宫腔粘连患者经阴道超声血流参数与子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达的关系

伍 娟

湖南省怀化市中医医院B超科 418000

宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是指发生在子宫内膜损伤后的纤维化病变,相关资料显示[1],女性流产后IUA的发生率可高达30%左右。该病患者临床常表现为子宫生理功能缺失、月经量减少、周期性腹痛、妊娠异常等情况,严重者可出现继发性不孕不育,给患者的身心健康带来了极大的危害[2]。因此一旦发现宫腔粘连的影像学表现,应积极采取有效的手段鉴别其患病情况,及早发现、积极治疗。宫腔镜检查是目前诊断IUA的金标准,但该方法属于侵入性操作,对机体产生一定创伤,阴道二维超声检查也是诊断IUA的常用方法,二维超声虽然可测量子宫内膜厚度,但无法全面显示出宫腔整体形态,对诊断IUA存在一定困难[3]。阴道三维超声血流参数可体现出检查者宫腔血流灌注情况,子宫内膜状况与宫腔血供情况紧密联系[4],但阴道超声血流参数与子宫内膜相关指标之间是否存在关系尚不清楚。鉴于此,本研究特通过回顾性分析探讨经阴道超声血流参数与宫腔粘连患者血清ER、PR、VEGF、LIF水平及子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达的关系,更深入挖掘阴道超声检查在此类患者中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 对医院2018年10月—2019年10月收治的65例IUA患者的临床资料(设为研究组)进行回顾,同时回顾同时间段在医院进行全身体检及阴道超声检查的61例健康者的体检资料(设为对照组),均符合纳入与排除标准。研究组:年龄23～45岁,平均年龄(35.38±4.36)岁;对照组:年龄22～48岁,平均年龄(36.45±5.07)岁。2组上述临床资料相接近(P>0.05),本次研究经过医院伦理委员会审批通过。纳入标准:(1)经检查证实研究组为IUA者,对照组均为健康者;(2)均实施子宫内膜指标检测、阴道超声检查者;(3)IUA患者均有完整的临床资料,对照组健康者均有完整的体检资料;(4)患者同意对其临床资料进行分析,对照组健康者同意对其体检资料进行调阅和分析。排除标准:(1)重要脏器功能障碍者;(2)伴有急性感染者;(3)伴有其他类型生殖系统疾病者;(4)免疫功能异常者;(5)存在精神、认知或沟通障碍者;(6)依从性差者;(7)妊娠者;(8)近3个月内献血者;(9)阴道超声检查或子宫内膜容受性指标检测结果模糊不清、难以辨认者。

1.2 方法

1.2.1 阴道三维超声检查方法:IUA患者与体检者均利用GE-VolusonE8超声诊断仪(美国GE公司)进行检查,检查时间均为月经周期的第18～20天,检查所用阴道三维超声探头为RIC5-9,频率为5～9MHz。排空膀胱,仰卧于检查床上取截石位,采用探头对子宫及其双附件进行检查,取子宫长轴矢状切面作为起始平面,显示屏上清晰显出子宫轮廓及内膜,之后固定探头,调节三维取样框范围,包含整个宫腔,设定探头扫查60°范围,对子宫内膜感兴趣部位三维成像取样,取样时嘱托检查者屏住呼吸,之后进行自动扫描完成图像采集取样。取样后,对所获的图像采用容积模式进行三维重建,得到冠状面、横断面、矢状面3个平面的声像图,对其进行勾画可自动得出血流指数(FI)、血管指数(VI)、血管化血流指数(VFI)。

1.2.2 血清指标水平的检测方法:所有患者和对照组均于阴道三维超声检查当天空腹抽取外周静脉血5ml,按照3 500r/min转速离心分离15min后,取上层清液分别采用放射免疫法、放射免疫法、酶联免疫法、酶联免疫法检测血清雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)水平,所用试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司,所用全自动生化分析仪为美国贝克曼库尔特公司AU5800型。

1.2.3 子宫内膜指标表达的检测方法:所有患者进行宫腔镜检查过程中提取子宫内膜组织标本,将标本进行生理盐水消毒,随后在10%的甲醛溶液中稳定,采用免疫组化检测方法测定子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达水平,将稳定后的组织经石蜡包埋后切片,利用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法进行测定,滴加的鼠抗人ER、PR、VEGF、LIF抗体均由Lecia Novocastra公司提供,严格按照试剂说明书进行操作,40℃条件下孵育过夜,冲洗,切片经SP染色,置于CHK型号Olympus显微镜下以400×观察,共选取5个视野,每个视野计数100个细胞,ER、PR定位于细胞核染色,VEGF、LIF定位于细胞质染色,染色程度为无色、淡棕色、棕色、棕褐色,分别记为0分、1分、2分、3分,以染色范围<5%、≥5%且<20%、≥20%且<50%、≥50%分别记为0分、1分、2分、3分,求染色程度与染色范围评分的总和,将结果为0～1分者记为蛋白阴性表达,否则记为蛋白阳性表达。每个切片在高倍镜下(10×40)进行筛选,筛选出阳性表达较强区域,利用Olympus显微镜图像分析系统对随机选择的5个视野彩色图像进行采集与储存,分析图像时首先对阳性目标进行彩色分割、编辑、定量分析,在取得满意图像后,计算出每个视野下阳性目标中的平均光密度(Mean optical density,MOD)值,MOD=sum(IOD)/sum(area)。

