灵芝菌丝体对提高河鲀免疫力的影响

俞　辉　匡晓峰

摘要：试验通过在基础饲料中分别添加不同含量(0.5％1％2％)药性菌质(药用真菌和中草药双向目体发酵的产物)的饲料组作为实验组，以基础饲料为对照组，饲养河鲀60天，并在第15，30，45，60天取样测定其脾脏溶茵酶和超氧化物歧化酶活性。并在饲养60后进行攻毒试验。结果表明，药性菌质能够提高河鲀免疫力。1％添加量的药性茵质效果最佳。原因是药性菌质在一定时间内能显著提高河脾脏溶菌活性。

关键词：灵芝菌丝体；河鲀；溶菌酶；免疫力

中图分类号：Q-33文献标识码：A文章编号：1672-3198(2009)02-0296-02

0前言

河鲀又称河鲀(Takifugu obseurus)属鲀形目，纯科，东方纯属，暖水性底栖鱼类，俗称河豚，又名气泡鱼，是一种营养价值较高的水产品，其蛋白质含量远高于一般鱼类，而脂肪含量是鱼类中最低的一种，其不仅具有养血补气功效，鱼皮还有健胃的特效，而且其体内有毒的部位还可提取名贵的河豚毒素，有较高的经济价值，名列长江“四大名鱼”之首，为传统美食中的典范，肉质鲜嫩，味美绝伦。

近年来随着野生河鲀资源的严重衰退，人工饲养的河鲀成为供应市场以满足食用的主要生产产品。通过人工养殖来缓解市场供需之间的矛盾是一条切实可行又势在必行的途径，并有利于保护天然环境中日益减少的河豚资源，经济效益和生态效益显著，人工养殖河豚又成了新的特种养殖经济增长点；近年来河豚养殖业逐步规模化和集约化，但也存在着不少日益突出、制约河豚养殖业发展的问题。

药用真菌新型(双向性)固体发酵工程(简称双向发酵)是将发酵菌种和发酵基质所构成发酵组合内的基质部分，由以往仅用富含碳、氮等营养的农副产品(甘蔗渣、麦麸等)作为营养基质(其产品称为药用菌质)，改变为采用具有一定活性成分的中药材作为药性基质，它既能提供真菌生长所需营养又因真菌的酶而被改变组织、成分，从而产生新的性味功能，故具有双向性，其产品称为药性菌质，如兼用营养、药性两种基质则称为全性基质，产品也称为药性菌质。药性菌质，常可比该真菌或药性基质本身或两者简单相加有更良好的药效，主要表现在增效、扩用、排毒等方面。目前张李阳等对药性菌质的研究在家禽的实验中已取得一些成绩，在肉鸡的日粮中添加药性菌质，可显著性的促进肉鸡血红蛋白、血清蛋白的合成，改善蛋白质的代谢，提高营养物质的利用效率，可以提高肉鸡的血清碱性磷酸酶的活性，促进机体的钙、磷代谢，增强机体的新陈代谢功能，改善消化生理，从而促进肉鸡的生长。

1材料和方法，

1.1材料

(1)灵芝菌丝体；选用的一种药用真菌在含一定量可药食同源中药药渣的全性基质上进行双向发酵，最终得到的产物称为药性菌质。

(2)试验用鱼：取自中洋集团下属龙洋水产有限公司河豚养殖场内，白养的大小基本一致的1冬龄河鲀1200尾。

(3)基础饲料：海安龙洋牌河豚鱼饲料。

1.2方法

共饲养大小基本一致(体重0.156±0.024Kg，体长19.0±1.6cm)健康活泼的河鲀鱼10000尾，试验前先用基础饲料驯养7d，待供试鱼适应环境，并确认无疾病症状后，随机分成4组入池(每池2500尾)。试验以投喂基础饲料(正常河鲀饲料)为对照组(池)，以投喂在基础饲料中分别添加不同含量(0.5％、1％、2％)的饲料添加剂的试验饲料为试验组(池)，饲养河鲀60天。每天按正常投饲量投喂河鲀饲料，使之饱食，并根据水温适当调节，水温保持在21.6～27.8℃。饲养管理按正常生产进行，每天记录投饲量，计算出摄食量，河鲀疾病的防治对照中洋集团的养殖厂常规进行。并于投喂饲料添加剂后的第15、30、45、60天，从各组中用随机捞取的方法捞取8尾供试鱼取脾脏组织在－20℃冰箱中保存，备用。

