老年女性乳癌组织中Bcl-2蛋白表达及临床意义

［摘要］目的探讨B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）在老年女性乳癌组织中的表达及其与病人临床病理特征和预后的关系。

方法采用免疫组织化学方法检测92例老年女性乳癌组织中Bcl-2蛋白的表达，分析Bcl-2蛋白在老年女性乳癌组织中表达与病人临床病理特征及预后的关系。

结果Bcl-2蛋白在老年女性乳癌组织中的阳性表达率为80.4%。Bcl-2的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、组织学分级和脉管瘤栓相关（χ2=4.459～11.607，P＜0.05）。分子特征分析结果显示，Bcl-2表达与病人的雌激素受体、人表皮生长因子受体-2表达和分子分型相关（χ2=14.572～19.390，P＜0.05）。生存分析显示，Bcl-2的表达与病人无进展生存率及总生存率无关（P＞0.05）。

结论检测Bcl-2蛋白的表达对于判断老年女性乳癌预后和指导治疗具有临床参考价值。

［关键词］乳腺肿瘤；老年人；基因，bcl-2；预后；免疫组织化学；病理学，临床

［中图分类号］R737.9；R365

［文献标志码］A

［文章编号］2096-5532（2024）04-0513-05doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.136

［开放科学（资源服务）标识码（OSID）］

［网络出版］https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.R.20240927.1331.003;2024-09-2908：29：53

Expression and clinical significance of B-cell lymphoma-2 protein in breast cancer tissue of elderly female patients

JIANG Nan， WANG Xin， MA Ping， ZHANG Guofen， LI Xiangli

（Department of Thoracic Surgery， Beijing Chest Hospital， Capital Medical University， Beijing 101149， China）; ［Abstract］ObjectiveTo investigate the expression of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） in the breast cancer tissue of elderly female patients and its association with the clinicopathological features and prognosis of patients.

MethodsImmunohistochemistry was used to measure the expression of Bcl-2 protein in the breast cancer tissue samples of 92 elderly female patients， and its asso-

ciation with clinicopathological features and prognosis was analyzed.

ResultsThe positive expression rate of Bcl-2 was 80.4% in the breast cancer tissue samples of elderly female patients. The expression of Bcl-2 was associated with tumor size， lymph node metastasis， TNM stage， histological grading， and vascular tumor thrombus （χ2=4.459-11.607，P<0.05）. The analysis of molecular characteristics showed that the expression of Bcl-2 was associated with estrogen receptor， Her-2， and molecular typing （χ2=14.572-19.390，P<0.05）. The survival analysis showed that the expression of Bcl-2 was not associated with progression-free survival rate or overall survival rate （P>0.05）.

ConclusionThe measurement of the expression of Bcl-2 protein in breast cancer tissue has a clinical reference value in predicting the prognosis of elderly female patients with breast cancer and guiding the treatment of such patients.

［Key words］breast neoplasms; aged; genes， bcl-2; prognosis; immunohistochemistry; pathology， clinical

乳癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，已经取代肺癌成为全球第一大癌症类型，2020年全球新增病例226万[1]。乳癌也是我国女性最常见的癌症类型[2-4]。随着社会人口老龄化的加剧，老年女性乳癌病人总数日益增多[5]，总体死亡率较高，老年女性乳癌已逐渐成为乳癌诊疗领域关注的重点。肿瘤的发生是多基因参与和协同作用的结果，多种癌基因和抑癌基因与乳癌的预后密切相关[6]。参与细胞凋亡的B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）基因与乳癌的发生、发展及预后密切相关[7-8]。然而，Bcl-2蛋白在老年女性乳癌组织中的研究相对较少。本研究采用免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白在老年女性乳癌组织中的表达，分析其表达与病人临床病理特征的关系及对生存预后的影响，旨在探讨Bcl-2在老年女性乳癌诊断、治疗及预后评估中的作用。

