ＰＨＬＣＸ Ｎｆｌａｇ３／小窝蛋白－１重组质粒的构建及融合基因在２９３Ｔ细胞中的表达

杞少华　彭芳芳　张百芳　沈　晗　吴少波　武栋成

摘要：构建重组真核表达质粒PHLCX Nflag3／小窝蛋白-1，并在293T细胞中表达。用PCR的方法扩增cDNA文库中的人小窝蛋白-1基因，连接在真核表达载体PHLCX Nflag3的短肽标签flag的下游，用限制性酶切和测序的方法鉴定；将重组质粒以脂质体法转染293T细胞，Western blotting法检测蛋白质的表达。结果显示，双酶切出现两个片段，分别与空载体和人小窝蛋白-1的cDNA分子质量大小相符，测序结果符合人小窝蛋白-1的cDNA序列；Western blotting显示构建的新载体能够在293T细胞中表达小窝蛋白-1／flag融合蛋白，表明已成功构建了能在293T细胞中高效表达小窝蛋白-1／falg融合蛋白的真核表达载体PLHCX Nflag3／小窝蛋白-1。

关键词：小窝蛋白-1；基因表达；293T细胞

中图分类号：Q782

文献标识码：A

文章编号：1007—7847(2005)04—0331—05