动物源食品中氯丙嗪检测技术研究进展

◎ 金 伟，李惠颖，张 宁

（青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266073）

氯丙嗪属于吩噻嗪类镇静剂，其具有镇痛、镇吐和麻醉等作用[1-2]，常用于人类精神疾病的治疗，可以控制精神病人的狂躁症状，降低或减轻患者的妄想，使精神病人的思维活动趋于正常，但氯丙嗪具有嗜睡、体位性低血压等副作用，长期大量服用还会引起运动障碍、流涎等锥体外系反应[1]。在畜禽养殖中使用氯丙嗪可以治疗畜禽外伤、烧伤、中暑和食道梗塞等症状，但有些不法商贩常常滥用氯丙嗪，导致畜禽体内有氯丙嗪残留[3]。《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）明确指出，氯丙嗪可以在畜禽养殖中作治疗用，但动物源食品中不得检出。近年来，我国氯丙嗪残留检出率较高，刘坤等[4]对2020—2021 年国家市场监督管理总局发布的我国畜肉产品主要药物风险因素进行了调查分析，发现在406 批次不合格猪肉及副产品样品中有15 批次样品不合格项目为氯丙嗪。山东省市场监督管理局2022—2023 年发布的食品不合格情况通告中，多批次猪肉及副产品检出氯丙嗪残留。这些不合格食品被人们长期食用后会在体内积蓄氯丙嗪，增加肝脏负担，并可能会对血细胞产生不良影响，严重危害身体健康[5]。因此，构建一种高灵敏度且快速的氯丙嗪检测方法对食品安全监管具有重要意义。本文对动物源食品中氯丙嗪的检测技术进行了详细的综述，以期对氯丙嗪检测方法的建立与优化提供参考。

1 酶联免疫法

酶联免疫法是基于抗体与抗原特异性结合免疫学原理而建立的一种分析方法，该方法灵敏度高、操作简便，但是该方法重复性差不能准确定量，需要其他方法进行确证。目前建立的动物源食品中氯丙嗪检测的酶联免疫法有很多，刘建静[6]通过傅克酰基化法和偶氮苯甲酸法两种方式制备了两种氯丙嗪半抗原，建立了氯丙嗪间接竞争酶联免疫法，该方法中氯丙嗪与其他5 种吩噻嗪类药物的交叉反应率在23.87%～42.79%，检测限为4.5 ng·mL-1，线性范围为0.99 ～1 905 ng·mL-1，牛奶样品中氯丙嗪的回收率在65.0%～114.6%。袁利鹏等[7]以氯丙嗪为原料首先合成N-甲基氯丙嗪再与丙烯酸叔丁酯反应得到氯丙嗪半抗原，建立了氯丙嗪检测的间接竞争酶联免疫法，该方法的检测限为0.05 ng·g-1，检测范围为0.09 ～3.45 ng·g-1，对氯丙嗪的 平均回收率为88.49% ～94.36%，变异系数为5.20%～7.67%，该方法对5 种氯丙嗪结构类似物的交叉反应率为2.1%～29.0%。孙文佳等[8]将化学发光法与酶联免疫法相结合构建了化学发光酶免疫法以检测氯丙嗪，该方法既具备酶联免疫法的特异性，又具备化学发光法的高灵敏度，其检出限为0.02 μg·L-1，线性范围为0.02 ～24.78 μg·L-1，在添加浓度为2 μg·kg-1、10 μg·kg-1、30 μg·kg-1时，方法回收率为84.0%～105.6%。

2 气相色谱法及气相色谱-质谱联用法

气相色谱法是一种以气体作为流动相（氮气、氦气和氩气等），固体或液体作为固定相的分离技术，该方法通过将样品气化使得样品随流动相进入色谱柱与固定相相互作用实现化合物分离，具有分析速度快、选择性高等优点，但气相色谱法不适用于气化困难和热不稳定性的样品。目前，气相色谱方法检测氯丙嗪的研究基质大部分为血液、血清和尿液等[9-15]，鲜有利用气相色谱法检测动物源食品中的氯丙嗪。气相色谱-质谱联用法是一种气相色谱和质谱相结合的一种技术，具有气相色谱的高分离度和质谱的高灵敏度。现有部分研究采用气相色谱-质谱联用技术对动物源食品中的氯丙嗪进行分离分析。路平等[16]建立了猪肝中氯丙嗪检测的气相色谱-质谱联用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS），该方法以乙酸乙酯为提取试剂，正己烷和C18固相萃取小柱净化，方法检出限为1 μg·kg-1，回收率为68.00%～92.10%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD） 为5.92% ～9.35%。 单美娜等[17]同样用乙酸乙酯提取，采用正己烷和阳离子固相萃取柱净化，建立了GC-MS 法测定猪肉中的氯丙嗪，该方法检出限为2.0 μg·kg-1，回收率为87.1%～97.3%。ZHANG 等[18]建立了同时测定猪肉中氯丙嗪和地西泮的GC-MS 法，该方法氯丙嗪的检出限为2.0 μg·kg-1，回收率＞66.5%，RSD ＜9.5%。周颖等[19]采用乙腈提取，QuEChERS 法净化，建立了16 种镇静剂的GC-MS/MS 检测方法，该方法氯丙嗪的检出限为0.01 μg·kg-1，猪肉和牛肉中定量限为0.10 μg·kg-1，羊肉中定量限为0.20 μg·kg-1，回收率为74.23%～104.91%，批内RSD 为3.19%～8.21%，批间RSD 为8.62%～12.54%。

