入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平与CHB肝纤维化严重程度的相关性及对疾病预后的预测价值

2024-04-17张艳敏李登州陈秋芳王海颖

河南医学研究 2024年6期

张艳敏,李登州,陈秋芳,王海颖

(河南省中医院检验科,河南郑州 450000)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)为由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)持续复制所致的肝脏慢性疾病[1],HBV持续存在可诱导肝细胞外基质大量沉积,促进肺泡上皮细胞向间充质细胞侵袭,进而诱发肝纤维化,最终进展为肝硬化、肝癌,威胁患者生命安全[2]。肝纤维化是CHB患者进展到肝硬化的必经阶段,因此,在肝纤维化早期进行有效干预可改善患者预后[3]。病理检查是诊断肝纤维化的金标准,是一种有创检查,且存在取样误差等[4]。透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(type Ⅲ procollagen,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen,CⅣ)等是肝纤维化血清学常用标志物,在CHB肝纤维化早期,血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平表达异常升高,且与患者肝纤维化分期相关密切,可能参与肝纤维化进展[5]。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad同源蛋白2(Smad homologous protein 2,Smad2)、Smad同源蛋白3(Smad homologous protein 3,Smad3)是TGF-β1/Smads信号通路主要参与指标,TGF-β1、Smad2、Smad3参与肝星状细胞活化、细胞外基质降解等过程,其血清水平高低与细胞肝纤维化的严重程度相关[6]。虽然临床上关于血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平在CHB肝纤维化患者中的表达研究较多,但入院时上述血清指标联合检测对CHB肝纤维化患者预后的预测价值相关研究尚少。本研究探讨院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平与CHB肝纤维化严重程度的相关性及联合检测对CHB肝纤维化预后的预测价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集河南省中医院2021年3月至2022年3月收治的78例CHB肝纤维化患者纳入研究组。纳入标准:符合CHB肝纤维化诊断标准[7],乙肝病毒e抗原阳性≥6个月;肝穿刺活检证实肝纤维化。排除标准:合并甲型、丙型、丁型、戊型、酒精性、药源性及自身免疫性等肝病;伴发恶性肿瘤;入组前1个月接受抗病毒、护肝、免疫抑制药物等治疗;存在药物过敏史或对本研究药物过敏;认知和智力障碍;传染性疾病;妊娠期或哺乳期女性;有饮酒习惯;血液性疾病;严重心、肾等功能障碍。选择同期78名健康体检者作为对照组。两组一般资料均衡可比(P>0.05),见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平检测方法

收集入院时研究组(入组24 h内)、对照组(体检当日)空腹肘静脉血5 mL,以3500 r·min-1速率离心10 min(离心半径8 cm)后分离并保存上层血清,测定血清TGF-β1、Smad2、Smad3水平,采用化学免疫发光法检测血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平。

1.2.2肝纤维化分期和炎症活动分级[8]

肝纤维化分期:S1为汇管区纤维化变大,局限窦周和小叶内发生纤维化;S2为汇管周围发生纤维化,形成纤维间隔,但保留小叶;S3为已完全形成纤维间隔,小叶结构发生紊乱,但尚无肝硬化;S4为已发生早期肝硬化。

炎症活动分级:G1为汇管区有炎症,小叶发生变性,且有少量的、灶状的坏死性病灶;G2为汇管区轻度碎屑状坏死,小叶内存在点、灶状坏死或嗜酸性小体;G3为汇管区存在中度的碎屑性坏死,小叶内有融合性或桥接性坏死;G4为汇管区有重度的碎屑性坏死,小叶内有范围广泛的桥接性坏死,且有多个小叶坏死。

1.2.3CHB肝纤维化患者治疗

口服恩替卡韦(苏州东瑞制药有限公司,国药准字H20153021),每次0.5 mg,每日1次;口服甘草酸二铵肠溶胶囊(正大天晴药业集团股份有限公司,国药准字H20040628),每次150 mg,每日3次。连续治疗3个月。

1.2.4CHB肝纤维化患者预后情况判断标准

按照《肝纤维化中西医结合诊疗指南》[9]评估疗效,显效为肝纤维化指标基本/完全恢复正常或降低≥50%,肝功能基本恢复正常,临床症状改善明显;好转为肝纤维化、肝功能指标降低在25%～49%,临床症状有所好转;无效为肝纤维化、肝功能指标降低<25%或无改善,临床症状无进展或恶化。显效、好转视为预后良好,无效视为预后不良。

1.3 观察指标

(1)患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平。(2)CHB肝纤维化患者不同肝纤维化分期、炎症活动分级患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平。(3)入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平与CHB肝纤维化患者肝纤维化分期、炎症活动分级的相关性。(4)不同预后患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平。(5) 入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测对CHB肝纤维化患者预后不良的预测价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平

研究组入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平高于对照组(P<0.05),见表2。

表2 两组入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平比较

2.2 不同肝纤维化分期、不同炎症活动分级CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平

不同肝纤维化分期、不同炎症活动分级CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平比较:S1

表3 不同肝纤维化分期患者指标比较

表4 不同炎症活动分级患者指标比较

2.3 入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平与CHB肝纤维化患者肝纤维化分期、炎症活动分级的相关性

Spearson相关性分析显示,入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平与肝纤维化分期、炎症活动分级均呈正相关(P<0.05),见表5。

