消痤宁乳膏的药效学研究

陈　颖

（上海市普陀区人民医院，上海 200060）お

摘 要：痤疮为常见的慢性毛囊皮脂腺炎症性皮肤病，发病率达15％以上。青春期男女，可有不同程度的皮损，其临床表现为黑头、粉刺、丘疹、脓疤、囊肿、结节，并可见瘫痕形成。病情较重者需要治疗，然而迄今尚无理想的治疗药物，寻找治疗痤疮的有效药物，成为皮肤美容方面的热门课题之一。笔者采用高效液相色谱法（HPLC）测定消痤宁乳膏中主要有效成分克林霉素和甲硝哇的含量，并拟定其质量标准草案，进行药效学研究。

关键词：消痤宁乳膏；痤疮；药效

中图分类号：R969文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0019-02オ

1 材料

1.1 动物

昆明小鼠（KM），体重18～22g，雌雄各半；新西兰大白兔，体重1.5～2.0kg，均由广西医科大学实验动物中心提供。

1.2 仪器

电子分析天平、普通培养箱、厌养发生袋、厌养发生罐、病理图像分析仪、玻璃涂棒。

1.3 试剂

氧气指示剂、营养肉汤、厌养肉汤、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、消痤宁乳膏、巴豆油、琼脂粉、营养琼脂、浓媒焦油溶液、维胺酷维E乳膏。

2 方法

2.1 消痤宁乳膏的体外抗菌实验

2.1.1 药物的配制 取适量的消痤宁乳膏，精密称量，吐温-80溶解，灭菌的营养肉汤稀释，经无菌的0.22 μm过滤器过滤除菌后，无菌的营养肉汤进行对倍稀释法，配制成浓度为0.003～6.25mg含药培养液。

2.2.2 对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌的抑菌和杀菌实验 将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌分别从斜面培养基接种到肉汤培养液中，置于普通的培养箱35℃培养16～18h；用麦氏标准比浊管调整菌液浓度为1.5×10⁸gCFU/mL，无菌的生理盐水稀释成1×10⁶CFU/mL备用。分别取上述浓度的金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌0.1mL分别加至1mL，含不同浓度药液的试管中于培养箱35℃培养24h后观察有无浑浊，以不出现浑浊的最低浓度为观察最小抑菌浓度（MIC），再依次取未浑浊的各管培养物0.1mL分别加入无菌的培养皿中，用玻璃涂棒均匀地涂布，倒置于培养箱35℃培养24h，菌落数小于5个的平板中所含最低药物浓度为最小杀菌浓度（MBC），共做3次平行实验。

2.2.3 对痤疮丙酸杆菌（P.Acne）作用的研究 用上述方法将药物配成 4.9～625μg/mL含药浓度培养液。将P.Acne在35℃厌氧发生罐中进行厌氧培养48h，用无菌的生理盐水稀释到所需的浓度，取菌液0.1mL加入到体积为1mL的不同浓度的无菌药液的试管中。置厌氧罐中35℃培养48h，用氧气指示剂来指示厌氧罐内的氧气含量（当氧气的浓度大于0.5％时，氧气指示剂由紫色或紫红色变成蓝色）。观察有无浑浊，以不出现浑浊的最低浓度为观察最小抑菌浓度（MIC），再依次取未见浑浊的试管的培养液0.1mL分别加入到含有6％羊血的厌氧培养基中，用玻璃涂棒将液体均匀地涂布在平皿表面，倒置厌氧罐中，在35℃进行培养48h，平板上菌落数小于5个的平板中所含最小药物浓度为最小杀菌浓度（MBC）。

2.1.4 对照管 配成含1％吐温-80的培养液、含菌液的吐温-80培养液，含基质的培养液、含菌液的基质培养液，含药的培养液以及含菌液的培养液对照管，观察各对照管是否有细菌生长。

2.2 对巴豆油致小鼠耳廓炎症的影响

将昆明小鼠40只，雌雄各半，体重为18～22g，随机分为4组，每组10只，分别为：基质组、维胺酷维E乳膏（1次/d）、消痤宁乳膏高剂量组（2次/d）、消痤宁乳膏低剂量组（1次/d）。将药物涂于小鼠右耳廓，左耳作对照，连续给药7d，末次给药后1h，用温水洗去药膏，将2％巴豆油混合致炎剂（2％巴豆油、20％无水乙醇、5％蒸馏水和73％乙醚）0.05mL涂在各组小鼠右耳廓以引起炎症。致炎4h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下左右两耳，6mm打孔器将双耳相同的部位等面积打下圆耳片，用电子天平称重，以右耳片重-左耳片重之差为肿胀度，比较组间差异，来评价药物对巴豆油混合致炎剂所致耳廓炎症的影响，用下面公式并计算用药组肿胀抑制率。

