常见自身免疫性疾病患者血清25-羟维生素D水平的差异分析

张 彪,曾丽娥,卢鑫鑫,黄肖利,陈少婷,梅端容,江 华

1.福建医科大学省立临床医学院/福建省立医院检验科,福建福州 350001;2.厦门大学附属中山医院检验科,福建厦门 361001

自身免疫性疾病(AID)是人体免疫系统在某些情况下无法识别外来物质和自身细胞之间的差异,将自身细胞视为靶抗原产生自身抗体,导致机体出现异常免疫应答反应,引起机体细胞破坏或组织损伤,并出现临床症状的一系列疾病[1-2]。AID的发病机制尚未被完全阐明,一般认为其是基因、环境等多种因素作用的结果,治疗困难,费用昂贵,临床上常用免疫抑制剂、激素等来缓解症状。现有研究表明,25-羟维生素D[25(OH)D]水平与AID的发生和发展具有相关性[3],口服维生素D已成为预防和治疗该病的一种手段[4-5],为临床提供了新的治疗方向和思路。目前,血清25(OH)D的检测方法主要有免疫法和色谱法,其中,液相色谱-串联质谱法可同时测定25-羟维生素D2[25(OH)D2]、25-羟维生素D3[25(OH)D3)],具有非常高的检测特异性及抗干扰能力,结果真实可信,因此,在国际上被公认为是检测25(OH)D水平的“金标准”方法。本研究通过液相色谱-串联质谱法分析了常见AID中血清25(OH)D水平差异,以及25(OH)D与其他实验室指标的相关性,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2022年9月至2023年4月于福建省立医院风湿免疫科就诊的AID患者229例作为试验组,其中系统性红斑狼疮(SLE)58例、类风湿关节炎(RA)45例、干燥综合征(SS)37例、强直性脊柱炎(AS)60例、皮肌炎(DM)14例和系统性硬化症(SSc)15例。收集患者年龄、性别、临床资料及实验室检查结果,如红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、类风湿因子(RF)等。纳入标准:临床诊断为AID;有其他实验室检验结果支持;测定前3个月未服用维生素D。排除标准:同一患者重复测定结果。另选取同期体检健康人群29例作为对照组。本研究经医院伦理审查委员会批准,入选患者均知情同意。

1.2方法 入组受试者空腹采血后,4 h内分离血清,冷冻(-20 ℃或以下)条件下保存待测。取100 μL血清至96孔提取板中,依次加入100 μL提取液A、150 μL内标工作液,涡旋1 min。将上述液体全部转移至96孔过滤板中(配96孔收集板),加入1.5 mL提取液C,洗脱液体收集于96孔收集板中,收集板置于室温下,氮气吹干。将60 μL衍生液加入吹干后的残渣中,盖上96孔硅胶垫,50 ℃下反应30 min。稍冷却后加入40 μL终止液,振荡1 min,氮气吹干。每孔加入100 μL复溶液,振荡混匀2 min,将全部液体转移至96孔进样板中,覆上铝箔封膜,检测备用。校准品、质控品制备与样品一致。样品首先进入液相系统(Nexera LC-20 XR,日本岛津公司),经色谱柱分离、纯化和浓缩,导入质谱系统(API 3200TM,美国ABSciex公司)。以校准品的靶值水平为横坐标,以校准品与内标峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线并拟合线性方程,计算出样品中25(OH)D2和25(OH)D3水平,25(OH)D2、25(OH)D3的水平之和即为总25(OH)D的水平。检测试剂盒购自山东英盛生物技术有限公司,严格按照试剂盒说明书及操作规范完成检测操作。

1.3判断标准 根据美国内分泌协会发布的指南[6]:25(OH)D<20 ng/mL为维生素D缺乏;20≤25(OH)D<30 ng/mL为不足;30≤25(OH)D≤100 ng/mL为充足;25(OH)D>100 ng/mL为过量。

2 结 果

2.1血清总25(OH)D水平总体分布 试验组血清总25(OH)D水平表现为缺乏81例(35.37%),不足110例(48.03%),充足38例(16.60%);对照组表现为缺乏2例(6.90%),不足15例(51.72%),充足12例(41.38%)。各疾病亚组的血清总25(OH)D水平表现为缺乏或不足的比例总体上高于对照组。见表1。

表1 血清总25(OH)D水平的总体分布[%(n/n)]

2.2对照组与试验组以及各疾病亚组25(OH)D2、25(OH)D3、总25(OH)D水平比较 试验组的25(OH)D3和总25(OH)D水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001),两组血清25(OH)D2水平比较,差异无统计学意义(P=0.062)。试验组各疾病亚组25(OH)D3、总25(OH)D水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),SLE组25(OH)D3和总25(OH)D水平最低,与SS组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2、3。

表2 对照组与试验组25(OH)D2、25(OH)D3、总 25(OH)D水平比较[M(P25,P75)或

表3 各疾病亚组25(OH)D2、25(OH)D3、总25(OH)D水平比较[M(P25,P75)或

2.3不同性别患者25(OH)D2、25(OH)D3、总25(OH)D水平比较 女性AID患者血清25(OH)D3和总25(OH)D水平低于男性,差异均有统计学意义(P=0.017,P=0.027),女性和男性AID患者的25(OH)D2水平比较,差异无统计学意义(P=0.743)。见表4。

