05U.mL。通过改变分子信标环部的识别位点的序列，还可以检测其他限制性内切酶如Alu I的活性。

关键词：分子信标；荧光分析；限制性内切酶

中图分类号：Q55文献标识码：A文章编号：1007－7847(2009)01－0006－05