1材料和方法

1.1标本及其来源

选取2011年8月—2019年7月清华大学第一附属医院普外科收治的92例老年女性乳癌病人作为研究对象，病人年龄65～91岁，平均（72.9±6.3）

岁。研究对象一般特征见表1。所有病人均经手术切除乳房，获取92例蜡块组织标本，其中原位癌7例，浸润性癌85例。纳入标准：①女性，年龄≥65岁；②病理结果为乳癌；③术前未行化疗、放疗、内分泌治疗等新辅助治疗；④临床病理资料完整；⑤随访资料完整；⑥未合并其他恶性肿瘤。对所有92例老年女性乳癌病人定期进行生存随访，生存数据主要是通过查阅住院系统电子病历、门诊系统电子病历以及与病人和（或）其亲属的电话访谈收集的。随访时间24～135个月，中位随访时间71.5个月，随访时间截至2022年11月。本研究经清华大学第一附属医院伦理委员会审核批准且所有病人及家属均知情同意。

1.2免疫组织化学方法检测Bcl-2表达

采用SP法对组织切片进行染色，Bcl-2抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司。蜡块切片、脱蜡、水化后，灭活内源性过氧化物酶，高压热抗原修复（EDTA，pH=8.0），滴加Bcl-2抗体（ZM-0010，1∶100），4 ℃孵育过夜，37 ℃孵育2 h，滴加二抗，室温避光孵育30 min，37 ℃孵育30 min，二氨基联苯胺（DAB）避光显色，苏木精复染，透明，封片。以Bcl-2阳性的扁桃体组织作为阳性对照，以磷酸盐缓冲溶液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

1.3免疫组织化学结果判定

Bcl-2免疫组织化学染色结果判定参照文献标准[9]：细胞核或细胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。在阳性区域随机选择5个高倍镜视野，对Bcl-2的阳性强度及阳性细胞比例进行评分。①染色强度评分标准：无着色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；②阳性细胞比例评分标准：无阳性细胞为0分，阳性细胞＜10%为1分，阳性细胞10%～50%为2分，阳性细胞51%～75%为3分，阳性细胞＞75%为4分。染色总评分=阳性细胞比例评分×染色强度评分。染色总评分≥4分为阳性，＜4分为阴性。

1.4统计学处理

采用SPSS 26.0统计软件对数据进行统计学分析。计数资料比较采用Pearson χ2检验；采用Kaplan-Meier生存分析法（Log-rank检验）进行生存分析。以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Bcl-2在老年女性乳癌组织中的表达

老年女性乳癌组织中Bcl-2主要表达于细胞质。 92例老年女性乳癌病人中，Bcl-2的阳性表达率为80.4%（74/92）。见图1。

2.2Bcl-2与临床病理特征的关系

肿瘤直径≤2 cm、无淋巴结转移、TNM分期为0～Ⅰ期、组织学Ⅰ或Ⅱ级、无脉管瘤栓的老年女性乳癌病人癌组织中Bcl-2的表达率分别显著高于肿瘤直径＞2 cm、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅱ～Ⅲ期、组织学Ⅲ级、有脉管瘤栓的病人（χ2=4.459～11.607，P＜0.05），而Bcl-2表达与病人的年龄、肿瘤部位和病理类型无关（P＞0.05）。见表1。

2.3Bcl-2与分子特征的关系

雌激素受体（ER）阳性、人表皮生长因子受体-2（Her-2）阴性、Luminal A型或Luminal B型的老年女性乳癌病人癌组织中Bcl-2的阳性表达率分别显著高于ER阴性、Her-2阳性、Her-2过表达型的病人（χ2=14.572～19.390，P＜0.05），而Bcl-2的表达与孕激素受体（PR）和Ki-67表达无关（P＞0.05）。见表2。

2.4Bcl-2表达与老年女性乳癌病人术后生存时间的关系

对92例老年女性乳癌病人进行生存分析，结果显示，Bcl-2阳性组的3年无进展生存率 （PFS）为89.2%，5年PFS为86.5%，总PFS为81.1%；Bcl-2阴性组的3年PFS为88.9%，5年PFS为83.3%，总PFS为83.3%，两组比较差异均无统计学意义（χ2=0.005，P=0.946）。见图2A。Bcl-2阳性组的3年总生存率（OS）为95.9%，5年OS为94.6%，总OS为82.4%；Bcl-2阴性组病人的3年PFS为88.9%，5年PFS为83.3%，总PFS为83.3%，两组比较差异无统计学意义（χ2=0.438，P=0.508）。见图2B。

