基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的川、浙麦冬差异性成分分析

摘要：目的：使用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术（超高效液相色谱-飞行时间质谱联用）联合多元统计分析技术分析川、浙麦冬的差异成分。方法：质谱解析软件（Markerview）对液质采集数据进行成分分析，应用主成分分析（PCA）等对其进行差异性聚类。结果：鉴定或推断了川、浙麦冬22个差异化合物，其中11个黄酮类化合物、11个皂苷类化合物。结论：通过该研究建UPLC-Q-TOF-MS/MS结合多元统计分析方法，明确了四川以及浙江产地麦冬的差异化学成分。

关键词：UPLC-Q-TOF-MS/MS麦冬主成分分析差异成分

DifferentialComponentAnalysisofOphiopogonJaponicusinSichuanandZhejiangProvincesBasedonUPLC-Q-TOF-MS/MSTechnology

SHANGYaruRENXiaoleiSUNGuodongTONGziyingHUOJinhai*

HeilongjiangAcademyofTraditionalChineseMedicine，Harbin，HeilongjiangProvince，150036，China

Abstract：Objective：ToanalyzethedifferentialcomponentsofOphiopogonjaponicusinSichuanandZhejiangbyusingUPLC-Q-TOF-MS/bj1APaJvPVB0sHzFsYdMhg==MScombinedwithmultivariatestatisticalanalysis.Methods：Markerviewwasusedtoanalyzethecompositionofliquidmassacquisitiondata，andPrincipalComponentAnalysis（PCA）wasusedtoclusterthemdifferentially.Results：Atotalof22differentialcompoundswereidentifiedorinferred，including11flavonoidsand11saponins.Conclusion：Inthisstudy，UPLC-Q-TOF-MS/MScombinedwithmultivariatestatisticalanalysismethodwasestablishedtoclarifythedifferentiationcomponentsofOphiopogonvulgarisinSichuanandZhejiang.

KeyWords：UPLC-Q-TOF-MS/MS;Ophiopogonjaponicus;Principalcomponentanalysis;

Differentialcomponents

川、浙麦冬在《中国药典》均划分为百合科植物麦冬Ophiopogonjaponicus（L.f.）Ker-Gawl.的干燥块根，在《神农本草经》中被列为上品[1]。其传统主产地为四川、浙江两地，分别称为川麦冬和浙麦冬[2]。现对于麦冬的研究主集中在本草考证[3]、显微特征与性状[4]、化学成分[5-7]、药理作用[7-8]等方面，关于麦冬的不同产区研究，更多的在于单一/主要成分的药理作用及含量变化。

1仪器与试剂

1.1仪器

ABSciexUPLC液相色谱仪；ABSciex5600+型质谱仪；AnalystTF1.6工作站；PeakView®2.0软件；KQ-800KDB型超声波清洗仪等。

1.2试剂

甲醇，蒸馏水，甲酸。

2药材

麦冬药材采自四川省和浙江省，经黑龙江省中医药科学院霍金海研究员鉴定为百合科植物Ophiopogonjaponicus（L.f）Ker-Gawl的干燥块根，粉碎前于50℃烘箱烘8h。

3方法

3.1供试品溶液制备

取本品粉末（过4号筛）约1.0g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25mL，称重，超声处理45min（800W，40kHz），放至室温，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.2色谱-质谱条件

色谱柱：ACQUITYTMBEHC18（2.1mm×100mm，1.7µm）；预柱：ACQUITYTMUPLCBEHC18保护柱（5mm×2.1mm，1.7µm）；柱温：35℃；流动相：A（0.1%甲酸水）B（0.1%甲酸甲醇）；洗脱方式：全梯度洗脱，梯度洗脱程序：0～23min，95%A；23～23.01min，0%～95%A；23.01～25min，95%A；流速：0.3mL/min；样品仓温度：4℃；进样量：10µL。

