丹桂口服液质量标准研究

李彩霞 赵丽萍

（酒钢医院药学部，甘肃 嘉峪关 735100）

丹桂口服液是酒钢医院根据临床需要，创新研发的纯中药制剂，由丹参、郁金、钩藤、桑寄生、桑叶、生地黄、生山楂、当归、怀牛膝、桂枝、白芍、甘草、川芎等组成。其中丹参、当归养血活血化瘀；郁金、川芎行气散瘀；钩藤平肝潜阳；桑寄生、怀牛膝补肝益肾、引火下行；桑叶疏风清热、清肝明目，还有抗凝血、降血压、降血脂的功效；生地黄滋阴生津、清热凉血；白芍敛阴养血、养阴柔肝，以平血逆凉血活血；诸药与甘草合用，辛甘化阳、行气通阳。因此该制剂具有平肝降逆、通阳舒痹、涤痰活血的功效，可治疗眩晕胸痹，不仅对头晕、头胀、胸闷、心悸、心慌有减轻的作用，还可以治疗高血压病。由于原方剂为汤剂，需现煎服用，携带、服用都不方便，且服用剂量大、口感不佳，导致患者用药依从性下降。因此将其制成口服液，不仅便于携带保存，而且该剂型是将原汤剂浓缩后加入矫味剂，服用量减少，口感佳，大大提高了用药依从性，造福广大患者。但是制备口服液需经过提取的工艺。为保证中药制剂的质量和临床疗效，文章研究出丹桂口服液中丹参、白芍、甘草等成分的薄层色谱鉴别法，为其质量控制标准提供了有效的科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器HX-TLC-3H 型薄层显色加热板（武汉恒信世纪科技有限公司）；AUW220D 型电子分析天平（日本岛津公司）；UV756MC 型紫外可见分光光度仪（奥谱勒公司）；KMH1-1100U 型超声清洗仪（广东固特超声股份有限公司）；ZF-20A 型暗箱四用紫外分析仪。

1.2 试剂丹参对照药材（批号：120923-201414）、甘草对照药材（批号：120904-201318）、芍药苷（批号：110736-201640）均来自中国食品药品检定研究院；丹桂口服液（酒钢医院试生产，批次分别为20200310、20200410、20200510）。所用化学试剂均选用分析纯。

2 定性鉴别

2.1 丹参

2.1.1 供试品溶液的制备取丹桂口服液20 mL 置于分液漏斗中，加入稀盐酸调节pH 值至2；加入乙酸乙酯20 mL，振摇分液漏斗提取2次，分离出乙酸乙酯液；合并2 次提取液至蒸发皿中，置水浴锅上蒸干；残渣加入2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材溶液的制备取丹参对照药材0.5 g，加入少量水煎煮30 min，滤过；滤液加水至20 mL，其后制备方法同供试品溶液，制成对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照品溶液的制备取缺丹参的阴性供试品，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.1.4 薄层色谱法（TLC）试验参考《中华人民共和国药典》2015 年版一部［1］附录Ⅵ B，用5 μL 点样管分别吸取上述3 种溶液各5 μL，分别条带状点样在同一硅胶G 板上，展开剂为三氯甲烷-丙酮-甲酸（25∶10∶4）；展开距边缘线1 cm 时取出，晾干后至展开缸用氨蒸气熏蒸10 min，再放至ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中，于365 nm 下检视。3 批样品与丹参对照药材的相同色谱位置上，显相同颜色的淡蓝色荧光斑点，而阴性对照在相应位置上无此斑点。见图1。

图1 丹参薄层色谱鉴别图（紫外灯365 nm）

2.2 白芍

2.2.1 供试品溶液的制备取丹桂口服液20 mL 置于分液漏斗中，加入乙醚10 mL，振摇分液漏斗提取2次；弃去乙醚液，再加入用水饱和的正丁醇15 mL，振摇提取2次；合并正丁醇液，加水20 mL，洗涤2次；蒸干，残渣加入1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液的制备取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为2 mg/mL的对照品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备取缺白芍的阴性供试品20 mL 置于分液漏斗中，其后制备方法同供试品溶液，制成阴性对照溶液。

2.2.4TLC试验参照《中华人民共和国药典》2015 年版一部［1］附录Ⅵ B，用5 μL的点样管取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨（8∶1∶4∶1）；展开距边缘线1.5 cm时取出晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，放置在薄层显色加热板上加热至105 ℃，直至斑点显色清晰，立即取下，于日光下观察。3 批样品均与对照品在相对应的色谱位置上显相同的紫色条带状斑点，阴性对照在此处无斑点［2］。见图2。

