miRNA-122在冠心病合并非酒精性脂肪性肝病患者血清中的表达以及临床意义*

努尔麦麦提·叶尔逊 地力夏提·阿不都热合曼 梁灿灿△

1.省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆医科大学第二附属医院消化内科 (新疆 乌鲁木齐, 8300002) 2.省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,新疆医科大学第一附属医院血管甲状腺外科

冠心病是指脂类物质和炎症细胞沉积在冠状动脉血管壁导致冠状动脉狭窄≥50%的一类疾病,是临床上最常见的心血管疾病,可引起心肌缺血缺氧,甚至心肌梗死[1-3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指无过量饮酒史,但有其他明确的损肝因素所致,以弥漫性肝实质细胞脂肪变性和脂肪蓄积为主要临床特征的病理综合征[4-6]。目前二者已成为危害我国人民身体健康的常见病、多发病。相关文献证实,血脂代谢紊乱、全身低度炎症反应以及内脏脂肪堆积是冠心病和NAFLD共同的危险因素,并且NAFLD是冠心病的易患因素,可明显增加冠心病患者不良心血管事件的发生率[7-9]。miRNA-122是最早发现的具有组织特异性的一种miRNA,其编码基因位于第18号染色体, 在肝组织高丰度特异性表达[10]。相关研究显示,miRNA-122在NAFLD、非酒精性脂肪性肝炎、病毒性肝炎、肝癌等疾病的发生发展中发挥关键作用[11,12]。本研究通过检测冠心病合并NAFLD患者血清中miRNA-122表达水平,探讨其在此类患者血清中的表达以及临床意义,有助于帮助临床医师早期识别冠心病合并NAFLD的高危患者,采取及时有效治疗措施,降低冠心病患者不良心血管事件发生率,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年1月至2022年12月在我院就诊的200例冠心病患者作为研究对象。纳入标准:基线资料完整;冠心病诊断符合2019版冠心病诊断与治疗指南中的诊断标准[13];NAFLD的诊断标准参考2018版《非酒精性脂肪性肝病防治指南》中的诊断标准[14]。排除标准:过量饮酒史;合并其他慢性病毒性肝炎、自身免疫性肝病、药物性肝炎、遗传性肝病、肝硬化、肝癌等;合并除冠心病外其他心脏疾病如风湿性心脏病、主动脉夹层、心肌炎、肥厚梗阻性心肌病、扩张性心肌病、肺心病、感染性心内膜炎、心力衰竭等;肺部感染、肺栓塞、慢性阻塞性肺疾病;妊娠期及哺乳期妇女。本研究经我院伦理委员会批准,所有患者以及家属均知情同意(伦理审批号:202012-06)。

1.2 临床资料收集 收集患者入院后一般临床资料,包括年龄、性别、体重指数(BMI)、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病、 冠心病类型、 SYNTAX评分、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、C反应蛋白(CRP)、空腹血糖、空腹胰岛素以及肝脏硬度, 计算患者胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰岛素(IU/L)/22.5。

1.3 血清miRNA-122检测 所有患者入院均抽取空腹静脉血5 ml,标本离心后取上清液,-70℃保存备用。采用实时荧光定量PCR法检测患者血清miRNA-122的表达情况。提取血清中的总RNA,反应体系为:模板2 μl,特异引物2 μl,缓冲液10 μl和无RNA酶的灭菌水4 μl。扩增条件:预变性95℃ 10 min;95℃ 10 s,60℃ 20 s,72℃ 15 s,45～70个循环。扩增结束后进入熔解曲线分析。反应体系及反应条件严格按说明书进行。miRNA水平用阈值循环(Ct值)表达,采用2-△△Ct法评估 miR-122 的相对表达量,以2-△Ct代表每组细胞的表达量,并以此为基础进行统计分析[11]。

2 结果

2.1 两组患者一般临床资料比较 见表1。

表1 两组患者一般临床资料比较

2.2 影响冠心病患者合并NAFLD的多因素Logistic回归分析 以冠心病患者是否合并NAFLD(是=1,否=0)作为因变量,以单因素分析中有统计学意义的指标:SYNTAX评分(实际值)、TG(实际值)、TC(实际值)、LDL(实际值)、CRP(实际值)、空腹血糖(实际值)、HOMA-IR(实际值)以及miRNA-122(实际值)作为自变量,多因素Logistic回归分析结果显示,SYNTAX评分、HOMA-IR以及miRNA-122为影响冠心病患者合并NAFLD的独立预测因素(P<0.05),其中miRNA-122每减少1个单位,冠心病患者合并NAFLD的风险增加1.532倍(OR:0.395, 95%CI: 0.178～0.789, P=0.001 ),见表2。

表2 影响冠心病患者合并NAFLD的多因素Logistic回归分析

2.3 预测冠心病患者合并NAFLD的列线图模型的构建 基于多因素分析获得的3个独立预测因素:SYNTAX评分、HOMA-IR以及miRNA-122,构建预测冠心病患者合并NAFLD的列线图模型:P=1/(1+e-x)。P 代表冠心病患者合并NAFLD的概率,数值越接近1,冠心病患者合并NAFLD的概率越大,e为自然常数,X可通过下列公式计算得出:X=0.778×SYNTAX评分+0.732×HOMA-IR-0.867×miRNA-122-0.914,例如1位冠心病患者有如下特征:SYNTAX评分为40分,HOMA-IR为4.1,miRNA-122为1.9,则3个特征性变量的得分分别为49分、40分、75分,则该患者的列线图总评分为164分,该冠心病患者合并NAFLD的概率为75.4%,见图1。

