动物源性食品中拉沙洛西钠检测方法综述

【摘要】本文对动物源性食品中拉沙洛西钠检测方法进行研究，对酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱法等检测技术进行了阐述，重点分析了这三种方法的优势和劣势，并对超高效液相色谱-串联质谱法进行了重点介绍，同时也对拉沙洛西钠的发展前景进行了展望，为我国食品安全检测拉沙洛西钠的残留量提供检测技术方面的参考。

【关键词】拉沙洛西钠；抗生素；食品安全

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.008

Review of Detection Methods for Lasalocid Sodium in Food of Animal Origin

GUO Siqi， FU Chuling， GUO Guoxian， LAN Yumeng， GU Meng， SUN Weiwei， Cao Mengna

（Liaoning Inspection， Examination&Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China）

Abstract： This paper establishes the current research on the detection methods of lasalocid sodium， including ELISA， HPLC， UPLCMS/MS and so on for the relevant introduction， focusing on the analysis of the advantages and shortcomings of the above three methods； the UPLC-MS/MS detection technology is also highlighted， and the development prospect of lasalocid sodium is also prospected to provide a reference in detection technology for the detection of lasalocid sodium residue for food safety in China.

Keywords： lasalocid sodium； antibiotics； food safety

1拉沙洛西钠的概况

拉沙洛西钠是一种双价聚醚类抗寄生虫药，它的中文别名为拉沙洛A钠、拉沙里菌素钠。该药具有极强的抗寄生病毒能力，可以有效抑制鸡柔嫩球虫、毒害球虫、巨型球虫等艾美耳球虫的生长。其药效相较于莫能菌素和盐霉素更为显著，主要应用于畜禽抗生素的治疗和预防肉绵羊或鸡的球虫病。拉沙洛西钠的药理学特性与莫能菌素相似，因而在兽药研发中得到了广泛应用。此外，拉沙洛西钠也被用作饲料添加剂。它能改善饲料的营养比例，调控瘤胃发酵类型，从而提高动物的整体营养状况并促进其生长。然而，超过最大给药剂量使用拉沙洛西钠不仅可能导致药物残留问题，还可能通过食物链影响人类健康。目前，许多国家已通过法律法规严格限制动物源性食品中拉沙洛西钠的使用，我国也规定了其在动物源性食品中的最高残留限量，具体见表1。因此，合理使用拉沙洛西钠，在确保其功效的同时，还需防范兽药残留的风险。

1.1拉沙洛西钠理化性质

拉沙洛西钠是由瑞士罗氏公司在1951年开发的，最初用作肉牛的促生长剂。该药物与其他聚醚类抗生素的区别在于其结构中含有一个芳香环。此外，拉沙洛西钠能分别与一价阳离子、二价阳离子结合，干扰球虫体内正常的离子平衡和转运，从而抑制球虫的生长。拉沙洛西钠为白色至棕色粉末，具有独特的臭味，熔点在191～192℃。它微溶于水，但可以与甲醇和乙腈等大部分有机溶剂混合。它的分子式是C34H58O8Na，分子量为612.78。

1.2拉沙洛西钠的药理作用

拉沙洛西钠是一种特殊的聚醚类抗生素，可以有效抑制畜禽体内的球虫病，并且具有广泛的治疗作用。它能够有效地对抗革兰氏阳性菌以及多种厌氧菌，对于防治这些细菌感染具有显著效果。此外，它还对禽艾美尔球虫有较强的抑制作用，对防治禽类寄生虫病具有重要作用。然而，需要注意的是，拉沙洛西钠对革兰氏阴性菌并无抗菌活性，因而在治疗某些革兰氏阴性菌感染时，可能需要联合使用其他药物。

2拉沙洛西钠的检测方法

2.1酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法（ELISA）是以聚苯乙烯微量化学反应板作为吸附剂，通过特异性反应实现对已知抗原和抗体检测的方法。该技术能够提供准确的定量或定性测定结果，常用于诊断动物的疾病和检测小分子化合物。

CHEN等[1]在单链抗体片段（scFvs）的基础上首次构建了抗拉沙洛西钠的完整双特异性单链抗体（scDb）。利用scDb建立的ic-ELISA法，可以检测鸡肉中的拉沙洛西钠，IC50为3.5 ng/mL。该方法的灵敏度和特异性均优于单链抗体片段亲本抗体。WATANABE等[2]也报道了鸡的肝脏和肌肉中拉沙洛西钠的残留量，检测方法同上述相似。

