艾叶复方精油乳对脂溢性脱发相关致病菌抑制作用研究

★ 洪石希 杨思 杨辉 张浩朗 张芹 钟澜 王俊军 熊耀坤（江西中医药大学药学院 南昌 330004）

脂溢性脱发又称雄激素源性脱发，临床表现为头皮油脂增多、头皮屑大量形成、前额和头顶头发逐渐脱落，在男性中的发病率高达23.0%，占脱发总人数的84.8%［1-2］。其病机主要由雄激素及其受体异常引起，也与微生物感染、遗传和心理等因素有关［3-6］；由糠秕马拉色菌属、痤疮丙酸杆菌属、金黄色葡萄球菌等属引起的炎症已成为脂溢性脱发发生的第三大因素［7-8］。中药精油是一种天然绿色的植物芳香性物质，具有广谱抑菌、抗炎、抗病毒等作用［9-11］，其用于预防和治疗由细菌引起相关疾病的作用正在被逐步研究。此外，薄荷精油和薰衣草精油还被发现具有促生发作用［12］。本实验选用具有广谱抑菌的艾叶精油、肉桂精油、生姜精油和薄荷精油制成艾叶复方精油乳，研究其对脂溢性脱发相关致病菌的抑制作用，为中药精油治疗脂溢性脱发提供更多解决方法及科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

艾叶油、生姜油（上海麦克林生化科技有限公司）；肉桂油、薄荷精油（广州唐穗科技有限公司）；吐温-80（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；MH肉汤培养基、MH 琼脂培养基、琼脂粉（青岛海博生物技术有限公司）；液体硫乙醇酸盐（FT）培养基（广东环凯微生物科技有限公司）；青霉素药敏纸片（温州康泰药物原料有限公司）；金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌、痤疮丙酸杆菌（北京北纳创联生物技术研究院）。

FA2004N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司），DSX-280B 手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安器械厂）；立式电热恒温培养箱（上海丙林电子科技有限公司）；超净工作台（苏州佳宝净化工程设备有限公司）；Medium-E400UF 实验室纯水系统（上海和泰仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 艾叶复方精油乳的制备 称取艾叶油40.0 mg、薄荷油60.0 mg、肉桂油80.0 mg、生姜油60.0 mg、吐温-80 185.0 mg 研磨混匀，加入18.1 mL 蒸馏水超声混合均匀，即得浓度为13.0 mg/mL 的艾叶复方精油乳，备用。

1.2.2 菌种的活化 无菌移液枪吸取0.5 mL MH肉汤培养基，滴入金黄色葡萄球菌冻干粉安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于MH 琼脂培养基中，37 ℃恒温培养24 h。连续培养至第三代，挑取2～3 个菌落转入MH 肉汤液体培养基中培养，使用平板计数法确定细菌浓度，保存备用。

无菌移液枪吸取0.5 mL MH 肉汤培养基，滴入糠秕马拉色菌冻干粉安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于MH 琼脂培养基中，30 ℃恒温培养48 h。连续培养至第三代，挑取2～3 个菌落转入MH 肉汤液体培养基中培养，使用平板计数法确定细菌浓度，保存备用。

无菌移液枪吸取 1 mL FT 培养基，滴入痤疮丙酸杆菌冻干粉安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于10 mL 已灭菌FT 培养基中，摇匀，使用封口膜封口，置于厌氧袋中37 ℃恒温厌氧培养72 h。连续培养至第三代，使用平板计数法确定细菌浓度，保存备用。

1.2.3 抑菌圈的测定——牛津杯法 使用PBS 溶液稀释供试菌溶液，制成 1×106CFU/mL 的细菌悬液，取各种细菌悬液100 μL 于培养皿平板上，涂布均匀。用镊子夹取2 个牛津杯放入培养皿中，轻轻按压，使牛津杯和培养基表面接触紧实。吸取100 μL 艾叶复方精油乳加入牛津杯中，另一牛津杯中加入100 μL 1%吐温-80 作为阴性对照，并以药敏试纸作为阳性对照，每组平行实验3 次。金黄色葡萄球菌组37 ℃ 恒温培养18 h 后观察；糠秕马拉色菌组30 ℃恒温培养48 h 后观察，痤疮丙酸杆菌组37 ℃恒温无氧条件下培养72 h 观察；用游标卡尺测量抑菌圈直径，取平均值［13］。

