ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪检测抗酸杆菌效果

董捷 唐柳生 杨小兵 黄丽玲

[摘要] 目的 评价ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪在痰涂片查找抗酸杆菌的阅片效果。方法 收集2023年5月于广西壮族自治区胸科医院就诊患者的合格痰标本203份，分别采用萋-尼染色法和荧光染色法进行染色，通过人工镜检和ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪进行抗酸杆菌检测，以分枝杆菌液体培养为标准，计算不同方法查找抗酸杆菌的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果 荧光染色人工阅片和仪器智能阅片的阳性率分别为12.3%和18.7%，萋-尼染色人工阅片和仪器智能阅片的阳性率分别为13.3%和17.7%，4种阅片检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。以分枝杆菌液体培养结果为标准，荧光染色人工阅片和仪器智能阅片、萋-尼染色人工阅片和仪器智能阅片检测抗酸杆菌的敏感度分别为40.0%、45.0%、45.0%和53.3%，特异性分别为99.3%、92.3%、100.0%和97.2%，阳性预测值分别为96.0%、71.0%、100.0%和88.9%，阴性预测值分别为79.8%、80.0%、81.2%和83.2%，一致性均较好。结论 两种染色方法应用ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪检测抗酸杆菌的性能较好，值得推广应用。

[关键词] 显微扫描仪；抗酸杆菌；敏感度；特异性；一致性

[中图分类号] R446      [文献标识码] A      [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.16.007

Evaluation of ZOPOMED-60 mycobacterium tuberculosis microscanner for detecting acid-fast bacilli in sputum smears

DONG Jie1， TANG Liusheng1， YANG Xiaobing1， HUANG Liling2

1.Medical Laboratory， Chest Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region， Liuzhou 545005， Guangxi， China; 2.Department of Science and Education， Chest Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region， Liuzhou 545005， Guangxi， China

[Abstract] Objective To evaluate the effect of ZOPOMED-60 mycobacterium tuberculosis microscanner on detecting acid-fast bacilli in sputum smears. Methods A total of 203 qualified sputum specimens from patients treated in Chest Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region in May 2023 were collected. The samples were stained by using Ziehl-Neelsen staining and fluorecent staining， respectively， and the acid-fast bacillus was detected by the manual microscopy and ZOPOMED-60 mycobacterium tuberculosis microscanner. The sensitivity， specificity， positive predictive value and negative predictive value of acid-fast bacillus were calculated using different methods based on liquid culture of mycobacterium. Results The positive rates of manual reading and instrument intelligent reading of fluorecent staining were 12.3% and 18.7%， respectively， and the positive rates of manual reading and instrument intelligent reading of Ziehl-Neelsen staining were 13.3% and 17.7%， respectively. There was no significant difference between the four reading results （P>0.05）. Based on the results of liquid culture of mycobacterium， sensitivity of manual reading and instrument intelligent reading of fluorecent staining and manual reading and instrument intelligent reading of Ziehl-Neelsen staining were 40.0%， 45.0%， 45.0% and 53.3%， specificity were 99.3%， 92.3%， 100.0% and 97.2%， positive predictive values were 96.0%， 71.0%， 100.0% and 88.9%， and negative predictive values were 79.8%， 80.0%， 81.2% and 83.2%， respectively. The consistency was good. Conclusion The performance of ZOPOMED–60 mycobacterium tuberculosis microscanner in the detection of acid-fast bacilli by two staining methods is good， and it is worth popularizing.

[Key words] Microscanner; Acid-fast bacilli; Sensitivity; Specificity; Consistency

结核病是由结核杆菌引起的一类慢性传染病，抗酸杆菌检测是诊断结核病的重要手段，其中抗酸杆菌涂片是最简单易行的一种方法[1-7]。但传统的阅片方法阳性率低，实验室人员容易疲劳从而造成漏检。本研究纳入203份痰标本，采用萋-尼染色法和荧光染色法进行染色，通过人工镜检和ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪进行阅片，对ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪的应用效果进行评价。

1  材料与方法

1.1  标本来源

收集2023年5月于广西壮族自治区胸科医院就诊患者的合格痰标本203份作为研究对象，标本量2～3ml。

1.2  仪器与试剂

ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪购自郑州中普公司，BS1000全自动分枝杆菌培养监测仪、液体培养管、样本稀释液、痰消化液、荧光染液和萋-尼染液均购自珠海贝索公司，CX-40显微镜购自浙江舜宇公司。