ELISA方法中前处理相对简单，同时使用的仪器不昂贵，但是该方法仅能作为快速定性分析处理，不能用于定量分析，因而只适用于初筛。

2.2高效液相色谱检测方法

在动物源性食品检测中，高效液相色谱检测方法（HPLC）属于常见的兽药残留检测方法之一。HPLC是以溶液为流动相，利用高压输液系统，推动含有各类极性成分的单一溶液或混合溶剂、缓冲液等流动相通过色谱柱。在色谱柱中，各组分依据在固定相中的停留时间差异得以分离。经过色谱柱的分离，各成分依次流出，并由检测仪进行监控，进而完成对试样的解析。

张素霞等[3]利用反相高效液相色谱-荧光检测技术对鸡肝组织中拉沙洛西钠的含量进行了准确的检测，以磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇（25∶40∶35，体积比）混合液作为流动相，实现对物质的有效分离。前处理方式：用甲醇作为提取液进行提取，并用硅胶柱净化，过膜上机。该方法平均回收率为82.1%，方法的检测限为0.02 mg/kg。

虽然动物源性食品中拉沙洛西钠的前处理过程简单，回收率也较高，但是日常检测的食品具有多样性，这给动物源性食品中拉沙洛西钠的检测造成了一定的难度。同时，在定性分析时，存在基质干扰，无法对样品中的成分进行准确判定，影响结果判断。另外，在检测过程中对选用的色谱柱极性或流动相的极性也有一定的要求，这些辅助定性要求也是影响结果判断的重要条件。查阅文献对比ELISA法和HPLC法得出，ELISA法测得的结果不足以定量，只能用于初筛，而HPLC法对荧光检测器灵敏度要求高，同时在定性分析时会受到基质干扰。与超高效液相色谱-串联质谱检测方法相比，超高效液相色谱-串联质谱检测方法应用更为广泛，其前处理操作简单、速度快，检测结果更准确。

2.3超高效液相色谱-串联质谱检测法

超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）是作为一种集高效率、快速分离、多组分定性定量分析于一体的检测技术。它在处理高沸点、不挥发、热不稳定样品时展现出卓越的分离和鉴定能力，已成为近年来药品残留分析领域的主要检测手段。

奚照寿等[4]用UPLC-MS/MS测定鸡肌肉中拉沙洛西钠的残留量，先用乙酸、乙腈以及乙酸乙酯的混合物加以提取，然后使用乙腈饱和的正己烷除去油，再通过C18固相萃取柱加以净化，过膜上机。利用电喷雾离子源正离子模式，结合多种反应监测技术，使用外标定量。通过实验得出的检测限为0.35μg/kg，定量限为0.96μg/kg，线性范围为0.96～100.0μg/kg（r=0.99947）。薄海波等[5]采用超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶和奶粉中的拉沙洛西钠含量，使用了乙腈提取样品，然后通过HLB固相萃取柱对其进一步净化，经UPLC-MSMS进行分析。该方法的检出限为0.2μg/L，线性范围为0.5～ 100.0μg/L（r>0.99），回收率范围为74.0%～98.5%，精密度为4.8%～17.2%。梁春来等[6]通过使用甲醇提取鸡组织中的拉沙洛西钠残留量，并通过硅胶柱净化和多反应监测（MRM）正离子扫描技术进行质谱检测。该方法的定量限为0.1～1.0μg/kg，回收率为71.6%～99.1%。

张骏等[7]首先使用6 mL正己烷对硅胶柱实施预处理，再将备用的提取液过柱，随后用15 mL的二氯甲烷-正己烷（1∶1，体积比）淋洗，再使用10 mL二氯甲烷-甲醇（8∶2，体积比）洗脱，最终把洗脱液汇集到离心管里，并在40℃下用氮气吹干，最后通过1 mL乙腈的复溶，经过滤膜后上机分析动物源食品中拉沙洛西钠的残留量，最终得到的结果检出限为0.005mg/kg，平均加标回收率为83.8%～99.2%。Jing Ha等[8]采用石墨化炭黑固相萃取技术进行净化处理。研究表明，拉沙洛西钠的聚醚类抗生素的回收率为68.2%～114.3%，相对标准偏差范围为4.5%～12.1%。蓝丽丹等[9]在实验过程中证明了硅胶柱、C18固相萃取柱、石墨化炭黑固相萃取柱、中性氧化铝柱以及正己烷液-液萃取法对拉沙洛西钠的净化有着显著的作用。结果表明，采取液-液萃取法净化拉沙洛西钠可以获得更优异的净化结果。具体检出限为0.05～0.2μg/kg，而且净化后的拉沙洛西钠的回收率为88.0%～108.7%，均在线性范围内。QuEChERS方法已成为一种新兴的、高效的样本预处理方法，它通过添加干燥剂、杂质吸附剂等物料，能够显著减少样本、有机溶剂以及容器的消耗，而且提高了工作效率，从而极大地改善了实验的准确性。