3讨论

研究表明，我国老年女性乳癌的发病率呈上升趋势，70～74岁已经成为乳癌发病年龄的第二高峰[10-11]，且年龄越大，预后越差[12-13]。作为乳癌病人中的特殊群体，老年女性乳癌病人的临床病理特征具有特殊性。乳癌是一种高度异质性肿瘤，其疾病发展是一个多基因参与、多阶段演变的复杂生物学过程[14]。乳癌的发生不仅与某些原癌基因和肿瘤抑制基因的突变、缺失或激活有关，也与细胞凋亡的抑制有关[15]。Bcl-2基因是一种抗凋亡基因，其表达通过变更或移位而增强[16-18]，其表达产物对多种因素诱导的细胞凋亡具有抑制作用。研究发现，参与细胞凋亡的Bcl-2基因产物在淋巴造血组织、肾癌、胃癌、乳癌及神经胶质瘤中均有表达[19]，Bcl-2基因与肿瘤细胞的增殖密切相关。此外，Bcl-2也是调节细胞自噬的重要因子，其在肿瘤中过表达可减少细胞的自噬活性，并结合其抗凋亡作用维持癌细胞的生存[20-23]。理论上，Bcl-2蛋白可以抑制凋亡，减少自噬并使肿瘤细胞永生化。Bcl-2表达越强，细胞生长越快，恶性程度越高，越容易发生浸润和转移，预后越差。但当Bcl-2基因在乳癌中高表达时，总体结果确实与更好的病理生物学行为相关[24-28]。ZINKEL等[29]研究表明，Bcl-2基因不仅

能抑制细胞凋亡，还可以延长细胞周期，从而延缓肿瘤细胞的增殖。KE等[30]研究发现，Bcl-2高表达可以减弱乳癌细胞的扩散和迁移能力。上述研究结果可能部分解释了为什么乳癌组织中Bcl-2的高表达与更好的病理生物学行为相关。

国内外研究发现，无区域淋巴结转移、临床分期较早、组织学分级较低以及肿瘤较小的肿瘤中Bcl-2高表达的比例较高[9，24，31-32]。本文研究结果显示，Bcl-2的表达与肿瘤较大、有区域淋巴结转移、临床分期晚、组织学分级高、有脉管瘤栓等预后较差因素呈负相关。与国内外研究结果一致，Bcl-2在老年女性乳癌组织中的高表达与较好的临床病理特征及预后密切相关。对Bcl-2与生存预后相关性研究显示，Bcl-2阳性病人的PFS和OS均明显优于Bcl-2阴性病人[9，24]。另有研究结果表明，三阴性乳癌中的Bcl-2高表达预示着病人预后不良[33]。本研究中Bcl-2阳性和阴性老年女性乳癌病人的PFS及OS均无明显差异。这可能与样本量较小以及老年人的治疗依从性较差有关。

MELELLA等[34]研究结果表明，雌激素可以刺激乳癌细胞系MCF-7中Bcl-2的表达，提示Bcl-2蛋白在ER阳性乳癌中的表达受雌激素的调节。VAN等[31]研究发现Bcl-2在ER阳性乳癌组织中表达更高。ER在乳癌组织中的高表达提示肿瘤分化高，恶性程度低，对内分泌治疗敏感等[32]。李娟等[9]和HWANG等[24]等研究发现，Bcl-2在Her-2阴性的乳癌组织中表达明显增高。Her-2参与调控细胞生长，促进肿瘤增殖分化，其过度表达提示恶性程度高，预后不良[28]。TAWFIK等[33]和KOLA-

CINSKA等[35]研究发现，Bcl-2在Luminal A型乳癌组织中明显高表达。本文研究结果显示，Bcl-2蛋白在ER阳性、Her-2阴性和Luminal A型乳癌组织中均高表达，与国内外研究结果基本一致。因此，Bcl-2在老年女性乳癌组织中的高表达提示对内分泌治疗敏感且预后良好。

本研究存在下列不足和缺陷：①样本量小，研究结果可能存在一定偏差；②单中心研究有一定局限性；③入组病例时间跨度较大，治疗方案存在一定差异。未来将进一步开展多中心研究，在短时间内获得足够的样本，以减少上述原因造成的局限性。

综上所述，Bcl-2蛋白与乳癌的发生发展密切相关。在老年女性乳癌中，Bcl-2高表达与更好的临床病理特征呈正相关，预示预后更好。检测乳癌组织中Bcl-2蛋白的表达对于判断老年女性乳癌预后和指导治疗具有临床参考价值。

［参考文献］

[1]SUNG H， FERLAY J， SIEGEL R L， et al. Global cancer statistics 2020： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA： a Cancer Journal for Clinicians， 2021，71（3）：209-249.