表5 入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ 水平与CHB肝纤维化患者肝纤维化分期、炎症活动分级的相关性分析

2.4 不同预后CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平

治疗3个月后,78例CHB肝纤维化患者中预后不良17例,预后良好61例,预后良好患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ均低于预后良好患者,差异有统计学意义(P<0.05),见表6。

表6 不同预后CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平比较

2.5 入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测对CHB肝纤维化患者预后不良的预测价值

以61例预后良好肝纤维化患者为阴性样本,17例预后不良患者作为阳性样本,绘制患者ROC曲线,入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3水平联合检测作为模型1,入院时血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测作为模型2,血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测作为模型3,结果显示,模型3、模型2、模型1预测肝纤维化患者预后不良曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.943(95% CI:0.866～0.983)、0.889(95% CI:0.785～0.958)、0.880(95% CI:0.787～0.943),高于单一指标检测,模型3联合检测预测肝纤维化患者预后不良的AUC>模型2、模型1 (P<0.05)。

3 讨论

HBV持续感染可引起多种肝脏疾病,如肝硬化、肝细胞癌,目前虽有疫苗和其他治措施,但HBV感染仍是全球面临的一个公共卫生问题[10]。CHB肝纤维化进展机制较为复杂,是肝硬化进展的主要途径,既往研究显示,肝细胞外基质合成与降解平衡之间失衡是肝纤维化主要病理基础,二者之间失衡,可引起肝脏淋巴细胞生长,发生炎症浸润,同时促进肝细胞坏死、变性,长期作用下可出现为纤维隔、再生结节,从而诱发肝纤维化[11-12]。

肝纤维化早期缺乏特异性临床表现,肝活检属于有创检查,随着无创检测技术发展,发现血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ等指标与肝纤维化进展密切相关,可用于评估患者病情程度、预后疗效[13]。研究发现,肝纤维化患者血清内HA、LN、PCⅢ、CⅣ表达异常升高,且与患者炎症程度呈正相关[14-15]。本研究结果显示,研究组入院时血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平明显高于对照组,且与肝纤维化分期、炎症活动分级均呈正相关,表明血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平在CHB肝纤维化患者中呈现高表达,还可反映CHB肝纤维化患者病情严重程度,与上述研究结果相近。可能是因为,HA是一种高分子聚合区,主要由N-乙酰葡糖胺、D-葡萄糖醛酸组成,是细胞外基质的主要成分,可通过稳定胶原网生理结构,调节细胞基质上运动能力,有助于保护、润滑细胞[16];但肝细胞出现损伤时,可引起HA含量升高,经血液循环进入肝脏,最终沉积在血窦内皮细胞[17]。LN、CⅣ是基底膜重要组成部分,前者由内皮细胞、贮脂细胞合成,与细胞表面网状结构形成有关;后者主要由血管、淋巴管和胆管细胞合成,正常肝组织中LN、CⅣ含量较少,肝细胞一旦损伤,LN、CⅣ可协同促进肝基底膜形成纤维隔[18]。PCⅢ是Ⅲ型胶原的前体,可反映胶原合成情况[19]。可见血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ等肝纤维化标志物可能参与CHB肝纤维化患者病情进展,可能是由于CHB肝纤维化患者肝功能降解能力降低,导致HA、LN、PCⅢ、CⅣ异常升高,沉积肝细胞内,增加肝窦毛细血管通透性,使得肝组织窦腔变窄、发生炎症浸润,加重疾病进展。

TGF-β1/Smads信号通路是控制肝纤维化的重要信号转导途径之一,TGF-β1是不仅能调控细胞生长分化、凋亡和黏附等生物活性因子,且还可参与细胞免疫炎症调节[20]。近年研究显示,TGF-β1在肝脏内含量最高,与细胞外基质沉积、炎症反应和组织修复有关,一般情况下TGF-β1在肝脏组织中表达较少或几乎不表达,肝星状细胞异常活化后可促进TGF-β1表达,进而诱导肝细胞凋亡,促进细胞外基质合成,增加胶原沉积[21]。Smads是TGF-β1下游细胞因子,通过细胞膜受体结合介导细胞核内Ⅰ型受体激酶底物表达,即Smad2、Smad3等因子,进而与连接蛋白特异性结合,可正向调节信号转导途径,达到抗纤维化作用[22]。本研究结果显示,研究组入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3水平高于对照组,且与肝纤维化分期、炎症活动分级呈正相关,可见血清TGF-β1、Smad2、Smad3与CHB肝纤维化进展密切有关。笔者推测原因为:血清TGF-β1、Smad2、Smad3水平升高可激活肝细胞异常增生,促进细胞发生炎症浸润,促进细胞外基质合成能力,诱导肝脏炎症损伤,不利于组织修复,进而加重疾病进展。

本研究进一探讨入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测对CHB肝纤维化患者预后不良的预测价值,结果显示,预后良好患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平均低于预后良好患者,入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ联合检测预测CHB肝纤维化患者预后不良的AUC高于单独指标检测,也高于血清TGF-β1、Smad2、Smad3联合检测及HA、LN、PCⅢ、CⅣ联合检测,可见TGF-β1/Smads信号通路TGF-β1、Smad2、Smad3指标及肝纤维化标志物HA、LN、PCⅢ、CⅣ联合检测对CHB肝纤维化患者的预后有较高的预测价值。