图1 预测冠心病患者合并NAFLD的列线图模型

2.4 列线图模型的内部验证 列线图模型的校准曲线显示,冠心病患者合并NAFLD概率的预测值与实际观测值符合度良好(P>0.05),ROC分析结果显示,SYNTAX评分、HOMA-IR以及miRNA-122预测冠心病患者合并NAFLD的曲线下面积(AUC)分别为0.775(95%CI: 0.721～0.856)、0.752(95%CI: 0.711～0.813)以及0.822(95%CI: 0.784～0.873),3者联合预测的AUC最大为0.918(95%CI: 0.878～0.959),见图2、3。

图2 列线图模型的校准曲线

图3 预测冠心病患者合并NAFLD的ROC曲线

2.5 冠心病合并NAFLD患者miRNA-122与临床指标的相关性 按冠心病合并NAFLD患者miRNA-122的中位数将100例冠心病合并NAFLD患者划分为高miRNA-122组62例(62.0%)和低miRNA-122组38例(38.0%),低miRNA-122组患者TG、TC、LDL、肝脏硬度、SYNTAX评分、CRP以及HOMA-IR明显高于高miRNA-122组(P<0.05),见表3。

表3 冠心病合并NAFLD患者miRNA-122与临床指标的相关性

3 讨论

NAFLD病变初期多属于单纯脂肪性肝病,随着糖脂代谢紊乱以及胰岛素抵抗水平的加重,肝脏氧化通路中氧化应激反应产物增加,导致线粒体功能紊乱,促进肝细胞炎症坏死、凋亡与肝纤维化[8,9];另一方面,NAFLD患者长期的糖脂代谢紊乱以及胰岛素抵抗还可导致冠状动脉血管脂质沉积,斑块内大量炎症细胞浸润,炎症细胞分泌和释放的炎症因子引发的炎症反应损伤血管内皮细胞功能,进一步促进大量炎性因子表达和释放,一氧化氮释放减少,血小板与白细胞数量增加,形成高凝状态,从而导致冠状动脉粥样硬化斑块形成[15]。相关研究证实,NAFLD可促进冠心病的发生、发展,与正常人群相比,NAFLD患者冠心病的发生率明显增加[16]。还有研究证实[17],NAFLD与冠心病患者冠状动脉病变的严重程度明显相关,相较于单纯冠心病患者,冠心病合并NAFLD患者的冠状动脉多支病变、重度狭窄、完全闭塞比例以及SYNTAX评分明显升高。而本研究结果显示,SYNTAX评分、HOMA-IR为影响冠心病患者合并NAFLD的独立预测因素,与之前的研究结果基本一致[17,18]。

miRNA-122作为近年来新发现的转录后调控基因,特异表达于肝脏组织中,并且与病毒性肝炎、NAFLD、肝纤维化、肝硬化、肝癌等肝脏相关疾病的发生、发展密切相关[19,20]。相关研究证实,miRNA-122作为机体重要的糖脂代谢的调控因子,通过直接或间接地调节胆固醇、甘油三酯和脂肪酸的合成与输出,在肝脏脂质代谢调控中发挥重要作用[21-23]。Refeat等[24]的小鼠动物模型实验发现,相较于对照组小鼠,miRNA-122转基因小鼠血清TG、TC以及LDL表达水平明显降低,而HDL表达水平明显升高,而对照组小鼠有向NAFLD和脂肪性肝炎发展的趋势,由此得出结论:miRNA-122能够降低胆固醇相关基因的表达,进而使胆固醇合成减少,并且抑制胆汁酸和脂肪酸氧化,在肝脏脂质代谢调控中发挥关键作用。Friedrich等[25]的研究在miRNA-122缺失的小鼠肝脏发现大量炎症浸润细胞,这种炎症浸润细胞具有单核细胞和粒细胞的形态,可以产生大量的炎症因子如白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、IL-1β以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),促进肝细胞炎症坏死、凋亡和肝纤维化。Liu等[26]的研究发现,相较于健康人群,NAFLD患者血清miRNA-122表达水平降低,并且肝细胞对TC和TG的调节能力也随之降低,由于长期过多的脂类物质在肝细胞中堆积,此类患者发展为脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌的风险也明显增加。而本研究结果显示,miRNA-122为影响冠心病患者合并NAFLD的独立预测因素,其中miRNA-122每减少1个单位,冠心病患者合并NAFLD的风险增加1.532倍,提示冠心病患者血清miRNA-122表达水平越低,其并发NAFLD的风险越高。本研究证实了血清miRNA-122可以作为识别冠心病患者合并NAFLD的敏感性和特异性指标。

此外,本研究结果还发现,在冠心病合并NAFLD患者中,低miRNA-122组患者TG、TC、LDL、肝脏硬度、SYNTAX评分、CRP以及HOMA-IR明显高于高miRNA-122组,提示冠心病合并NAFLD患者血清miRNA-122表达水平较低者,其血脂水平、炎症因子以及胰岛素抵抗水平较高,冠状动脉病变程度和肝纤维化程度较重,考虑其可能原因为:miRNA-122表达水平较低者,体内血脂水平和胰岛素抵抗水平较高,炎症反应较重,以上因素共同促进了肝纤维化和冠状动脉粥样硬化病变的进展[27]。

综上所述,基于SYNTAX评分、HOMA-IR以及miRNA-122构建的列线图模型对于冠心病患者合并NAFLD具有较高的预测价值,冠心病合并NAFLD患者中血清miRNA-122表达水平较低者,其肝纤维化和冠状动脉粥样硬化病变程度较重。