[2]CAO W， CHEN H D， YU Y W， et al. Changing profiles of cancer burden worldwide and in China： a secondary analysis of the global cancer statistics 2020[J]. Chinese Medical Journal， 2021，134（7）：783-791.

[3]ZHENG R S， ZHANG S W， ZENG H M， et al. Cancer incidence and mortality in China， 2016[J]. Journal of the National Cancer Center， 2022，2（1）：1-9.

[4]RAHMAT S A， HE Y T. Cancer burden and attributable risk factors of cancers in China： epidemiological insights and comparisons with India[J]. Cancer Control， 2024，31：10732748241276674.

[5]郑荣寿，孙可欣，张思维，等. 2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 中华肿瘤杂志， 2019，41（1）：19-28.

[6]姜楠，颜承平，刘晋红，等. 乳腺癌组织中雌孕激素受体、c-erbB-2、p53、bcl-2 及pS2 的表达及意义[J]. 中华临床医师杂志（电子版）， 2010，4（11）：2127-2130.

[7]AL-ZUBAIDY H F S， MAJEED S R， AL-KOOFEE D A F. Evaluation of Bax and BCL 2 genes polymorphisms in Iraqi women with breast cancer[J]. Archives of Razi Institute， 2022，77（2）：799-808.

[8]王洋，刘伟，韩晓东，等. 乳腺癌患者病理特征与Bcl-2、CXCL13、PAX8表达情况的关系分析[J]. 检验医学与临床， 2024，21（10）：1431-1435.

[9]李娟，王建成，陈小红. 人乳头瘤病毒感染对乳腺癌患者p53、bcl-2和c-erbB-2表达及预后的影响[J]. 中国肿瘤外科杂志， 2023，9（1）：76-79.

[10]FAN L， ZHENG Y， YU K D， et al. Breast cancer in a transitional society over 18 years： trends and present status in Shanghai， China[J]. Breast Cancer Research and Treatment， 2009，117（2）：409-416.

[11]WU L， CHEN G Z， ZENG Z R， et al. Analysis of breast cancer screening results and influencing factors of breast cancer in Guangdong Province from 2017 to 2021[J]. Journal of Epidemiology and Global Health， 2024，14（1）：131-141.

[12]SOTO-PEREZ-DE-CELIS E， LI D N， YUAN Y， et al. Functional versus chronological age： geriatric assessments to guide decision making in older patients with cancer[J]. The Lancet Oncology， 2018，19（6）：e305-e316.

[13]RUCKHBERLE E， SCHMIDT M， WELT A， et al. Palbociclib： randomized studies and real-world evidence as the basis for therapeutic planning in metastatic breast cancer[J]. Geburtshilfe und Frauenheilkunde， 2024，84（9）：813-836.

[14]NARZIEYVA D F， JONIBEKOV J J， ERKINOVA S N.

Morphological features of tumor in different treatment options for patients with locally advanced breast cancer[J]. Middle European Scientific Bulletin， 2020，1（7）：105-107.

[15]SUN B Q， ZHAO H W. The bioinformatics analysis of RIOX2 gene in lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma[J]. PLoS One， 2021，16（12）：e0259447.

[16]MOLTO L， RAYMAN P， PASZKIEWICZ-KOZIK E， et al. The Bcl-2 transgene protects T cells from renal cell carcinoma-mediated apoptosis[J]. Clinical Cancer Research： an Official Journal of the American Association for Cancer Research， 2003，9（11）：4060-4068.

[17]CZYSTOWSKA M， SZCZEPANSKI M J， SZAJNIK M， et al. Mechanisms of T-cell protection from death by IRX-2： a new immunotherapeutic[J]. Cancer Immunology， Immunotherapy， 2011，60（4）：495-506.

[18]YU B， SUN X， SHEN H Y， et al. Expression of the apoptosis-related genes BCL-2 and BAD in human breast carcinoma and their associated relationship with chemosensitivity[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research， 2010，29（1）：107.

