CD28、CD117、CXCL12在多发性骨髓瘤患者髓外浸润及其预后中的应用价值

蔡永梅

河南省济源市人民医院检验科,河南济源 459000

多发性骨髓瘤是一种发生于B细胞分化终末阶段浆细胞异常增生的恶性肿瘤,随着恶性增生的浆细胞的分化,可导致骨质受损并引起免疫功能异常[1-2]。有报道显示,多发性骨髓瘤随病情进展可发生髓外浸润,促使组织、器官发生病变,诱发溶骨性损伤、高钙血症、肾损伤等严重病症,对患者预后恢复造成严重影响[3-4]。因此,积极探讨多发性骨髓瘤早期评估诊断方案具有重大意义。CD28为骨髓瘤细胞及细胞外基质相互作用的信号分子,其表达与浆细胞增殖、扩散密切相关,而CD117为一种酪氨酸激酶受体,多表达于髓系干祖细胞,在正常浆细胞中无表达[5-6]。趋化因子配体12(CXCL12)为基质细胞衍生因子,可通过与特异性配体CX-CR4相互作用,调控造血干细胞迁移、归巢等,与肿瘤复发、转移均存在紧密联系[7]。但目前临床鲜有通过上述因子早期评估多发性骨髓瘤的相关研究,基于此,本研究拟分析CD28、CD117、CXCL12在多发性骨髓瘤患者髓外浸润及其预后危险分层中的应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究经本院医学伦理委员会审核批准(批号：202002013)。选取2020年5月至2022年5月于本院就诊的96例多发性骨髓瘤患者作为研究对象。患者及其家属均知晓本研究,并签订知情同意书。纳入标准：符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2015年修订)》[8]中多发性骨髓瘤的相关诊断标准;经影像学检查、病理活检等证实发生髓外浸润者;初次入院确诊治疗;可接受本研究检查方案。排除标准：合并其他血液系统疾病、恶性肿瘤者;合并肝、肾等重大脏器功能障碍者;合并凝血功能障碍、弥散性血管内凝血无法配合骨髓活检者;合并全身性感染疾病、循环系统疾病者;合并精神异常或检查依从性较差者。

1.2方法

1.2.1标本采集与检测 入院后患者均于空腹状态下采集5 mL静脉血加入抗凝管中,采用等量磷酸盐缓冲液(PBS)稀释,加入3～5 mL淋巴细胞分离液,室温下采用深圳瑞沃德生物科技公司M1416R型离心机(离心半径为10 cm)以3 000 r/min的速度离心处理吸出白膜层,加入10倍体积PBS洗涤2次,调整细胞浓度为1×106个/mL,平均分为两管,一管进行检测,一管作为对照,分别加入CD28、CD117抗体及对照抗体各20 μL,避光孵育30 min,加入3 000 μL溶血素,室温静置10 min后进行离心处理,经PBS洗涤3次后采用BD FACSCanto型流式细胞仪及CellQuest软件分析数据,以抗原表达>20%为阳性。另采集患者5 mL骨髓于抗凝管中,加入等量Ficoll液,经离心处理后取中间白色雾层,经PBS稀释后在室温下离心处理,弃去上清液,收集细胞沉淀,采用免疫组织化学法测定CXCL12表达,随机选取5个视野观察着色细胞数,若染色强度及阳性细胞百分比计分≥2分为阳性。

1.2.2资料收集 根据是否发生髓外浸润将患者分为发生组和未发生组,采用医院自制调查问卷收集两组患者的临床资料,包括年龄、性别、骨髓活检情况(成熟浆细胞、原幼浆细胞)、有无溶骨性损伤、血红蛋白水平、确诊至入院接受化疗时间、血清钙水平、多发性骨髓瘤亚型、免疫球蛋白类型[免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白D(IgD)]及CD28、CD117、CXCL12表达情况。

1.2.3调查质量保障 调查前对医护人员进行严格培训,经调查质量核查及数据质量核查制订相应调查问卷,采用相同调查问卷收集临床资料,以保障调查问卷准确性,录入数据时再次确认数据准确性,核实后由专业人员进行录入。

2 结 果

2.1两组临床资料比较 临床检查结果显示,96例多发性骨髓瘤患者中发生髓外浸润38例(发生组),未发生58例(未发生组)。两组年龄、性别、骨髓活检情况、血清钙水平、确诊至接受化疗时间,以及有无溶骨性损伤、多发性骨髓瘤亚型和免疫球蛋白类型患者比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。发生组CD28、CD117、CXCL12阳性患者比例高于未发生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组临床资料比较[n(%)或