综上所述，采用超高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中拉沙洛西钠残留量时，样品的前处理采用了不同的提取液，但是方法的回收率、准确度和线性良好；净化方式分别采用了硅胶固相萃取柱、石墨化炭黑固相萃取小柱、液液萃取和QuEChERS等，其回收率、准确度都不偏离；多反应监测采用电喷雾离子源正离子模式进行检测，不仅能满足实验室残留分析检测要求，还能达到快速、精准、定量分析的目的。

查阅国内外文献发现，选用BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm），在柱温50℃下分析拉沙洛西钠的响应值更好。这种色谱柱完全符合质谱检测的要求，不仅对拉沙洛西钠具有良好的保留性能，还具有良好的分离效果和对称的色谱峰形。流动相的选择与组成在化合物分离中起到了关键作用。文献调研表明，使用0.1%甲酸溶液和甲醇或者乙腈溶液作为流动相时，乙腈会导致色谱峰形变宽，而甲醇会出现标准的尖锐峰形。通过优化流动相的梯度洗脱比例，不仅可以提高响应值和分离度，还能实现快速分离检测。在色谱柱和流动相选择对的情况下，不仅显著提高了分析速度，还减少了有机溶剂的消耗，降低了实验分析的成本。

3结束语

在上述拉沙洛西钠三种残留检测方法中，UPLC-MS/MS法具有出众的精密度、可靠性以及稳定性，它比ELISA法更加精准。鉴于UPLC-MS/MS法具有较强的灵敏度、精密度以及特异性，它已经成为检测动物源性食品中拉沙洛西钠残留量的首要方法。另外，QuEChERS和固相萃取小柱净化方法因其操作简便、快速、高效、稳定性好，在拉沙洛西钠残留检测的前处理中展现出良好的应用前景。

【参考文献】

[1] CHEN Y X，ZHAO K X，HUANG J J，et al.Detection of salinomycin and lasalocid in chicken liver by ic-ELISA based on functional bispecific single-chain antibody （scDb） and interpretation of molecular recognition mechanism[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2021，413（28）：7031-7041.

[2] WATANABE H，SATAKE A，KIDO Y，et al.Development of monoclonal-based enzyme-linked immunosorbent assay and immunochromatographic assay for lasalocid and semduramicin[J].Shokuhin Eiseigaku Zasshi，2004，45（3）：107-112.

[3]张素霞，沈建忠，丁双阳，等.鸡肝组织中拉沙洛西钠残留的高效液相色谱检测方法[J].中国兽药杂志，2004，38（1）：19-21.

[4]奚照寿，赵霞，袁华根，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肌肉中8种抗球虫药物的残留[J].中国兽医学报，2018，38（10）：1938-1943，1947.

[5]薄海波，雒丽丽，曹彦忠，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶和奶粉中6种聚醚类抗生素残留量[J].分析化学，2009，37（8）：1161-1166.

[6]梁春来，程林丽，沈建忠，等.液相色谱-电喷雾串联质谱法检测鸡组织中5种聚醚类药物残留[J].色谱，2009，27（6）：815-819.

[7]张骏，王硕，郑文杰，等.动物源食品中聚醚类多残留液质联用检测技术研究[J].食品研究与开发，2013，34（7）：99-104.

[8] HA J，SONG G，AI L F，et al.Determination of six polyether antibiotic residues in foods of animal origin by solid phase extraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B，2016，1017-1018：187-194.

[9]蓝丽丹，黄永辉，周鹏.HPLC-MS/MS快速测定动物肌肉中6种聚醚类抗生素[J].食品与机械，2011，27（6）：139-143.

【作者简介】

郭思琦，女，1994年出生，学士，研究方向为兽药残留检测。

（编辑：李钰双）