miR-200c联合MORC2检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值

洪佳,黄金玲,杨琼琼,汪晶,李晶

卵巢癌的发病机制与环境因素及遗传因素有关,其中基因表达异常为主要致病病因,研究发现多种基因表达异常与卵巢癌病情及预后密切相关,在卵巢癌病情及预后评估中敏感度及特异度高于传统的病理分期[1-2]。miR-200c可通过多个信号传导通路调控肿瘤细胞迁移、侵袭及上皮间质转化,在卵巢癌等多种恶性肿瘤中表达上调[3-4]。MORC家族CW型锌指蛋白2(MORC family CW-type zinc finger 2,MORC2)为新近发现的促癌基因,具有调控细胞增殖、自噬及染色质重塑等功能,为乳腺癌等多种恶性肿瘤预后不良的标志物[5-6]。目前miR-200c和MORC2在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值尚无相关研究。本研究旨在探讨miR-200c联合MORC2检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值,报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2017年1月—2019年12月武汉大学人民医院妇产科诊治的卵巢癌患者103例为卵巢癌组,另以同期卵巢良性疾病患者60例(包括卵巢囊肿、卵巢炎等)作为对照组。2组研究对象在年龄、卡氏评分、体表面积、糖尿病史、高血压史及HPV感染方面比较差异均无统计学意义(P>0.05), 见表1。本研究经医院医学伦理委员会审核批准(WHU-1045),患者或家属知情同意并签署知情同意书。

表1 对照组及卵巢癌组患者临床资料比较

1.2 卵巢癌组病例选择标准 (1)纳入标准:①经病理组织学检查确诊;②初次诊治,既往无卵巢癌病史,未行相关治疗(包括不限于手术、化疗等);③均经增强CT、MR或超声检查明确国际妇产科协会(FIGO)分期,临床病理资料明确;④患者能配合本研究,随访未脱落。(2)排除标准:①合并其他良恶性肿瘤、卵巢转移瘤等;② 合并精神神经疾病。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 miR-200c及MORC2表达检测:卵巢癌组取肿瘤组织及癌旁组织(距离肿瘤组织>3 cm),对照组患者取卵巢活检组织。液氮下碾磨组织标本,使用上海碧云天公司TRIzol试剂盒(编号R0016)提取总RNA。采用实时荧光定量PCR法检测miR-200c及MORC2表达,检测试剂盒为BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix(购自上海碧云天公司,编号D7260),检测仪器为美国ABI公司7900HT Fast实时荧光定量PCR系统。引物序列:miR-200c上游5’-GGATAATACTGCCGGGT-3’,下游5’-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3’;MORC2上游5’-GGAGGTTCCTTCTCCCAAAGTC-3’,下游5’-CAGAAACTGCGACACTCCGCTT-3’;U6上游5’-GCTTCGGCA GCACATATACTAAAAT-3’,下游5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’;GAPDH上游5’-TGATGGGTGTGAACCACGAG-3’,下游5’-CCCTTCCACGATGCCAAAGT-3’。PCR扩增体系25 μl;反应条件为:94℃预变性5 min、95℃下15 s、60℃退火40 s、61℃延伸扩增40 s,共计38个循环,最后一轮72℃反应8 min。miR-200c选择U6为内参,MORC2选择GAPDH为内参,分别计算miR-200c、MORC2相对表达量。

1.3.2 随访:卵巢癌组患者每3个月随访1次,随访时间至2023年10月,随访内容包括影像学检查、肿瘤标志物(CA153)等,统计患者预后状况(生存、死亡),其中随访2年时出现死亡、肿瘤复发进展、严重并发症(完全性肠梗阻、恶病质、直肠阴道瘘)等定义为预后不良。

2 结 果

2.1 2组miR-200c和MORC2表达比较 卵巢癌组患者肿瘤组织miR-200c、MORC2表达高于癌旁组织和对照组(P<0.01),卵巢癌组癌旁组织与对照组miR-200c、MORC2表达的差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

表2 对照组和卵巢癌组病变组织miR-200c和MORC2表达比较

2.2 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表达在不同临床病理中差异比较 卵巢癌组患者肿瘤组织miR-200c、MORC2表达在肿瘤低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移及FIGO分期 Ⅲ～Ⅳ期患者高于中-高分化、无恶性腹水、肿瘤最大径<5 cm、无淋巴结转移、无远处转移及FIGO Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.01),见表3。

表3 卵巢癌患者不同临床病理因素中肿瘤组织miR-200c、MORC2表达比较

2.3 miR-200c、MORC2预测卵巢癌患者2年预后不良效能 绘制miR-200c、MORC2预测卵巢癌患者2年预后不良效能的ROC曲线,并计算曲线下面积(AUC),结果显示:miR-200c、MORC2及二者联合预测卵巢癌患者2年预后不良的AUC分别为0.786、0.792、0.901,二者联合优于miR-200c、MORC2单独预测效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001),见表4。