1.2.4 最小抑菌浓度——肉汤稀释法 在96 孔板中使用营养肉汤梯度稀释艾叶复方精油乳，使浓度为6.50、3.25、1.62、0.812、0.406、0.203、0.101、0.0508、0.0254、0.0126 mg/mL。在孔板第11 孔和12 孔加入营养肉汤培养基。于1～10 孔和12 孔加入10 μL 的供试菌菌液，第11 孔作为阴性对照，第12 孔为阳性对照。将各组在合适的条件下培养，培养结束后观察结果，药物最大稀释管中菌株不生长（溶液不浑浊）者为艾叶复方精油乳的最小抑菌浓度。

1.2.5 统计学方法 使用SPSS 22.0 统计软件进行统计分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 艾叶复方精油乳的抑菌圈直径

艾叶复方精油乳对金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌、痤疮丙酸杆菌的抑菌圈结果见表1、图1。

图1 艾叶复方精油乳对脂溢性脱发相关病菌的抑菌圈结果

表1 不同药物对脂溢性脱发相关病菌的抑菌圈直径比较mm

以美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布的《抗微生物药物敏感性试验执行标准》判断细菌对药物的敏感性，抑菌圈试验的判定标准为：抑菌圈直径＞20 mm 为最敏感，10～20 mm 为中度敏感，5～10 mm 为低度敏感，抑菌圈直径≤5 mm者为不敏感［14］。由实验结果可知，金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌和痤疮丙酸杆菌对艾叶复方精油乳有中度敏感性，说明有抑制作用。

2.2 艾叶复方精油乳的抑菌MIC 值

采用肉汤稀释法，进行艾叶复方精油乳的最小抑菌浓度实验，确定艾叶复方精油乳对金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌、痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度，结果见表2、图2。

图2 艾叶复方精油乳对脂溢性脱发相关细菌的最小抑菌实验结果

表2 不同浓度艾叶复方精油乳对细菌的抑制效果比较

由表2 可知，艾叶复方精油乳对不同细菌的最小抑菌浓度不同。当艾叶复方精油乳浓度为0.050 mg/mL 时，金黄色葡萄球菌与糠秕马拉色菌出现菌落，使肉汤浑浊，所以艾叶复方精油乳对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度是0.101 mg/mL。当艾叶复方精油乳的浓度稀释到0.101 mg/mL 时，痤疮丙酸杆菌开始生长，所以艾叶复方精油乳对痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度为0.203 mg/mL。

3 讨论

微生物感染可引起头皮皮炎并加重脂溢性脱发，主要致病菌包括金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌和痤疮丙酸杆菌等，这些细菌数量的失调增多还会引发毛囊炎及痤疮等。目前治疗药物主要是酮康唑乳膏，已有研究表明中药精油对多种细菌有抑制作用，这为扩大临床用药提供了更多选择，而中药精油对脂溢性脱发相关病菌的研究却寥寥无几。艾叶精油、肉桂精油、生姜精油、薄荷精油等已被发现对多种致病菌有抑制作用。

本研究选用艾叶精油、肉桂精油、薄荷精油、生姜精油制成艾叶复方精油乳，测定艾叶复方精油乳对金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌和痤疮丙酸杆菌的抑制效果及MIC 值。研究结果表明金黄色葡萄球菌、糠秕马拉色菌和痤疮丙酸杆菌对艾叶复方精油乳表现为中敏感度，抑菌圈直径分别为13.0、16.3、11.0 mm，最小抑菌浓度分别为0.101、0.101、0.203 mg/mL。结果表明艾叶复方精油乳对3 种脂溢性脱发相关细菌都有抑制作用，通过抑制脂溢性脱发致病菌的生长与繁殖，减少炎症发生，治疗脂溢性脱发。目前课题组正进行动物防脱育发实验，初步结果表明其对毛发生长长度的促进率为15%，以上研究为艾叶复方精油乳防脱育发的新药和特殊化妆品的开发提供了实验依据和研究基础。