抑制率=基质空白组肿胀度-实验组肿胀度基质空白组肿胀度×100%

2.3 对兔耳实验性痤疮模型的治疗作用

取新西兰白兔30只，第一组6只为正常组，不涂任何药物；余下24只家兔，在左右耳内侧面耳管开口处ZcmXZcm范围，每日涂煤焦油1次，每次0.5mL，连续2周。将24只大白兔随机分为4组，分别为：模型对照组（局部外涂赋形剂，2次/d），消痤宁乳膏高剂量组（局部外涂消痤宁乳膏，2次/d）、消痤宁乳膏低剂量组（局部外涂消痤宁乳膏，1次/d），阳性对照组（维胺酷维E乳膏，2次/d），连续用药2周。每日除给药外，应肉眼观察局部给药处皮肤的变化：耳厚薄、硬度、粗燥程度、毛囊口有无黑角栓等。末次给药后24h，用温水洗去药膏，取下每只兔耳基本相同的部位皮肤（全层），10％福尔马林溶液固定后，HE染色后，光镜下观察病理组织学改变，并进行显微照相观察组织学变化。

组织学判定标准：“0”为无粉刺；“＋”为毛囊漏斗部可见少量致密角化物质；“＋＋”为毛囊漏斗部可见中等量致密角化物质，并向皮脂腺延伸；“＋＋＋”为扩张毛囊内有广泛的角化物质，与人类开放性粉刺相似。

2.4 统计方法

实验数据用±s表示，SPSS 13.0统计软件进行数据处理，P＜0.05表示有显著性意义，P＜0.01表示差异有明显的显著性差异。

3 结果

3.1 消痤宁乳膏体外抗菌作用

（1）对照管细菌生长情况结果见表1。

注：-：无细菌生长；＋：有细菌生长

说明吐温-80、培养基液和含药的培养液都没有被细菌污染，细菌分别能在培养液和含吐温-80培养液中正常繁殖。

（2）抗菌作用。

表2 消痤宁乳膏的体外抗菌作用

菌种MIC（mg/mL）MBC（mg/mL）

含黄色葡萄球菌0.0240.048

白色葡萄球菌0.0060.098

痤疮丙酸杆菌0.0200.156

结果表明，消痤宁乳膏对痤疮的主要致病菌金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌均有一定的抑制和杀灭作用。

3.2 消痤宁乳膏对小鼠耳廓炎症的抑制作用

实验结果见表3所示，低剂量组可明显抑制巴豆油诱发小鼠耳片的肿胀；高剂量组对小鼠耳片肿胀抑制率达41.18％；阳性对照组对小鼠耳片肿胀抑制率为23.53％。

表3消痤宁乳膏对小鼠耳廓炎症的抗炎作用

菌种肿胀度（mg）抑制率（%）

基质空白组18.1±2.70

维胺酯维E乳膏14.4±1.2*15.29

消痤宁乳膏低剂量13.0±2.7*23.53

消痤宁乳膏高剂量10.1±0.6*41.18

注：与基质空白组比较：*P＜0.01。

3.3 对兔耳实验性痤疮模型的治疗作用

（1）正常组。肉眼所见：正常兔耳菲薄、柔软，有良好的透光度，可见清晰的毛细血管网，兔耳管开口处可见整齐排列的毛囊和纤细的毛发；组织学：正常兔耳表皮较薄，一层颗粒层，约2～4层棘细胞层，可见毛囊，真皮、表皮交界清楚，由于毛管较小，切面中常见不到。

（2）模型组。肉眼所见：在涂煤焦油过程中，局部组织明显增厚、变硬，毛囊口有黑色角拴，成黑头粉刺状，揭开涂厚的煤焦油痂时，可见附着其上毛囊角栓，其下可见开放增大的毛囊口，隆起呈丘疹状；组织学：表皮增厚，出现角化过度，棘细胞层肥厚，毛囊皮脂腺增大明显，可见角化物质，毛囊漏斗部充满角化物质并扩大成壶状，真皮上层明显毛细血管扩张，弥漫散在炎性细胞浸润，另有游离的炎症细胞。

（3）基质组。不管是肉眼还是组织学，与模型组相似，皮肤病变也无明显改善，局部组织明显增厚、变硬，毛囊口有黑色角拴，表皮增厚，毛囊口扩张，毛囊有大量角化物。

（4）给药组。肉眼所见：整个皮片厚度可见变薄，柔软度有所增加，局部毛囊口角栓及粉刺减少，丘疹变平减少，且改善程度呈剂量依赖性。

（5）胺醋维E乳膏阳性对照组。与给药组在肉眼和组织学上大部分相似，毛囊口缩小，有疏松角化物质充填，真皮炎症细胞浸润也有所减少。

3.4 在整个兔耳痤疮造模过程中组织学改变

表4和表5结果表明消痤宁乳膏涂搽兔耳角化部位的皮肤，可减轻皮肤毛囊皮脂腺导管的过度角化和表皮层的增厚，组织病理学改善呈剂量依赖性。

4 结论

经过药效学试验验证，表明消痤宁乳膏可抑制兔耳实验性痤疮模型的毛囊上皮角化过度和皮脂腺增生；可抑制引起痤疮的白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌等主要致病菌；也可抑制巴豆油混合致炎物质引起的小鼠耳廓炎症反应。

参考文献：

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［2］ 徐叔云，陈修.药理实验方法学［M］.北京：人民出版社，2007.

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［5］ 柴宝，黄败.中药痤疮冲剂对兔耳实验模型抗角化作用的研究［J］.中华皮肤科杂志，2007（9）.

（责任编辑：姜付平）