[19]KIM R， EMI M， MATSUURA K， et al. Therapeutic potential of antisense （AS） Bcl-2 as a chemosensitizer for patients with gastric and breast carcinoma[J]. Gan to Kagaku Ryoho Cancer & Chemotherapy， 2005，32（11）：1540-1545.

[20]WANG H， XU B， SHI J. N6-methyladenosine METTL3 promotes the breast cancer progression via targeting Bcl-2[J]. Gene， 2020，722： 144076.

[21]ZHANG J， ZHANG S Q， SHI Q， et al. The anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL suppress Beclin 1/Atg6-mediated lethal autophagy in polyploid cells[J]. Experimental Cell Research， 2020，394（1）：112112.

[22]ZHANG Y X， LIU S Y， ZHAO T S， et al. METTL3-mediated m6A modification of Bcl-2 mRNA promotes non-small cell lung cancer progression[J]. Oncology Reports， 2021，46（2）：163.

[23]RAMKUMAR K， TANIMOTO A， DELLA CORTE C M， et al. Targeting BCL2 overcomes resistance and augments response to aurora kinase B inhibition by AZD2811 in small cell lung cancer[J]. Clinical Cancer Research： an Official Journal of the American Association for Cancer Research， 2023，29（16）：3237-3249.

[24]HWANG K T， KIM Y A， KIM J， et al. Prognostic influences of BCL1 and BCL2 expression on disease-free survival in breast cancer[J]. Scientific Reports， 2021，11（1）：11942.

[25]FABI A， MOTTOLESE M， BENEDETTO A D， et al. p53 and BLC2 immunohistochemical expression across molecular subtypes in 1099 early breast cancer patients with long-term follow-up： an observational study[J]. Clinical Breast Cancer， 2020， 20（6）：e761-e770.

[26]吕德明，俎彩霞，吕凌霄. 乳腺癌PTEN、Ki-67、Bcl-2和BRCA-1蛋白表达情况及其与临床预后的关系[J]. 中国妇幼保健， 2020，35（10）：1921-1924.

[27]焦丹，刘越. p53和Bcl-2阳性表达与乳腺癌患者临床特征的关系[J]. 癌症进展， 2019，17（12）：1445-1448.

[28]李清苗，谷国梅，师晨阳. p53及bcl-2蛋白在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2表达的相关性[J]. 实用癌症杂志， 2021，36（4）：567-570.

[29]ZINKEL S， GROSS A， YANG E. BCL2 family in DNA da-

mage and cell cycle control[J]. Cell Death and Differentiation， 2006，13（8）：1351-1359.

[30]KE H N， PARRON V I， REECE J， et al. BCL2 inhibits cell adhesion， spreading， and motility by enhancing actin polyme-

rization[J]. Cell Research， 2010，20（4）：458-469.

[31]VAN NGUYEN C， NGUYEN Q T， VU H T N， et al. Combined p53 and Bcl2 immunophenotypes in prognosis of Vietnamese invasive breast carcinoma： a single institutional retrospective analysis[J]. Technol253094e09458b18b8334655e2ddda498e66be5cd9ce755a3360212511025f8dcogy in Cancer Research & Treatment， 2020，19：1533033820983081.

[32]黄信，张清，吕荣钊，等. 乳腺癌组织中蛋白 Bcl-2的表达及意义[J]. 暨南大学学报（自然科学与医学版）， 2015，36（5）：421-424.

[33]TAWFIK K， KIMLER B F， DAVIS M K， et al. Prognostic significance of Bcl-2 in invasive mammary carcinomas： a comparative clinicopathologic study between “triple-negative” and non-“triple-negative” tumors[J]. Human Pathology， 2012，43（1）：23-30.

[34]MILELLA M， TRISCIUOGLIO D， BRUNO T， et al. Trastuzumab down-regulates Bcl-2 expression and potentiates apoptosis induction by Bcl-2/Bcl-XL bispecific antisense oligonu-

cleotides in HER-2 gene： amplified breast cancer cells[J]. Clinical Cancer Research： an Official Journal of the American Association for Cancer Research， 2004，10（22）：7747-7756.

[35]KOLACINSKA A， CHALUBINSKA J， ZAWLIK I， et al. Apoptosis-， proliferation， immune function-， and drug resis-

tance-related genes in ER positive， HER2 positive and triple negative breast cancer[J]. Neoplasma， 2012，59（4）：424-432.

（本文编辑牛兆山）