云南红豆杉紫杉烯合成酶基因克隆、序列分析与植物表达载体的构建

梁素钰　和丽岗　郑学勤

摘要：利用分段RT-PCR法成功地从云南红豆杉叶片总RNA中分离出两条长约1.4kb和1.5kb的cDNA片段，克隆到pUCm-T载体中，序列拼接分析表明，该cDNA片段与Wildung M R 等发表的紫杉三烯合成酶基因编码区2568bp有41个核苷酸不同，同源性为98.42％，具有编码862个氨基酸蛋白质的能力。为了检测所克隆的基因编码产物是否具有活性，并进一步制备抗体以便于将来转基因植物的检测，构建了一个酵母表达载体GAPA-T14；为了转化植物构建了两个具有不同启动子的植物表达载体，PBI121-T14（含35S启动子）和pBIH-T14（在pBI121的基础上以胶乳特异启动子）。

关键词：云南红豆杉；紫杉烯合成酶；植物表达载体；cDNA克隆；紫杉酶

中图分类号：Q78

文献标识码：A

文章编号：1007-7847(2005)01-0024-05