2结果与分析

2.1试验结果

(1)取样策略：试验开始后的第15、30、45、60天，从试验池中随机捞取8尾受试鱼进行采血，血清收集在-20℃冰箱中保存，备用。

取样时停饲1次，测试各组受试鱼50尾，并测量体重、体长、体全长(本文主要探讨药性菌质对河鲀免疫力影响，关于生长方面指标将另文探讨)。

(2)受测指标：

A酶活性的测定。

用脾脏组织测定溶菌酶、SOD活性，测定按所购试剂盒(南京建成生物工程研究所)的方法在南京晓庄学院进行。

B回感试验。

各组分别留存供试鱼10尾，饲养在南京晓庄学院养殖室内，观其行为正常并能正常摄食混合饲料时，进行回感试验。用一定浓度的嗜水单细胞菌用注射方法进行肌注感染，观察注射后各组行为变化、症状和死亡率。一周后按组对每尾河豚鱼进行解剖，肉眼观察其表皮、粘液、肌肉丰度、肝脏体积、含血量等和手指接触等指标予以比对后进行记录。

2.2实验结果

试验数据用ANOVA软件进行方差分析，Duncan's进行多重比较。

(1)投喂药性菌质添加剂对河豚鱼相关酶活性的影响

在投喂药性菌质后，实验3、4组的溶菌酶活力有所升高并在45d时达到最大值，且以2％试验组溶菌酶活力最高，1％次之，与对照组相比差异显著。

(2)回感实验结果。

在回感实验中，1％试验组死亡率最低，体表颜色鲜艳，表皮光滑，肌肉丰厚，但头颈部表皮粘液呈片脱落，肝脏体积最大，血量较多，肝脏外表充血程度最小；对照组表皮较光滑，肌肉肥满程度一般，肝体积中等，血含量较大仅次子1％试验组；0.5试验组，表皮欠光滑，肌肉不丰满，肝脏外表呈条状充血(约3cm)，肝叶血管较厚；2％试验组表皮稍显光滑，肝小，含血量少，肝脏整体充血，靠腹部有长条血痕(约4cm)。从中可以看出，药性菌质能有效促进生长和提高鱼体免疫力，其用作饲料添加剂的添加量应为2.0％组效果最佳，1.0％组效果佳。

2.2分析与讨论

药用真菌具有提高免疫、抗肿瘤、延缓衰老、降血脂等多种生物功效，在医药、食品领域受到广泛关注。溶菌酶是鱼体内具有杀灭外来细菌的活性酶，这种酶在鱼体免疫和抗病过程中发挥着很重要的作用。

鱼体中溶菌酶的产生与哺乳类动物相似，主要由嗜中性粒细胞和单核细胞产生，少量由巨噬细胞生成。溶菌酶是鱼类防御微生物入侵的最有效因子之一，对于革兰氏阳性菌溶菌酶主要是通过破坏细胞壁的N－乙酰胞壁酸和N－乙酰葡糖胺之间的聚糖链，使细胞壁失去韧性，细菌发生低渗性裂解，从而杀伤细菌。而对于革兰氏阴性菌，溶茵酶是在补体和其他酶已经破坏细菌外层胞壁，露出细胞内层肽聚糖之后起作用。作者通过试验知添加药性菌质后，随着饲喂时间增加，各组鱼溶菌酶活力均有一定程度提高，并在45天左右达到最高，而后有所降低，且以添加2％效果明显(P＜0.05)，说明药性菌质组均能提高河鲀的溶菌酶活力，提高免疫水平，推测可能是药性菌质中成分激活了单核细胞的分泌功能，从而使溶菌酶大量释放。

在回感实验中2％组活动力强，运输过程中碰撞严重，其应激反应亦强，对肝脏损伤大，解剖该组鱼发现个体的肝萎缩，肝脏血量少，表明其急性死亡率高，因此，整个实验显示菌质添加量在0.0％到2.0％范围内，随着添加量增加，免疫细胞增殖能力逐渐增强。试验证明在饲喂含有药性菌质45d后效果达到最好，因此使用本药性菌质作为饲料添加剂应在河鲀易发病前45d效果最好。