表4 不同性别患者25(OH)D2、25(OH)D3、总 25(OH)D水平比较[M(P25,P75)或

2.4各疾病亚组血清总25(OH)D水平与血液指标的相关性 Pearson相关分析结果显示,SLE组血清总25(OH)D水平与ESR、BUN和CREA呈负相关(r=-0.293,P=0.027;r=-0.337,P=0.010;r=-0.332,P=0.011),与CRP无相关性(P>0.05);RA组总25(OH)D水平与RF呈负相关(r=-0.450,P=0.009),与ESR、CRP、CREA和BUN无相关性(P>0.05);DM组总25(OH)D水平与ESR呈负相关(r=-0.609,P=0.021),与CREA呈正相关(r=0.547,P=0.043),与CRP、BUN无相关性(P>0.05);SS组、AS组和SSc组总25(OH)D水平与ESR、CRP、CREA和BUN均无相关性(P>0.05)。部分结果见图1。

注:A为SLE组总25(OH)D与ESR的相关性;B为SLE组总25(OH)D与BUN的相关性;C为SLE组总25(OH)D与CREA的相关性;D为RA组总25(OH)D与RF的相关性;E为DM组总25(OH)D与ESR的相关性;F为DM组总25(OH)D与CREA的相关性。

3 讨 论

AID被认为是遗传和环境因素共同作用的结果,易反复、难治疗,给患者带来沉重的负担,且通常累及机体其他器官和组织,其对器官的损伤是患者预后不良和早期死亡的关键因素。因此,及时对AID进行干预和治疗可减轻其对全身其他器官和组织的损伤。而维生素D除经典的钙磷调节作用外,1,25-二羟维生素D还可作用于单核巨噬细胞、树突状细胞等发挥免疫调节作用[4,7]。因此,机体免疫细胞可在维生素D的影响下,调节免疫反应,从而缓解病情。

本项研究结果显示,AID患者大多存在维生素D缺乏或不足的情况,试验组25(OH)D3及总25(OH)D水平均低于对照组,与以往研究结果一致[8-9],提示AID的发生、发展与机体维生素D水平具有一定的相关性,维生素D水平会影响机体的免疫调节机制,证实了AID患者普遍存在维生素D缺乏或不足。本研究结果还显示,SLE组与SS组的25(OH)D3和总25(OH)D水平存在差异,但目前关于这两种AID的发病机制尚未完全明确,因此,还无法解释二者水平存在差异的原因。但临床上在使用维生素D时,仍应根据明确诊断来决定剂量,从而实现有效治疗。此外,AID患者血清25(OH)D3和总25(OH)D水平在性别之间具有差异性。性激素参与机体的免疫调节机制,介导包括AID在内的免疫反应,因此,AID的发病率存在性别差异[10]。而维生素D水平在AID中表现出的性别差异也与性激素有关。雌二醇降低1,25-二羟维生素D3分解酶的表达,从而影响体内维生素D水平[11],该研究结果支持本研究的发现。因此,对患者使用维生素D治疗时需注意性别差异及个性化诊疗。

CREA和BUN是反映肾小球滤过率的实验室指标,常用于肾功能检查。本研究发现,SLE组、DM组的血清总25(OH)D水平与CREA具有相关性。SLE组中,血清总25(OH)D水平与CREA、BUN具有负相关关系,表明当AID患者出现肾功能损伤时,通常伴有维生素D缺乏或不足,而维生素D水平也在一定程度上反映了肾脏的功能。肾脏是SLE患者最常累及的器官,肾损伤达到一定程度时被称为狼疮性肾炎,该病是继发于SLE的肾小球肾炎。狼疮性肾炎发病主要是因为免疫复合物沉积,攻击足细胞,在这一过程中,足细胞可发挥免疫作用[12]。维生素D通过调节自噬活性,抑制免疫复合物沉积对足细胞修复的干扰,从而对足细胞起到保护作用[13]。1项Meta分析显示,约有50%的SLE患者会在确诊10年内出现不同程度的器官损伤,且早期器官损伤与病死率上升有关[14],及早对疾病进行干预,可减少对其他器官的损伤,改善预后,从而降低病死率。而优化治疗策略,减少药物毒性对机体带来的伤害也至关重要。在DM组,血清总25(OH)D水平与CREA呈正相关关系,与预期结果相反,可能是该亚组纳入病例数较少,偶然因素导致误差较大;且目前关于DM损伤肾脏的文献报道较少,难以证实DM对肾脏具有绝对性的损伤。本研究发现AID患者维生素D水平与肾功能具有相关性,为临床早发现、早预防器官损伤提供新的思路。

ESR是红细胞在一定条件下沉降的速度,病理状态下ESR可加快,常见于炎症性疾病,可反映病情是否处于活动期。本研究结果显示,只有SLE组和DM组的血清总25(OH)D水平与ESR具有相关性,这与以往的报道[15]结果一致,ESR升高提示疾病处于活动期时,当维生素D水平降低,也可在一定程度上反映疾病的活动程度。RF是将变性免疫球蛋白G作为抗原而产生的自身抗体,与RA具有较强的相关性[16-17],因而本研究对于RA组还进行了总25(OH)D水平与RF的相关性分析。结果提示RA患者血清总25(OH)D水平与RF具有负相关性,表明RF阳性的RA患者其维生素D水平通常表现为缺乏或不足。骨质疏松是RA患者常见的并发症之一,而维生素D缺乏会增加骨质疏松的风险,因此,维生素D水平有助于反映疾病发展情况及治疗效果[18]。AS组和SSc组血清总25(OH)D水平与上述指标均不具有相关性。虽然本研究中无相关性,但不能完全否定它们之间可能存在的某种联系。由于本研究个别亚组纳入的病例数较少,因此,相关试验结果有待扩大样本量继续研究。

综上所述,维生素D缺乏或不足在AID患者中普遍存在,不同性别、病种间具有差异性,且与其他实验室指标具有相关性,因此临床上或可将维生素D水平作为评估AID疾病严重程度和预后的指标之一。同时,在使用维生素D治疗时,需注意个体差异,可利用其他相关指标及时调整疗程,观察疗效。