食品中副溶血性弧菌检验能力验证结果与分析

【摘要】为了提升实验室食品中副溶血性弧菌的检测能力，增强实验室竞争能力，确保出具的检测结果具有准确性和有效性，本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中副溶血性弧菌检验能力验证。根据能力验证作业指导书与GB 4789.7—2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》的要求，分别对TF04390009-47、TF04390009-48两份待测样品进行培养分离与鉴定，两份待测样品均未检出副溶血性弧菌，能力验证结果获得满意评价，本实验室具备食品中副溶血性弧菌检测能力。

【关键词】食品；副溶血性弧菌；能力验证

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.002

Results and Analysis of Vibrio Parahaemolyticus Testing Capacity Validation in Foodstuffs

YE Yuhua， YANG Chunyan， ZOU Lan， FAN Qiming

（Guizhou Qianxinan Inspection and Testing Center， Xingyi 562400， China）

Abstract： In order to improve the laboratory’s ability to detect Vibrio parahaemolyticus in food， enhance the competitiveness of the laboratory， and ensure the accuracy and validity of the test results， the laboratory participated in the capacity validation of Vibrio parahaemolyticus in food organized by the ChinaAcademy of Food and Drug Testing and Research （CAFDR）.According to the operational guide for proficiency testing and the requirements of GB 4789.7—2013 National food safety standard-Microbiological examination of food-Examination of vibrio parahaemolyticus， the two samples to be tested， TF04390009-47 and TF04390009-48， were cultured， isolated and identified， and no Vibrio parahaemolyticus was detected in either of the two samples， and the results of the proficiency testing were evaluated satisfactorily. The laboratory has the ability to detect vibrio parahaemolyticus in food.

Keywords： food； vibrio parahaemolyticus； proficiency testing

0引言

副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性海洋细菌，广泛存在于海水、海底沉积物以及鱼虾贝蟹等海产品中，其特点是必须在含盐环境中生长。其在高盐培养基上（2%～8%）生长良好，在无盐培养基上不能生长，故被称为嗜盐性弧菌，为我国常见的食源性致病菌。由该菌引起的食物中毒案例在世界各地均有报道，受害最严重的国家和地区主要包括日本、韩国与我国沿海地区。国家食源性疾病监测网及国家食品安全信息监测系统统计数据显示，2002年至2007年间暴发的细菌性食物中毒事件中，副溶血性弧菌居首位1aVPHQg16ZU5aiMjcXxFeQ==，在沿海地区所占比例在60%以上。人体感染副溶血性弧菌后，临床表现出腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热、粪便呈水样等急性肠胃炎症状，重症患者可能出现脱水、休克昏迷甚至死亡。因此，快速准确检测食品中是否含有副溶血性弧菌，对于保障人民饮食安全具有重要意义。在我国食品安全国家标准中，副溶血性弧菌已作为预包装即食生制动物性水产品中必检项目。为提高对食品副溶血性弧菌的检测能力和水平，本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中副溶血性弧菌检验能力验证。

1材料与方法

1.1待测样品

NIFDC-PT-439食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品共2份，第一份编号为TF04390009 - 47，第二份编号为TF04390009-48。每份待测样品包括一个西林瓶菌株，以及一个与相同编码的鱼蛋白粉，均由中国食品药品检定研究院提供。

1.2培养基及试剂

3%氯化钠碱性蛋白胨水、硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂、弧菌显色培养基、3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂、3%氯化钠三糖铁琼脂、氧化酶试剂，均购自广东环凯微生物科技有限公司；嗜盐性试验用胰胨水、副溶血性弧菌成套生化鉴定管，均购自青岛海博生物技术有限公司；革兰氏染色液，购自安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司；实验用水为无菌水。

1.3标准菌株

副溶血性弧菌FSCC 232009（H0078DX），购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.4仪器

电热恒温培养箱（DHP-9082，上海一恒科学仪器有限公司），立式压力蒸汽灭菌器（LDZM-80KCS，上海申安医疗器械厂），电子天平（JM-A10002，余姚市纪铭称重校验设备有限公司），生物显微镜（H6303，重庆光电仪器有限公司），生物安全柜（BSC-IIA2，苏州安泰空气技术有限公司）。

