宫颈癌组织p53及TPX2表达水平与放疗敏感性的相关性分析

2024-05-11黄相艳李秀芳孟泳圳

河南医学研究 2024年8期

黄相艳,李秀芳,孟泳圳

(安阳市肿瘤医院/河南科技大学第四附属医院妇科,河南安阳 455000)

宫颈癌是生殖系统常见恶性肿瘤,多见于40～49岁年龄段女性,严重影响女性身心健康[1]。近年来,在性行为观念的转变、多产、持续人乳头瘤病毒感染等因素的影响下,宫颈癌患病率不断增长并逐渐呈现出年轻化趋势[2]。因此,宫颈癌的防治不容忽视。现阶段,对于宫颈癌的治疗方法多种多样,其中放疗适应范围广是宫颈癌的主要治疗手段。但在临床实际工作中发现,不同患者对放疗的敏感性不同,其治疗效果也不同[3]。肿瘤蛋白53(tumor protein 53,p53)是目前发现的与各种肿瘤疾病高度相关的抑癌基因之一,包括野生型和突变型两种,前者具有细胞周期检查功能,可使受损细胞阻滞于G1期,引导细胞凋亡;而后者可丧失该功能,发挥促癌作用[4]。Xklp2靶蛋白(Xklp2 target protein,TPX2)是受细胞周期调控的核增殖蛋白,在维持纺锤体稳定性、促进细胞有丝分裂纺锤体形成中发挥重要作用[5]。本研究旨在探讨宫颈癌组织p53及TPX2的表达水平及其与放疗敏感性的相关性,以期为临床提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1月至2023年1月在安阳市肿瘤医院妇科就诊的135例宫颈癌患者,年龄28～72(55.26±5.00)岁。(1)纳入标准:①宫颈病理活检证实为鳞状细胞癌;②国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetr,FIGO)分期为Ⅱ～Ⅲ期;③临床资料完整;④初治病例,入组前未接受过放射治疗及手术治疗;⑤签署知情同意书。(2)排除标准:①心、肺、肝、肾严重障碍,无法耐受放射治疗;②全身状况较差或有恶病质;③合并其他部位肿瘤;④合并免疫性疾病;⑤近期使用化疗、免疫抑制剂等药物治疗;⑥治疗前后影像学、病理学资料及随访资料不齐全。本研究经安阳市肿瘤医院医学伦理委员会审批。

1.2 治疗方法

所有患者均接受适形强调外照射治疗和高剂量率腔内后装放疗。参考文献[6]勾画外照射靶区,X线模拟定位,使用直线加速器6/10 MV X射线照射全盆腔,剂量每次1.8 Gy,1周5次。后装腔内照射,每次6 Gy,1周1次,在体外放疗20次后开始进行,共4～6次,生物学总剂量32～48 Gy。

1.3 资料收集

放疗前、后通过宫颈取肿瘤组织标本,取材过程注意容器及器械的无菌处理,取材大小约为0.5 cm×0.5 cm;所有标本采集后立即投入液氮内,放入超低温冰箱储存备用。免疫组织化学检测方法:取适量宫颈癌组织,石蜡包埋,制成4 μm厚的切片各2张,1张行苏木精-伊红染色,由病理科医师对样本进行复核诊断,诊断相符者纳入研究,另1张经脱蜡、水化等处理后采用免疫组化SP法检测p53、TPX2的表达情况,SP免疫组化检测试剂盒由上海科顺生物科技有限公司提供,兔抗人p53抗体由上海万疆生物技术有限公司提供,兔抗人TPX2试剂盒由北京博奥森生物技术有限公司提供,以细胞核出现棕黄色显色为p53、TPX2表达阳性。采用半定量计数法[7],按照着色强度计分(不着色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,黄褐色3分)和阳性细胞占总细胞百分比计分(≤10%为0分,11%～25%为1分,26%～50%为2分,>50%为3分)的计分标准判定宫颈癌组织中p53、TPX2的表达水平,着色强度计分×阳性细胞占总细胞百分比计分为最后得分,0～3分为阴性表达,4～9分为阳性表达。PT-PCR检测方法:取适量宫颈癌组织,采用Trizol法提取RNA,取1 μg 采用反转录试剂盒进行逆转录合成cDNA作为RT-PCR样本,进行实时荧光定量PCR,引物序列如下。p53正向:5’- TGCTCACCCTGGCTAAAGTT -3’,反向5’- ACTCCTCCATGGCAGTCATC -3’。TPX2正向:5’-AACAATCCATTCCGTCAA-3’,反向5’-TGCAGGTGGCATACAAGG-3’。GAPDH正向5’-ACCTGACCTGCCGTCTAGAA-3’,反向5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’。采用凝胶成像分析系统扫描判定PCR反应结果,以p53、TPX2的OD值/同一标本GADPH的OD值计算p53、TPX2的相对表达量。放疗敏感性评价:放疗结束后随访4～6周,根据RECIST标准[8]评价疗效,完全缓解肿瘤完全消失;部分缓解肿瘤最长径与其最大垂直径之乘积或多个肿瘤面积之和缩小>50%;疾病稳定肿瘤面积缩小<50%或增大≤25%;疾病进展肿瘤增加>25%或有新病灶出现。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 放疗效果

所有患者均顺利完成放疗且随访资料完整,其中完全缓解 64例,部分缓解40例,疾病稳定25例,疾病进展6例,放疗敏感率为77.04%(104/135)。将完全缓解、部分缓解归为放疗敏感组,将疾病稳定及疾病进展归为放疗抵抗组。