3 液相色谱法

液相色谱法是一种以液体作为流动相，固体或液体作为固定相的分离技术，该方法通过待分析组分与固定相和流动相间相互作用实现化合物分离，其适用范围广，不受分析对象的挥发性和热稳定性的限制，可以对约80%化合物进行分析，由于其高选择性和高适用性，液相色谱被广泛应用于食品、药品和环境等领域。目前，检测动物源食品中氯丙嗪的液相色谱法已有很多，现有研究主要是以C18柱进行分离，利用紫外检测器进行检测，检测波长大多在240～257 nm[20-22]。在前处理方面，液相色谱法中氯丙嗪的检测一般是有机试剂提取，经浓缩或净化后过膜上机，现有研究中提取试剂主要有乙腈、酸化乙腈和氨水乙腈等[21-23]。刘淳[22]以乙腈为提取试剂，超声辅助提取，以乙腈-乙酸铵水溶液为流动相建立了猪肉中氯丙嗪检测的液相色谱法，该方法氯丙嗪的检出限为7.5 μg·kg-1，回收率在87.7%～101.0%。李堃等[24]建立了检测猪肉中氯丙嗪的高效液相色谱法，样品经乙腈-水提取，以20 mmol·L-1乙酸铵-甲醇为流动相进行分析，该方法中，氯丙嗪的回收率在95.4%～103.0%。华永有等[20]以氢氧化钠甲醇溶液为提取试剂，采用0.1%磷酸-甲醇为流动相，利用高效液相色谱测定畜禽肉中的氯丙嗪，该方法在0.2 ～10.0 μg·mL-1具有良好的线性关系，氯丙嗪的检出限为4 μg·kg-1，回收率为81.7%～94.1%。

上述液相色谱法均为单农药残留检测，而现有研究中包括氯丙嗪在内的多农药残留液相色谱检测方法也有很多。李品艾等[25]建立了液相色谱法同时测定猪肝中氯丙嗪和5 种磺胺类药物的检测方法，该方法用乙腈提取样品，采用碱性氧化铝柱进行净化，以50%甲醇乙腈溶液和0.1%乙酸水为流动相进行检测，氯丙嗪的检出限为20 μg·kg-1，定量限为50 μg·kg-1，平均回收率为76.4%。魏晋梅等[21]建立了同时测定羊肉中包括氯丙嗪在内的11 种镇静剂的液相色谱方法，比较了乙腈、甲醇、乙酸乙酯、0.1%氨水-乙腈和甲醇-乙酸乙酯（V/V，1 ∶1）这5 种提取试剂，发现甲醇、乙酸乙酯和甲醇-乙酸乙酯作为提取液时易出现样液浑浊、黏稠和析出絮状物的现象，用乙腈提取则会避免这种情况，而相比于纯乙腈，以1%氨水-乙腈溶液作为提取剂时，氯丙嗪等具有特殊结构的药物回收率更高，该方法在0.02 ～200.00 μg·mL-1具有良好的线性关系，氯丙嗪的回收率为70.7%～83.8%。

4 液相色谱-质谱联用法

液相色谱-质谱联用法是将液相色谱和质谱通过适当接口相结合的一种分析技术，兼具液相色谱的高分离性和质谱的高灵敏度，有分析范围广、灵敏度高、稳定性好等优点，目前已被广泛应用于食品领域，特别是农药残留和兽药残留检测。李景娜[26]用1%氨水乙酸乙酯提取样品、正己烷净化，建立了动物源食品中氯丙嗪的液相色谱-质谱联用法（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，LC-MS/MS），该 检 测 方 法 的 检 出 限 为0.5 μg·kg-1，定 量 限 为1.5 μg·kg-1，回收率范围在72.2%～101.0%，RSD 小于10%。周青等[27]建立了猪肝中氯丙嗪检测的LC-MS/MS方法，该研究分别以甲醇、乙腈、乙酸乙酯和50%乙腈水提取猪肝中的氯丙嗪，结果发现以甲醇和乙酸乙酯为提取试剂时更易提取出蛋白质和脂肪等干扰物，以50%乙腈水为提取试剂时提取液易浑浊，而乙腈作为提取试剂时由于其具有蛋白沉淀作用，提取液中干扰物少，提取效果最好，该方法采用QuEChERS 净化法净化，在0.5 ～100.0 ng·mL-1浓度水平下呈现良好的线性关系，回收率可超过80%，氯丙嗪的检出限为0.5 μg·kg-1，定量限为1.0 μg·kg-1，RSD 为0.8%～1.9%。RODZIEWICZ 等[28]建立了动物肾脏和尿液中氯丙嗪检测的LC-MS/MS 方法，该方法以乙腈为提取试剂，回收率在84 ～102%。