1.5方法

参照能力验证作业指导书与GB 4789.7—2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行实验。

1.5.1样品前处理

根据作业指导书提示，分别对两份待测样品进行单独处理。在生物安全柜中以无菌操作的方式打开装有菌株的西林瓶，将西林瓶内小球放入225 mL已灭菌的3%NaCl碱性蛋白胨水中，充分溶解，然后再将与西林瓶相同编码的鱼蛋白粉样品加入上述3%NaCl碱性蛋白胨水中，充分均质混匀，即制成1∶10的样品匀液。

1.5.2增菌

将制备的1∶10样品匀液在36℃±1℃下培养8～18 h。样品增菌时，对副溶血性弧菌标准菌菌株用3%NaCl碱性蛋白胨水进行复苏，作为阳性对照，与样品同步操作。

1.5.3分离培养

对培养的增菌液用接种环在液面下1 cm处蘸取一环增菌液，分别划线接种于TCBS平板与弧菌显色平板上，在36℃±1℃下培养18～24 h。

TF04390009-47待测样品分离培养结果见表1。

TF04390009-48待测样品分离培养结果见表2。

2结果与分析

2.1TF04390009-47待测样品鉴定结果

由于TCBS平板与弧菌显色平板上均无任何菌落生长，故未检出副溶血性弧菌。

2.2TF04390009-48待测样品鉴定结果

结果见表3与表4。待测样品在TCBS平板与弧菌显色平板上均呈现可疑菌落特征，挑取可疑菌落，划线接种于3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板上，在36℃±1℃下培养18～24 h。挑取纯培养的单个菌落进行生化鉴定，结果为：氧化酶实验为阳性；革兰氏染色镜检为阴性；3%NaCl赖氨酸脱羧酶实验为阳性；3%NaCl半固体动力实验为阳性；V-P实验为阳性；3%NaCl三糖铁琼脂斜面产酸，底层产酸，不产气，不产硫化氢；3%NaCl甘露醇实验为阳性；3%NaCl ONPG实验为阴性；嗜盐性实验中，无盐胰胨水中不生长，6%NaCl胰胨水中生长，8%NaCl胰胨水中生长，10%NaCl胰胨水中生长。综合以上生化鉴定结果及可疑菌落特征，可判定TF04390009-48待测样品未检出副溶血性弧菌。

3讨论

能力验证是利用实验室间比对确定实验室检测能力的一种活动。通过实验室间比对，对评定实验室检测能力、验证检测方法有效性、识别实验室间差异与存在的问题、增强客户信心、改善实验室管理具有十分重要的作用[6]。本次能力验证样品为2份，通过增菌、分离培养与生化鉴定，样品TF04390009-47与TF04390009-48均未检出副溶血性弧菌，结果评价为满意，说明本实验室具备检测副溶血性弧菌的能力。

另外，在进行检测时应注意：1）收到样品后应立即按照作业指导书进行检测，若不能及时检测，应置于2～8℃冰箱内冷藏。2）实验中在对两份样品进行操作时，应分别单独在生物安全柜中操作。使用标准菌株时，应先操作待测样品，再操作标准菌株，避免样品混淆及样品与标准菌株的交叉污染。3）为保证实验结果的准确性，在TCBS、弧菌显色培养基上划线分离培养时，可多做几组平行，方便菌落特征比较，避免偶然性因素对结果的干扰。4）若条件允许，可采用特异性强的荧光PCR技术与国标方法同时操作，避免嗜盐性试验时出现假阳性结果，增加实验结果说服力。

【参考文献】

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[2]刘秀梅，陈艳，王晓英，等.1992—2001年食源性疾病暴发资料分析：国家食源性疾病监测网[J].卫生研究，2004（6）：725-727.

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[4]钟凯，田静，李业鹏，等.食品中副溶血性弧菌PCR快速检测方法的研究[J].中国食品卫生杂志，2004（4）：317-320.

[5]食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验：GB 4789.7—2013[S].

[6]马冲先.能力验证及其评价[J].理化检验（化学分册），2005（11）：74-77，83.

[7]叶玉华.乳粉中金黄色葡萄球菌与沙门氏菌定性检测能力验证结果与分析[J].食品安全导刊，2017（30）：155-156.

【作者简介】

叶玉华，男，1982年出生，工程师，研究方向为食品、农产品质量安全检测。

（编辑：李钰双）