2.2CD28、CD117、CXCL12表达与多发性骨髓瘤患者髓外浸润的多因素Logistic回归分析 以多发性骨髓瘤患者发生髓外浸润为因变量(赋值：未发生髓外浸润=0,发生髓外浸润=1),以CD28表达、CD117表达和CXCL12表达为自变量进行多因素Logistic回归分析。结果显示,CD28、CD117、CXCL12表达阳性均为多发性骨髓瘤患者髓外浸润的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 CD28、CD117、CXCL12表达与多发性骨髓瘤患者髓外浸润的多因素Logistic回归分析

2.3不同预后患者CD28、CD117、CXCL12阳性表达率比较 随访6个月后,96例多发性骨髓瘤患者中死亡21例(死亡组),生存75例(生存组)。与生存患者相比,死亡患者入院时CD28、CD117、CXCL12阳性表达率较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同预后患者CD28、CD117、CXCL12阳性表达率比较[n(%)]

2.4CD28、CD117、CXCL12对多发性骨髓瘤患者的预后评估价值 多发性骨髓瘤CD28、CD117、CXCL12阳性患者的死亡风险分别为阴性患者的7.091、29.231、20.143倍(P<0.05)。见表4。

表4 CD28、CD117、CXCL12对多发性骨髓瘤患者的预后评估价值[n(%)]

3 讨 论

多发性骨髓瘤为一种由单克隆浆细胞异常增生导致的恶性肿瘤,临床特征主要表现为骨髓内异常分泌单克隆免疫球蛋白、正常免疫球蛋白受抑制,且多发性骨髓瘤治疗较为困难,随病情进展可出现髓外浸润,对预后恢复造成严重影响[3,9-10]。因此,尽早发现多发性骨髓瘤髓外浸润症状、及时调整治疗方案,对于延长患者生存期、改善预后具有重大意义。

有报道显示,多发性骨髓瘤细胞表面抗原表达高度不均一,正常浆细胞与瘤细胞抗原表达存在显著差异[11]。本研究结果显示,发生组CD28、CD117、CXCL12阳性患者比例高于未发生组,差异均有统计学意义(P<0.05),提示临床可通过CD28、CD117、CXCL12表达情况初步评估是否发生多发性骨髓瘤髓外浸润。CD28是一种糖蛋白受体,为T淋巴细胞活化的重要抗原及协同刺激分子受体,其正常浆细胞不表达,恶性浆细胞中呈高表达[12]。葛芳芳等[13]研究发现,多发性骨髓瘤细胞CD28高表达与高增殖活性及疾病进展密切相关,临床分期较高的多发性骨髓瘤患者骨髓液中CD28呈高表达。王腾等[14]研究表明,多发性骨髓瘤患者中约51%骨髓浆细胞CD28表达阳性,约92%髓外复发、转移患者骨髓浆细胞CD28表达阳性,进一步说明CD28与多发性骨髓瘤髓外浸润的关系。CD117为一种跨膜酪氨酸蛋白激酶受体,干细胞因子受体-配体结合后可导致酪氨酸磷酸化,其异常表达可改变传导通路,参与肿瘤形成、进展过程[15]。有研究发现,骨髓瘤细胞出现CD117高表达,可提示瘤细胞具有较高增殖活性,与肿瘤负荷、高增殖活性密切相关,且与骨髓瘤临床分期、转移均具有显著相关性[16],本研究与其结果基本一致。CXCL12对于骨髓基质细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞等均具有趋化作用,且上述细胞均可表达CXCR4,CXCL12/CXCR4生物轴在调节肿瘤发生、发展、浸润、复发中均发挥重要作用,多发性骨髓瘤细胞通过表达CXCR4,与CXCL12相互作用,趋化骨髓瘤细胞侵袭、迁移[17-18]。相关研究表明,CXCL12/CXCR4生物轴可促进血管内皮生长因子分泌,诱导肿瘤新生血管生长,而肿瘤的发生、发展、浸润等均与新生血管相关[19-20],因此,CXCL12/CXCR4生物轴与多发性骨髓瘤髓外浸润密切相关。此外,本研究进一步行多因素Logistic回归分析发现,CD28、CD117、CXCL12表达阳性为多发性骨髓瘤髓外浸润的独立危险因素(P<0.05),提示临床可通过其表达情况早期评估诊断多发性骨髓瘤髓外浸润。

多发性骨髓瘤由于治疗难度较大,且多数患者就诊时已处于中晚期,故及时预测患者预后至关重要,本研究随访6个月后发现,死亡患者入院时CD28、CD117、CXCL12阳性表达率明显高于生存患者(P<0.05),进一步分析发现,多发性骨髓瘤CD28、CD117、CXCL12阳性患者死亡风险分别为阴性的7.091、29.231、20.143倍(P<0.05),提示临床可通过其早期预测患者预后,以给予相应干预措施。

综上所述,CD28、CD117、CXCL12表达与多发性骨髓瘤患者髓外浸润密切相关,临床可通过其表达情况预测预后,针对性制订治疗方案,降低病死率。