2.2 不同放疗疗效患者宫颈癌组织中p53及TPX2的表达

与放疗抵抗组相比,放疗敏感组宫颈癌组织中p53、TPX2的相对表达量及阳性率均较低(P<0.05)。见表1。

表1 放疗敏感组与放疗抵抗组宫颈癌组织中p53及TPX2的表达比较

2.3 不同疗效患者临床特征

与放疗抵抗组相比,放疗敏感组组织分化为低-中分化、无淋巴结转移、肿瘤直径<4 cm者占比更高(P<0.05);两组年龄、FIGO分期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 临床特征与宫颈癌放疗敏感性的关系[n(%)]

2.4 宫颈癌临床特征及宫颈癌组织中p53及TPX2的表达与放疗敏感性的关系

以放疗敏感性为因变量(敏感=0,抵抗=1),对表1、表2中P<0.05的因素赋值(p53表达阴性=0,阳性=1;TPX2表达阴性=0,阳性=1;组织分化低-中分化=0,高分化=1;淋巴结转移无=0,是=1、肿瘤直径<4 cm=0,≥4 cm=1),进行多因素logistic回归分析,结果显示,宫颈癌组织中p53、TPX2表达及组织分化程度与放疗敏感性密切相关(P<0.05)。见表3。

表3 宫颈癌放疗敏感性的多因素logistic回归分析

2.5 宫颈癌组织中p53、TPX2表达的相关性分析

将患者宫颈癌组织中p53、TPX2的相对表达量进行Pearson相关性分析,结果显示,p53与TPX2的相对表达量呈正相关(r=0.229,P=0.008)。

3 讨论

据统计,2020年我国新增60.4万例新发宫颈癌病例和34.2万例死亡病例,给家庭造成严重经济负担的同时也加重了社会的医疗负担[9]。宫颈癌具体发病机制尚未十分明确。放疗在改善患者临床症状尤其是缓解肿瘤转移方面发挥着重要作用。宫颈癌的放疗效果取决于放疗的敏感性,敏感性越高,治疗效率越高。绝大多数宫颈癌患者在初次就诊时已存在明显的侵袭和转移,部分患者可能对放疗不敏感,出现局部未控和转移而导致治疗失败[10]。因此,寻找与宫颈癌放疗敏感性有关的因子、提升放疗效果是临床需解决的问题。

目前认为,放疗抵抗是肿瘤干细胞、DNA损伤修复、上皮间质转化、乏氧效应、肿瘤微环境等因素共同作用的结果[11-12]。p53在膜凋亡信号、线粒体凋亡通路以及细胞核内多种凋亡相关因子的转录与表达中扮演着重要角色[13]。在正常细胞中,p53半衰期短,含量低,一旦发生突变,其蛋白产物构型改变、半衰期延长,可在恶性细胞中高水平堆积,研究已证实,突变型p53具有致癌潜力,其过表达往往提示预后不良[14]。有研究通过检测癌旁正常宫颈组织和宫颈癌组织中p53的表达,发现p53蛋白的阳性率为60.00%,高于癌旁正常宫颈组织,提示p53可能参与宫颈癌的发生、发展[15]。TPX2作为维持有丝分裂过程和纺锤体组装的关键因素获得临床的广泛关注。TPX2具有多种活性,其过表达可扰乱微管组织,致使基因组失稳、细胞中心体异常扩增和恶性转化,从而促进肿瘤生长、转移[16]。王文芳等[17]研究发现,TPX2在宫颈癌组织和细胞中表达均较癌旁组织升高。本研究中,所有患者均顺利完成放疗,放疗敏感率为77.04%,较朱瑞霞等[18]报道的56.00%更高,这可能与样本量、样本选择存在差异有关。本研究结果显示,与放疗抵抗组相比,放疗敏感组宫颈癌组织中p53、TPX2的相对表达量及阳性率更低。提示宫颈癌组织中p53、TPX2的阳性表达可能与宫颈癌患者放疗敏感度有关。考虑其原因可能是,放疗时射线将细胞DNA双链断裂(double strand breaks,DSB),诱导细胞凋亡,细胞的DNA修复能力直接影响放疗效果[19]。p53突变后,其促细胞凋亡功能随之削弱,DSB修复蛋白功能、活性、蛋白自身等异常化,细胞凋亡减少,从而对放疗产生抗拒[20]。此外,TPX2同样可在放疗射线导致的DSB反应中发挥作用,其过表达可导致γ-H2AX水平降低,通过DNA损伤检测点1和共济失调毛细血管扩张突变激酶等介质调停DNA损伤的修复,使放疗敏感性降低[21]。本研究结果显示,放疗敏感组、放疗抵抗组的组织分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径存在差异,进一步分析发现,宫颈癌组织中p53、TPX2表达及组织分化程度与放疗敏感性密切相关,宫颈癌组织中p53、TPX2阴性表达者及组织低-中分化者放疗敏感性较高,与王美玲[7]、施璠等[22]的研究结果基本吻合。提示宫颈癌组织中p53、TPX2过表达可能会产生放疗抵抗,进而影响疗效,二者可作为宫颈癌治疗得新标志物,为宫颈癌的疗效评估提供理论依据。此外,本研究Pearson相关性分析结果显示,宫颈癌组织中p53与TPX2的相对表达量呈正相关,提示二者可能在影响放疗敏感性中发挥着协同作用,但其具体的作用机制还有待进一步探讨。