表4 miR-200c、MORC2预测卵巢癌患者2年预后不良效能分析

2.4 卵巢癌患者死亡危险因素Logistic回归分析 以卵巢癌患者死亡为因变量(赋值:是为“1”;否为“0”),以上述结果中P<0.05项目为自变量进行多因素Logistic回归分析,结果显示:miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期是卵巢癌患者死亡的独立危险因素(P<0.01),见表5。

表5 卵巢癌患者死亡危险的多因素Logistic回归分析

2.5 miR-200c、MORC2表达与卵巢癌生存期的关系 卵巢癌组miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65的患者中位生存期(27.4±5.8)月低于miR-200c<0.78或MORC2<0.65的中位生存期(34.8±6.5)月(Log-Rankχ2=16.371,P<0.05),见图1。

图1 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表达与生存期的关系

3 讨 论

卵巢癌的发病机制与各种诱因导致基因表达异常有关,其中miRNA在卵巢癌发生、发展及转归中扮演重要角色,具体机制包括调控细胞周期、凋亡、迁移、侵袭及肿瘤免疫微环境等[7]。研究发现miRNA贯穿卵巢癌的整个病程,与病情严重程度及生存期相关,可作为卵巢癌病情及预后评估的标志物,检测miRNA变化可为卵巢癌临床诊疗提供客观证据[8-9]。miR-200c具有调控肿瘤细胞迁移侵袭、微血管生成及上皮间质转化等功能,与恶性肿瘤发病机制及预后相关,miR-200c表达升高为预后不良的危险因素[10-11]。Kang等[12]研究发现肿瘤组织miR-200c-3p为结直肠癌预后评估的标志物,miR-200c-3p表达与总生存期呈负相关。Guo等[13]研究发现miR-200c 通过下调 PTEN 表达促进乳头状甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。Ankasha等[14]发现miR-200c-3p通过靶向DLC1的3'-非翻译区而发挥在高级别浆液性卵巢癌进展中的促进作用。本研究中卵巢癌患者miR-200c表达显著高于癌旁组织和对照组,进一步研究发现miR-200c表达与肿瘤分化程度、恶性腹水、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移及FIGO分期相关,且miR-200c≥0.78为卵巢癌患者死亡的独立危险因素,提示miR-200c与卵巢癌发病机制、病情及预后相关。

研究发现MORC2在染色质重塑、DNA损伤修复、表观遗传调控和转录调控中扮演关键角色,在多种恶性肿瘤中可检测到MORC2表达异常,为恶性肿瘤潜在的治疗靶点[15-16]。Saroha等[17]研究发现MORC2通过β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖及迁移。Guddeti等[18]发现MORC2和MAX有助于糖酵解酶的表达、乳腺癌细胞的增殖和迁移。Liao等[19]研究发现MORC2高表达的三阴性乳腺癌患者对新辅助化疗敏感度下降,为预后不良的标志物。结合国内外新近研究进展,推测MORC2在卵巢癌中具有促癌作用,为其预后不良的影响因素。本研究中卵巢癌患者MORC2表达显著高于癌旁组织和对照组,进一步研究发现MORC2表达与肿瘤分化程度、恶性腹水、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移及FIGO分期相关,且MORC2≥0.65为卵巢癌患者死亡的独立危险因素,提示MORC2表达与卵巢癌病情及预后相关。

目前卵巢癌病情及预后评估指标包括肿瘤标志物及病理组织分期,但存在敏感度及特异度低、普适性差及可重复性低等缺点,研究卵巢癌新型标志物在改善卵巢癌疗效及预后中至关重要[20-21]。随着检测技术的提高及卵巢癌分子机制的阐明,基因水平的检测在卵巢癌中的临床价值更高,但单个基因水平的检测指标因缺乏组织特异性而导致其敏感度及特异性低,临床上可通过多项指标联合检测以显著提高敏感度及特异度[22-23]。本研究中,miR-200c联合MORC2预测卵巢癌2年预后不良敏感度、特异度及AUC均高于单独预测,表明二者联合检测可显著提高预测卵巢癌预后不良的效能,在卵巢癌临床诊疗中应密切监测miR-200c及MORC2以提高诊疗水平。

综上所述,卵巢癌患者miR-200c及MORC2表达显著升高,在卵巢癌病情及预后评估中具有重要临床价值,两者联合检测时可显著提高预测卵巢癌预后不良的敏感度及特异度。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

洪佳:设计研究方案,实施研究过程,论文撰写;黄金玲:进行统计学分析;杨琼琼、汪晶:实施研究过程,资料搜集整理,论文修改;李晶:提出研究思路,分析试验数据,论文审核