1.3  方法

1.3.1  痰涂片查找抗酸杆菌  患者晨起后清水漱口，立即从下呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中，及时送检。小心打开痰标本容器，挑取标本的脓样、干酪样或可疑部分0.05～0.10ml，在玻片正面的右侧2/3中央处均匀涂抹成1.0cm×2.0cm大小的卵圆形痰膜，同样方法制片两张，待自然干燥后，分别用萋-尼染液和金胺“O”染液进行染色，通过人工镜检和ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪进行抗酸杆菌检测。人工镜检的荧光染色法结果分级报告标准：抗酸杆菌阴性（–）：0条/50视野；抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌数）：1～9条/50视野；抗酸杆菌阳性（+）：10～49条/50视野；抗酸杆菌阳性（++）：1～9条/视野；抗酸杆菌阳性（+++）：10～99条/视野；抗酸杆菌阳性（++++）：≥100条/视野。人工镜检的萋-尼染色法结果分级报告标准：抗酸杆菌阴性（–）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌；抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌数）：1～6条/300视野；抗酸杆菌阳性（+）：3～9条/100视野；抗酸杆菌阳性（++）：1～9条/10视野；抗酸杆菌阳性（+++）：1～9条/视野；抗酸杆菌阳性（++++）：≥10条/视野。ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪可自动报告阴性、高度怀疑（荧光<5条/50视野，萋-尼<5条/300视野）、阳性（+）（荧光10～49条/50视野，萋-尼3～9条／100视野）、阳性（++）（荧光1～9条/视野，萋-尼1～9条／10视野）、阳性（+++）（荧光10～99条/视野，萋-尼1～9条／视野）及阳性（++++）（荧光≥100条/视野，萋-尼≥10条／视野）结果。

1.3.2  分枝杆菌液体培养  无菌吸管取2～5ml痰液至50ml无菌离心管内，根据样本的黏稠度和污染度，加入1～2倍的痰消化液，涡旋振荡20s至样本均化，上下颠倒5次使溶液接触整个离心管内表面，静置15min去污染。静置去污染的间隙，每支分枝杆菌培养管中加入0.8ml添加剂复溶物。去污染完成后，加入磷酸盐缓冲液至总体积45ml，盖紧盖子，颠倒混匀。将离心管放入带盖的安全离心杯中，消毒外表面，移出安全柜，在冷冻离心机中以3000g，4℃离心15～20min。离心完成后，上清液倒入含消毒剂的防溅废液瓶内，以沾有消毒剂的纱布消毒离心管管口，再盖上试管盖。加入1～2ml无菌磷酸盐缓冲液，将沉淀轻微混合成悬液，取0.5ml接种至培养管。接种后的培养管扫码放入全自动分枝杆菌培养监测仪进行培养，仪器自动报告检测结果，报告阳性的培养管用萋-尼染色法进行抗酸杆菌确定。

1.4  统计学方法

采用Excel 2010建立数据库，SPSS 13.0软件进行统计学分析。以液体培养法为金标准，计算不同方法查找抗酸杆菌的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值。不同方法检测结果的一致性用Kappa检验判别（Kappa<0.4为一致性较差，0.4≤Kappa<0.75为具有较好一致性，Kappa≥0.75为高度一致性）。P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  荧光染色两种阅片结果比较

人工阅片阳性25例（其中2例阳性1条、2例阳性2条、5例阳性5条、1例阳性6条、5例阳性（+）、2例阳性（++）、5例阳性（+++）、3例阳性（++++），阳性率为12.3%（25/203）；ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪智能阅片阳性38例，其中9例阳性（+）、4例阳性（++）、6例阳性（+++）、2例阳性（++++）、高度怀疑17例，阳性率为18.7%（38/203），二者比较差异无统计学意义（χ2=2.71，P=0.08），两种阅片结果一致率为92.6%（188/203），见表1。

