川芎嗪提取工艺及质量标准研究

杨　虹　刘　璐　张海菊

(1.黑龙江省农垦香坊实验农场社区卫生服务站,黑龙江,哈尔滨,150000;

2.哈尔滨市第五医院,黑龙江,哈尔滨,150000;3.哈尔滨锅炉厂医院,黑龙江,哈尔滨,150000)

【关键词】川芎嗪；提取工艺；质量标准；研究

【中图分类号】R282.6【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)02-0039-02

川芎的研究始于20世纪30年代，其化学成分相当复杂。文献报道：川芎的总生物碱和酚性成分有较明显的扩张冠脉，冠脉血流量，降低心肌耗氧量，抑制ADP诱导的血小板的凝集、对已凝集的血小板有解聚作用、降低血小板的表面活性等药理作用。川芎中具有较强生理活性的成分川芎嗪的含量为0.01%～0.02%，阿魏酸的含量约为0.1%。川芎嗪和阿魏酸总提物的提取方法多用乙醇提取，酸碱处理以及柱层析分离，但这种方法不适用于工业生产。作者结合生产实际，对提取物中保留总生物碱以及酚类化合物的提取工艺做了大量的研究工作，以求得到质量和收率稳定的产品。经多方面的试验研究，最终选用乙醇回流，减压浓缩，而后用大孔吸附树脂分离的方法，得到质量和收率稳定的川芎总提取物，收率为0.6%，其中川芎嗪占5%～7%，阿魏酸占20%～22%，川芎嗪和阿魏酸二者共占25%～29%。近年发现，川芎嗪对CFR(慢性肾功衰竭)、小儿急性偏瘫、腹膜透析液的超滤、肾热缺血时等^[3]都有一定作用。因而对此药进行一些研究，实验如下。

1川芎总提物的提取分离

取150g川芎饮片，稍粉碎，用95%乙醇于索氏回流提取装置中回流提取9小时。溶媒用量为8～10倍。提取液用布氏抽滤器抽滤，抽滤液减压浓缩至干，再加适量水，加热使溶解，抽滤，滤液回到已处理好的大孔树脂柱（干膏和树脂的比例为1：15～1：20）上，控制加样流速为3秒/滴，慢慢滴加完后，先用水洗，（1～2秒/滴）洗至还原糖反应呈阴性，（1ml水洗脱液加入甲基萘酚0.5%试液2～3滴。沿试管壁缓缓加入0.5ml浓硫酸，阴性为二界面处出现棕色环）约用30%乙醇洗脱至无色，合并30%乙醇洗脱液减压回收乙醇，冷却后用乙醚萃取，醚提取液用1N硫酸溶液萃取，酸液经饱和碳酸钠溶液碱化至pH9～10。用氯仿提取，提取液减压回收氯仿至干，得到总生物碱。取总生物碱石油醚溶解部分，减压蒸发石油醚，得橙黄的膏状物，上碱性AL2O3柱，层析分离，石油醚－氯仿（8∶2）的洗脱部分，减压浓缩，经升华结晶得无色的针状结晶，即为川芎嗪。

2.2川芎嗪的定性鉴别

2.2.1实验原理川芎嗪与碘化鉍钾试剂产生色沉淀，与碘化汞钾试剂产生白色沉淀。

2.2.2薄层层析法取无色针状结晶，少量溶于氯仿中，点在中性氧化铝CMC板上，以石油醚氯仿（1：1）展开17cm，用改良碘化鉍钾试剂显色，斑点呈橘黄色。

2.3川芎嗪的定量测定

2.3.1非水滴定法取150g川芎的提取物，定容于100ml冰醋酸溶液中，取10ml加0.5%结晶紫指示液1滴，用0.01ml/l的高氯酸滴定液滴定至溶液呈兰绿色，耗用高氯酸滴定液2.4ml，空白试验耗用高氯酸滴定液0.45ml，故川芎嗪占生药含量为0.018%。

2.3.2紫外分光光度法

2.3.2.1回收率的测定精密称取2份重量相同的样品，在其中一个加入20μl盐酸4-甲基吡嗪标准溶液，分别加入0.5%的盐酸少量于70℃加热20分钟，放冷后，定容于10ml容量瓶中摇匀后，用离心机离心5分钟，取2ml作为样品加入盛有5ml缓冲液的分液漏斗中，再各加1%溴甲酸绿3ml，分别用20ml氯仿一次萃取，振摇后，静置1小时，取下层液，放入10g盛有无水Na2SO4的刻度试管中振摇，静置半小时，取上层液，用754G分光光度计测吸收度。结果见表1。

2.3.2.2含量测定取150g川芎饮片提取物定容于50ml容量瓶中，取3个5ml作为样品分别加0.5%的盐酸少量，于70℃加热20分钟，放冷后定容于10ml容量瓶中，摇匀后用离心机离心5分钟，取2ml作为样品按照上述方法处理后测定。结果见表2。

2结果

见表1、表2。

经实验结果证明川芎嗪在生药中含量为0.018%。

川芎以乙醇回流提取，减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩得川芎总提取物，收率为0.6%，其中川芎嗪和阿魏酸的含量约占本品的25%～29%，该方法操作简单，收率稳定，适用于工业生产。

3讨论

因川芎嗪极易升华，所以在提取回流过程中，一定要注意温度不要太高，尤其是在回收干燥过程中，尽量控制在60℃左右。

大孔树脂：本实验中采用的是D101大孔树脂结构为2－甲基苯乙烯，比表面积400m2/g，孔径100。以乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至与水混合不呈白色混浊为止（取1ml乙醇加5ml水）。然后以大量蒸馏水洗去乙醇。否则将大大影响大孔树脂吸附力。

关于酸性染料比色法：一种生物碱不是与所有的酸性染料都能形成有色络合物。文献报道：甲橙、曙红，百里酸兰3个不能与川芎嗪形成有色络合物。而溴甲酸绿和溴麝甲草酸兰与川芎生物碱能生成有色络合物。由于溴甲草酚兰的pH值为7，故不宜采用，以溴甲酸绿为最佳，增加染料的浓度可以提高测定的灵敏度，但浓度过高，在以有机相振荡提取络合物时，易于形成难以破坏的乳化层。

参考文献

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[2]袁伯勇，袁慧，赵铭.3种饮片中川芎嗪含量的测定[J].中草药，2000，31(6)：431

[3]季宇彬.中药有效成分药理与应用[M].黑龙江科学技术出版社，2000:429

[4]梅全喜，毕焕新.现代中药药理手册[M].北京.中国中医药出版社,1998:466

(收稿日期：2008.11.10)