图2 白芍薄层色谱鉴别图（日光）

2.3 甘草

2.3.1 供试品溶液的制备取丹桂口服液30 mL 置于分液漏斗中，每次加入20 mL 正丁醇，共萃取3 次；合并正丁醇液，用水洗涤3 次；弃去水液，余下正丁醇液蒸干，残渣加入2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照药材溶液的制备取甘草药材粉末1 g置于圆底烧瓶中，加入40 mL 乙醚，水浴加热回流1 h，滤过，弃去乙醚液；药渣加入30 mL 甲醇，继续水浴加热回流1 h，滤过；药渣置分液漏斗中，加入40 mL 水溶解，正丁醇振摇提取3次，每次20 mL；合并正丁醇液，用水洗涤3 次，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加5 mL 甲醇溶解，制成对照药材溶液。

2.3.3 阴性对照品溶液的制备取缺甘草的阴性供试品30 mL 置于分液漏斗中，其后制备方法同供试品溶液，制成阴性对照溶液。

2.3.4TLC试验参照《中华人民共和国药典》2015 年版一部［1］附录Ⅵ B，取5 μL点样管吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）；展开距边缘线1.5 cm 时取出晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，放置在薄层显色加热板上加热至105 ℃，直至斑点显色清晰；放至ZF-20A型暗箱四用紫外分析仪中，于365 nm 下检视，或直接置于日光下检视。在供试品色谱中，紫外365 nm下检视3 批样品，在与对照药材色谱相应位置上应显相同蓝色荧光斑点；日光下检视3 批样品，在与对照药材溶液色谱相应位置上应显3 个相同黄色的斑点［1］。见图3。

图3 甘草TLC图谱（左紫外灯365 nm，右日光）

3 讨论

在做丹桂口服液中丹参的定性鉴别时，最先使用《中华人民共和国药典》2015 年版一部［1］中收载的丹参药材鉴别法，展开剂为三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4），展开至约4 cm 取出，晾干；再以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开至约8 cm，取出，晾干；分别在日光及紫外光灯（波长365 nm）下检视。结果显示样品的比移值小，且阴性有干扰。经反复查阅文献后，发现pH、温度、湿度对其比移值影响较大，之后选取不同的展开剂及薄层色谱方法，对丹桂口服液中丹参的薄层鉴别进行比较，比对各种方法的展开情况、分离度、清晰度、Rf 值等结果后，参考文献［3］将样品和阴性对照同时加稀盐酸调节pH 值至2后，加入有机溶剂提取制备供试品，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（25∶10∶4）为展开剂，展开取出晾干。至展开缸用氨蒸气熏蒸10 min 后至紫外灯365 nm 下检视［4］，温度控制在20～25 ℃，主斑点Rf 值在0.3～0.8。此条件下主要的斑点不受处方中其他药材成分的干扰，斑点清楚，分离度好，可作为丹桂口服液中丹参的薄层鉴别方法［3］。

对丹桂口服液中的白芍做薄层鉴别时，最初斑点不清晰，阴性有干扰，发现在显色这一步骤时烘烤温度过高、时间过长，会导致样品、阴性对照以及对照药材均在相应位置显现出斑点。这是由于其他杂质成分在相同位置有干扰。在后续鉴别过程中发现，只要控制好显色时的烘烤温度及时间，薄层鉴别结果明显，清晰地显现出芍药苷紫色的特有斑点，阴性无干扰［4］。

对丹桂口服液中的甘草做薄层鉴别时，选用《中华人民共和国药典》收载方法处理样品，要求在紫外灯365 nm下结果检视，但是本实验发现在日光下检视可直接观察出样品和对照药材相对应的斑点，且阴性无干扰［5］。由于丹桂口服液含有10余种中药材，又经过煎煮提取，多种成分混合在一起，导致鉴别时干扰因素多。因此选用多种有机溶剂，进行反复分离提纯鉴别。本实验对丹桂口服液中的主要药材丹参、白芍、甘草的薄层鉴别方法进行研究，发现3 批丹桂口服液质量稳定，制定出的定性方法专属性强、重复性高；且该方法操作快捷、简便，结果准确、稳定性好，可用于丹桂口服液的质量控制［6］。