1.3 观察指标 (1)对比2组阴道超声血流参数(FI、VI、VFI水平)变化情况。(2)对比2组血清ER、PR、VEGF、LIF水平。(3)统计研究组子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF (MOD值)表达情况。(4)研究组阴道超声血流参数与血清子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达的相关性。

2 结果

2.1 2组阴道超声血流参数对比 研究组FI、VI、VFI水平均低于对照组(P<0.05),见表1。

表1 2组阴道超声血流参数对比

2.2 2组血清ER、PR、VEGF、LIF水平对比 研究组血清ER、PR水平均低于对照组(P<0.05),VEGF和LIF水平均高于对照组(P<0.05),见表2。

表2 2组血清ER、PR、VEGF、LIF水平对比

2.3 研究组子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF (MOD值)表达结果 研究组ER、PR、VEGF、LIF表达水平(MOD值)分别为(9.74±1.54)、(7.45±1.09)、(2.35±0.27)、(2.59±0.31),见图1。

a b

2.4 研究组阴道超声血流参数与血清水平及子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达的相关性分析 研究组FI、VI、VFI均与血清ER、PR水平及子宫内膜ER、PR表达呈正相关(P<0.05),与血清VEGF、LIF水平及子宫内膜VEGF、LIF表达呈负相关(P<0.05),见表3和表4。

表3 患者阴道超声血流参数与血清ER、PR、VEGF、LIF水平的相关性分析

表4 患者阴道超声血流参数与子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达的相关性分析

3 讨论

IUA的发生机制尚不明确,宫腔手术操作不当、宫腔感染、放射性环境等均可导致该病的发生,当女性子宫内膜发生损伤后,短时间内胶原纤维会出现过度增生,随之抑制机体的内膜生长,一旦胶原纤维增生超过生理限度则会有瘢痕出现,最终导致IUA的发生[6-7]。诊断IUA的常用方法有宫腔镜、阴道超声检查等,但宫腔镜检查存在创伤大、疼痛等问题,阴道二维超声检查不能全面显示出宫腔情况,易出现误诊、漏诊情况。三维阴道超声检查可清晰显示出患者宫腔冠状面图像,可直观观察到全面宫腔情况,并可对患者子宫内膜的血流信号进行分析[8]。目前关于经阴道超声血流参数是否可作为评价IUA患者子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达情况的指标尚不明确,仍需进一步探讨,探索IUA患者阴道超声血流参数差异及其与子宫内膜相关指标表达的关系对此类患者的诊断、治疗具有重大的意义。

本次研究发现,研究组FI、VI、VFI水平均低于对照组,表明在IUA患者中经阴道超声血流参数均有典型的异常表现,是反映患者疾病状况的重要参考指标;研究组IUA患者子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达均存在异常。VI是患者血流信号的容积在感兴趣区容积的占比;FI反映了感兴趣区内的血流平均速度,以0～100之间的数字表示;VFI可反映患者感兴趣区内血流灌注情况[9]。子宫内膜与女性囊胚定位、侵入、胚胎着床紧密相关,IUA患者因为粘连处内膜无法正常生长,进而导致其血供不佳,血流灌注减少,则表现为内部血流信号弱,故通过计算子宫内膜内血流及血管指数,可对IUA患者子宫内膜血供、粘连情况进行判断[10]。LIF是一种多效性糖蛋白,在细胞生长、增殖、分化中起到重要作用,表达水平随着女性月经情况发生变化。研究表明[11],LIF主要在子宫内膜中发挥作用,通过调控细胞中的基因表达对胚胎着床结果产生影响,进而影响子宫内膜相关指标的表达。雌、孕激素是影响子宫内膜功能的重要激素,属于蛋白质分子,通过与其受体结合并相互作用,在子宫内膜发育至容受状态起到调节作用,直接影响胚胎着床、发育,故ER、PR的表达水平直接影响子宫内膜的功能。VEGF是血管生成因子,具有诱导血管内皮细胞增殖分裂、促使新血管生成的作用,VEGF表达水平可反映出子宫内膜的血供情况,是胚胎着床过程中的重要影响因子。既往研究表明[12],在IUA患者中,ER、PR表达偏低,而VEGF、LIF表达水平偏高,本研究结果中血清ER、PR、VEGF、LIF水平及子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达结果与上述报道均相符,提示上述指标均可作为评价IUA患者子宫内膜功能的重要指标。

另外,本研究还发现,研究组FI、VI、VFI均与血清ER、PR水平及子宫内膜ER、PR表达均呈正相关,与血清VEGF、LIF水平及子宫内膜VEGF、LIF表达均呈负相关,表明经阴道超声血流参数与宫腔粘连患者子宫内膜功能有紧密的关系。分析其原因可能为:雌、孕激素及细胞生长因子直接影响着患者的子宫内膜功能,雌、孕激素通过对子宫内膜发育至容受状态的调节,直接或间接使相关因子的表达水平出现变化,对子宫内膜的血流状况产生影响,进而使经阴道超声检查血流参数发生异常;VEGF、LIF的表达可显著影响患者的子宫内膜营养状况及血供情况,使患者血管、血流情况发生异常,对经阴道超声检查血流参数产生一定影响[13]。

综上所述,IUA患者阴道超声血流参数FI、VI,血清及子宫内膜ER、PR等均有明显异常,且阴道超声血流参数与子宫内膜ER、PR、VEGF、LIF表达均有相关性,提示在IUA患者的诊断中可将阴道超声血流参数作为参考,并将其作为评估子宫内膜功能的重要依据,充分利用阴道超声检查的价值。