近年来，多残留检测发展迅速，现有很多研究建立了包括氯丙嗪在内的多残留液质联用检测方法。王可等[29]以乙腈为提取试剂，选择N-丙基乙二胺和无水MgSO4作为吸附剂对样品进行净化，基质匹配标准溶液定量，利用LC-MS/MS 建立了禽蛋中的异丙嗪和氯丙嗪的检测方法。张燕等[30]建立了同时测定畜禽肉和牛奶中氯丙嗪和地塞米松的LC-MS/MS 法，该方法以乙腈为提取剂，采用C18作为固相分散剂进行净化，氯丙嗪的检出限为0.1 μg·kg-1，定量限为0.3 μg·kg-1，回 收 率 在70.1% ～119.4%，RSD 为1.6% ～9.4%。华萌萌等[31]以90%乙腈水（含0.1 mol·L-1盐酸）作为提取试剂，混合型阳离子固相萃取柱（PCX）净化，利用LC/MS-MS 对鸡肉中包括氯丙嗪在内的8 种镇静剂类药物进行检测，该方法氯丙嗪的检出限为0.5 μg·kg-1，定量限为1.0 μg·kg-1，平均回收率为85.3%～95.5%，RSD 为0.81%～5.00%。冯静等[32]建立了牛肉中16 种镇静剂类药物的LC-MS/MS 法，该方法先对样品进行碱水解，再经盐酸溶液提取，强阳离子固相萃取柱（MCX）净化，采用基质工作曲线定量补偿基质效应，该方法氯丙嗪的检出限为0.03 μg·kg-1，加标回收率为89.7%～114.0%。胡海山等[33]建立了动物源食品中5 种镇静剂的LC-MS/MS检测方法，该研究以乙腈为提取剂，采用HLB 净化后上机，该方法氯丙嗪的检出限为0.11 μg·kg-1，加标回收率为94.5%～96.8%，RSD 为4.01%～4.58%。王旭峰等[34]建立了检测水产品中10 种镇静剂及其代谢物的LC/MS-MS 方法，该方法以1%氨水-乙酸乙酯提取，一步通过式小柱KNORTH m-PFC SPE 净化，氯丙嗪的检出限为0.1 μg·kg-1，定量限为0.3 μg·kg-1，加标回收率为82.6%～117.0%，RSD 为1.5%～9.3%。杨洪生等[35]采用一步通过式小柱PRIME HLB 进行净化，利用同位素稀释和基质标准曲线两种方式抑制基质效应的干扰，建立了检测水产品中13 种镇静剂的LC/MS-MS 方法，该方法中氯丙嗪的加标回收率为84.6%～114.7%。

综上所述，在提取试剂方面，现有研究中液相色谱-质谱联用法所采用大多是有机试剂，如乙腈和乙酸乙酯等[26-27,29-30,33,36-37]。在净化方面，现有研究采用的净化方式主要有阳离子固相萃取柱（MCX 和PCX 等）、亲水亲脂平衡型固相萃取柱（HLB 等）、QuEChERS 和一步通过式固相萃取柱（PRIME HLB和KNORTH m-PFC SPE）等方式[30-34,37-39]。相较于液相色谱法，LC-MS/MS 法能达到更高的灵敏度，但是法仪器价格昂贵，成本高。

5 结语

氯丙嗪作为一种镇静剂类药物可用于人类精神疾病的治疗，也可在畜禽养殖中作治疗用，但是常有不法商家滥用氯丙嗪，导致其在动物体内产生累积进而影响人们的身体健康。因此，构建一种高效的检测方法以加强食品中氯丙嗪的监管十分重要。本文对动物源食品中氯丙嗪的检测技术进行综述，分别从酶联免疫法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等方面进行综述，可以看出目前氯丙嗪的检测技术发展很快，且不断向前处理简单、灵敏度高和多残留同时检测的方向发展。未来高效、高灵敏度和高通量将会是动物源食品检测的发展方向。