2.2  萋-尼染色两种阅片结果比较

人工阅片阳性27例，其中2例阳性1条、3例阳性2条、1例阳性3条、1例阳性5条、10例阳性（+）、3例阳性（++）、5例阳性（+++）、2例阳性（++++），阳性率为13.3%（27/203）；ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪智能阅片阳性36例，其中8例阳性（+）、4例阳性（++）、4例阳性（+++）、3例阳性（++++）、高度怀疑17例，阳性率为17.7%（36/203），二者比较差异无统计学意义（χ2=1.20，P=0.18），两种阅片结果一致率为93.6%（190/203），见表2。

2.3  两种染色方法人工阅片结果比较

萋-尼染色法与荧光染色法的阳性率比较差异无统计学意义（χ2=0.02，P=0.45），两种染色方法检测抗酸杆菌结果的一致率为95.1%（193/203），见表3。

2.4  两种染色方法仪器智能阅片结果比较

萋-尼染色法与荧光染色法的阳性率比较差异无统计学意义（χ2=0.02，P=0.47），两种染色方法检测抗酸杆菌结果的一致率为85.2%（173/203），见表4。

2.5  不同染色查找抗酸杆菌与液体培养法检测抗酸杆菌的比较

203份标本经液体培养，阳性60例，阳性率为29.6%。以液体培养法为标准，4种阅片方法查找抗酸杆菌与液体培养法检测抗酸杆菌均具有较好的一致性，见表5。

3  讨论

目前，结核病仍是严重危害人类健康的主要传染病之一，是全球关注的公共卫生和社会问题。中国的结核病负担较重，亟需一种快速又简单易行的病原学方法诊断结核病。传统的抗酸杆菌涂片虽简单易行但较费时，按照每天一名镜检人员涂片阅读量不应超过25张的规定，远不能满足临床需求。近年来有学者报道智能阅片检测抗酸杆菌的阳性率高于人工阅片[8]。本研究采用萋-尼染色法和荧光染色法进行染色，通过人工镜检和ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪进行阅片，结果显示两种染色方法ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪的阅片阳性率均高于人工阅片，但比较差异均无统计学意义。李强等[9]研究也显示扫描仪阳性率略高于人工镜检，体现智能阅片的优势。本研究显示两种方法染色后无论人工阅片还是ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪阅片，抗酸杆菌检测结果差异均无统计学意义。赵慧等[10]报道荧光染色的敏感度（57.58%）高于萋-尼染色（41.67%），可能是ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪与其他设备在性能上存在差异，情况是否属实仍有待进一步研究。通常情况下萋-尼染色法使用热染方式进行染色，温度较难控制而引起染色效果不佳，而荧光染色法染色无需加热，从初染到复染操作便捷，自然干燥后即可用低倍镜进行镜检，观察50个视野即可报告阴性结果，而萋-尼染色法需要用油镜进行镜检，观察300个视野才能报告阴性结果，用人工阅片方式进行检测比荧光染色法更易产生疲劳。

本研究发现，两种染色方法的人工阅片阳性率均略低于ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪智能阅片，但差异均无统计学意义，提示ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪智能阅片可提高分枝杆菌的检出率，萋-尼染色两种方法阅片结果一致率和一致性均略高于荧光染色，说明荧光染色易出现假阳性或假阴性；唐柳生等[11]报道非结核分枝杆菌检测采用涂片法易产生漏检，可能与非结核分枝杆菌的形态不典型有关。

本研究以液体培养法为标准[12]，荧光染色和萋-尼染色人工阅片的敏感度分别为40.0%和45.0%，仪器智能阅片的敏感度较高，分别为45.0%和53.3%，4种阅片结果的敏感度相差不大。王前等[13]研究也证实自动阅片技术诊断病原学阳性肺结核的敏感度高于人工阅片，可用于患者抗酸杆菌的筛查。本研究还显示萋-尼染色人工阅片的阳性预测值和特异性均达100%，高于仪器智能阅片，说明智能阅片存在少量的假阳性，报告结果时仍需人工审核。

综上，本研究结果证明ZOPOMED-60结核分枝杆菌显微扫描仪可快速检测抗酸杆菌，具有敏感度和特异性高、自动化程度高、操作简单、便捷的特点，可替代传统的人工阅片方式，值得推广应用。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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（收稿日期：2023–09–06）

（修回日期：2024–04–19）

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