ESI离子源在正、负离子模式下采集数据，正负离子源电压分别为5500V/-4500V，离子源温度为550℃，雾化气体为N2，雾化气（Gas1）为55psi，辅助气（Gas2）为55psi，气帘气（Curtaingas）为35psi，裂解电压（DP）分别为80V，碰撞能量（CE）分别为35eV，碰撞能量扩展（CES）均为15eV。TOFMS扫描范围为100～1500Da，IDA设置响应值超过100cps的8个最高峰进行二级质谱扫描，ProductIon扫描范围为50～1500Da，开启动态背景扣除。

4结果

4.1差异成分分析

4.1.1川、浙麦冬PCA散点得分图

4.2.2偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）

将8批川、浙麦冬样品的所解析出的20个差异成分的峰面积导入SIMCA14.0软件中进行偏最小二乘判别分析。以不同样品的20个峰面积为自变量，样品类型为因变量建立OPLS-DA判别模型进行分析。而R2Y（cum）=0.810，Q2（cum）=0.629，显示模型拟合及预测效果良好。

4.2.2差异成分结构鉴定

通过UPLC-Q-TOF/MS技术分析与鉴定，推断川、浙麦冬中20个化合物，结果如表1所示。

4.2化合物的质谱裂解特征分析

4.2.1黄酮类化合物的分析鉴定

实验共分析鉴定了11种黄酮类化合物，以15号化合物为例，ESI+模式下准分子离子的质荷比分别为m/z329[M+H]+，经碰撞产生碎片离子m/zm/z207[M+H-C8H10O]+，又经碰撞产生碎片离子121M+H-C8H10O-CO]+，根据数据库推断化合物化合物15为甲基麦冬二氢高异黄酮B，该化合物的二级质谱图与标准品比对镜像图如图4，可能的裂解方式如图5。

4.2.2皂苷类化合物的分析鉴定

实验共分析鉴定了8种皂苷类化合物，以9号化合物为例，ESI+模式下准分子离子的质荷比855[M+H]+，经碰撞产生碎片离子711[M+H-C8H16O2]+，579[M+H-C8H16O2-C5H8O4]+，433[M+H-C8H16O2-C5H8O4-C6H10O4]+，413[M+H-C17H30O13]+，395[M+H-C17H30O13-H2O]+，377[M+H-C17H30O13-2H2O]+，287[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4]+，269[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4-H2O]+，251[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4-2H2O]+，147[M+H-C35H48O15]+，129[M+H-C35H50H16]+，根据数据库推断化合物9为麦冬皂苷D'，化合物的二级质谱图与标准品比对镜像图如图6，可能的裂解方式如图7。

5讨论

本实验采用UPLC-Q-TOF/MS技术对川、浙麦冬中的差异化学成分进行了系统定性分析。结果表明，四川产地与浙江产地麦冬在化学成分上差异有统计学意义，为后续进行目标化学物质及相关药理作用的研究探索提供依据，以便进一步完善浙麦冬和川麦冬的质量评价体系。

参考文献

• 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：人民卫生出版社，2015：155-156.
• 李振丰，徐建中，王治，等.浙麦冬产地加工不同干燥方法研究[J].中国现代中药，2016，18（12）：1624-1627.
• 赵佳琛，王艺涵，翁倩倩，等.经典名方中麦冬的本草考证[J].中国现代中药，2020，22（8）：1381-1392.
• 莫建霞.常用商品麦冬类药材的比较鉴别[J].中药材，2010，337：1074-1076.
• LIXE，WANGYX，SUNP，etal.Determinationofsaponincontentinhangmaidongandchuanmaidongviahplc-elsdanalysis[J].JAnalMethodsChem，2016，2016：7214607.
• 李小辉，袁名睿，陆雪萍，等.麦冬的化学成分研究[J].中草药，2021，52（13）：3804-3809.

[7]彭婉，马骁，王建，等.麦冬化学成分及药理作用研究进展[J].中草药，2018，49（2）：477-488.

• 周二付.中药材麦冬的药理作用研究[J].中医临床研究，2017，9（9）：125-126.