中华补血草排水器发育的石蜡切片观察

王晓玲　泮玉竹　江春美　柴振光　仲林林

摘要石蜡切片是观察植物组织结构最重要且常用的一种方法，应用石蜡切片技术及光学显微镜观察中华补血草叶部排水器的形态以及超微结构，进而来研究其发育过程。结果表明：排水器发育晚于盐腺细胞和气孔；盐处理对排水器的发育并无明显影响。

关键词中华补血草；排水器；发育；石蜡切片技术

中图分类号 S567.23+9 文献标识码A文章编号 1007-5739（2009）03-0007-01

中华补血草（Limonium sinense Kuntze）是蓝雪科补血草属植物，作为一种旱生植物，中华补血草具有特殊的泌盐机理，具有改良盐碱地的功能，是碱化比较严重地区的理想绿化植物。目前，大多数文献都是关于补血草泌盐机理、盐腺细胞结构的研究，而本试验则通过对中华补血草排水器的超微结构的观察来研究其形态发育过程。

1材料与方法

1.1试验材料

新鲜、老嫩适宜、大小适中并具有代表性的中华补血草（幼芽和嫩叶）分为盐处理和非盐处理。

1.2试验方法

（1）固定。将F.A.A固定液倒入青霉素小瓶内，将切割好的材料立即投入其内，盖好瓶塞，用注射针管抽去细胞间隙的空气，使固定液迅速浸入材料，固定24h。

（2）冲洗与脱水。将固定好的材料，分别用50%、70%、85%、95%、100%的酒精冲洗浸泡，以除尽组织内的水分。

（3）透明。透明剂一方面能溶解石蜡，另一方面能替换出脱水剂，常用透明剂是二甲苯。方法是用1/2二甲苯和1/2纯酒精混合液浸泡2h，然后转入纯二甲苯中，中间换1次二甲苯新液。每级停留2h，在二甲苯中的时间不宜过长，以免材料发脆。

（4）浸蜡。浸蜡的过程一般是从低温到高温，从低熔点到高熔点顺序逐步进行，这样可使石蜡慢慢渗入到组织内而将透明剂代替出来，这一过程不能急于求成，否则浸蜡不彻底而影响切片。具体方法：先将石蜡切成薄片，然后取石蜡少许轻轻放入溶解有材料的透明剂中，使其随着透明剂渗入到组织中去，等到完全溶解后，再不断加入少许石蜡薄片，所加石蜡的量约占透明剂的1/2，即达到饱和石蜡不再溶解为止。然后把它放在60℃恒温箱中过夜，因温度高石蜡会溶解，所以必须慢慢加入石蜡。

（5）包埋。包埋时将纸盒放在温台上，温台下一角点燃酒精灯加热，使温台保持高于石蜡熔点的温度。然后将材料连同石蜡迅速倒入纸盒内，用镊子迅速而轻轻地把材料按所需的切面摆好位置。材料安置妥当后，向蜡面微微吹冷气，盒中的石蜡凝结成不透明状态时，用力把纸盒全部浸入冷水中，并翻转纸盒使其很快均匀地全部凝固，即成蜡块。

（6）切片。将载蜡器夹紧在蜡钳上，所需材料的切面与刀面平行，调整好组织块的角度，右手摇动切片机，左手执毛笔把切下的蜡带轻轻托住，便可得到连续的切片。其厚度一般在7~9μm。

（7）脱蜡。将粘有材料的载玻片放入二甲苯中，使石蜡完全溶解，一般需5~10min。室温过低，脱蜡时间需延长，或放在40℃左右恒温箱中，脱蜡只需3~5min。

（8）显微镜观察。

2结果与分析

通过石蜡切片在光学显微镜下的图片，可以得到排水器的光学显微结构模式（见图1）。中华补血草叶的上表皮细胞有排水孔分布，孔的下方叶肉组织有较大的气腔，其周围有通水组织与小维管束相连。显示出了比较典型的排水器组成及其与维管束的联系，可用于以后对中华补血草叶部排水器的研究。

观察分化早期的水孔，可以看到很明显的木质部管胞末端，水孔的发育与维管束的分化密切相关。而气孔的分化却看不到与维管束的分化有关系，这是在分化早期辨认气孔与水孔的重要依据。观察分化中期的水孔，可以很清楚地看到通水组织的分化是从靠近维管束的一端向叶缘一端发生。靠近维管束末梢的通水组织细胞已经发生了很明显地体积膨大，而靠近叶缘的通水组织细胞仍然处于原始细胞状态，没有明显的变化。此时，表皮细胞已经分化出了保卫细胞，但是保卫细胞之间的水孔通道仍未形成。另外，试验表明，盐处理对水孔的分化无影响。

3结论

通过对中华补血草叶部排水器的光镜观察发现：中华补血草叶部排水器位于叶尖或叶缘，由水孔、通水组织及其相关联的木质部末梢和微管束鞘层细胞组成，属于复杂型排水器。水孔是由2个似保卫细胞组成，与气孔的保卫细胞相比较已经失去了调节孔开关的能力，始终处于开放状态。

在排水器发育初期可以看到明显的管胞末端，这说明排水器的发育与微管束的发育密切相关，在木质部发育成熟之后才能分化出排水器，也因此排水器的发育晚于盐腺细胞和水孔细胞的发育，同时做中华补血草幼叶的扫描电镜观察，也得到相同的结论——在第2、第3片幼叶（数字排序由内及外，即由幼及老）的边缘中有盐腺而无水孔。

4参考文献

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