早产儿BPD 的危险因素及血浆BMP-7 miR-15b 25-（OH）D3 对其诊断价值分析

马萌萌 赵学辉 杨 洁

支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）是引起持续性呼吸窘迫的一种慢性肺部疾病，在早产儿中具有较高的发病率[1］。早产儿一旦发生BPD可引起黏膜上皮出现不可逆损伤，即使患儿接受足疗程治疗，也会严重影响生长发育[2］。因此，有效分析早产儿BPD 的危险因素，对降低早产儿BPD 的发生风险，并促进早产儿生长发育意义重大。既往报道，早产儿BPD 的发生可能与胎龄、吸氧时间、机械通气时间及细胞因子水平变化等有关[3-4］。骨形成蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）是转化生长因子超家族重要成员，其参与机体的肺损伤及损伤后组织修复过 程[5］。微 小 核 糖 核 酸-15b（Microribonucleic acid-15b，miR-15b）可参与细胞增殖分化、血管生成等调控过程，其水平变化与肺部疾病进展过程有关[6］。25 羟基维生素D3[25 hydroxyvitamin D3，25-（OH）D3］是一种促进机体生长发育的类固醇激素，其低表达可在一定程度上影响肺功能和结构[7］。但目前关于早产儿BPD的危险因素及血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对其的诊断价值仍需探究。基于此，本研究以早产儿为对象进行研究，旨在进一步探索早产儿BPD 的危险因素及血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对其诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2022 年1 月至2023 年3月河北省沧州中西医结合医院收治的136 例早产儿的临床资料。根据是否伴有BPD[8］，将其分为BPD 组（n=45）和非BPD 组（n=91）。纳入标准：①胎龄＜32 周者；②住院时间≥28 d 者；③出生后2 d 内入院并进行生化检查者；④临床资料齐全者等。排除标准：①伴有染色体异常、严重先天畸形、先天性心脏病及遗传代谢性疾病者；②并发气胸、膈疝、胸腔积液、胎粪吸入综合征者；③病情严重难以存活者；④重症肺炎引起的肺实变、肺不张需长期氧依赖者等。本研究经医院医学研究伦理委员会批准并同意（伦理批号：CZX2022017），患儿家属均知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 由经统一培训的临床资料调查员收集符合纳入排除标准的患儿临床资料，主要包括胎儿数目、分娩方式、出生体质量、胎龄、性别、机械通气时间、吸氧时间、吸氧浓度、有无胎膜早破、有无颅内出血、有无脓毒血症、母亲年龄、母亲有无妊娠高血压综合征、母亲有无妊娠糖尿病等。

1.2.2 血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3及血清清蛋白（albumin，ALB）、前白蛋白（prealbumin，PA）水平检测 出生后2 d 内采集所选患儿的空腹静脉血6 mL，取4 mL 抗凝后进行离心处理（时间15 min，离心半径8 cm，速率3 000 r/min），取2 mL 血浆用酶联免疫吸附试验测定血浆BMP-7、25-（OH）D3水平，试剂盒均购自美国贝克曼库尔特有限公司。同时取2 mL 血浆用Trizol 法（试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司）提取总核糖核酸（ribonucleic acid，RNA），得到合格标本（浓度为100～500 ng/μL、吸光度值为1.8～2.0）后进行反转录，获得互补脱氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA），反转录试剂盒购自北京智杰方远科技有限公司。采用ABI Prizm7300 序列检测系统（美国Applied Biosystems 公司）进行实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reactio，PCR）测定血浆miR-15b 水平。美国赛默飞公司提供引物设计及合成，以U6 为内参，PCR 引物序列如下：U6 正向引物为5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物为5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；miR-15b 正向引物为5'-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3'，反向引物为5'-GCGTAGCAGCACATCATGG-3'。采用2-ΔΔCt法计算miR-15b 相对浓度。另取2 mL 全血进行离心处理（时间15 min，离心半径8 cm，速率3 000 r/min），取血清用酶联免疫吸附试验测定血清ALB、PA 水平，试剂盒均购自美国贝克曼库尔特有限公司。

1.3 观察指标 比较两组患儿胎儿数目、分娩方式、出生体质量、胎龄、性别、机械通气时间、吸氧时间、吸氧浓度、有无胎膜早破、有无颅内出血、有无脓毒血症、母亲年龄、母亲有无妊娠高血压综合征、母亲有无妊娠糖尿病 及 血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3、血清ALB、PA 水平；分析早产儿发生BPD 的危险因素；评估血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对早产儿BPD 的诊断价值。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0 软件进行统计分析，计数资料用率表示，采用χ2检验，计量资料以-x±s表示，两组间均数比较采用独立样本t检验。采用单因素分析影响早产儿发生BPD 的相关因素，并利用多因素logistic 回归分析其危险因素。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对早产儿BPD 的诊断价值。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 早产儿BPD 的单因素分析 两组患儿机械通气时间、吸氧时间、有无脓毒血症及血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组胎儿数目、分娩方式、出生体质量、胎龄、性别、吸氧浓度、有无胎膜早破、有无颅内出血、母亲年龄、母亲有无妊娠高血压综合征、母亲有无妊娠糖尿病及血清ALB、PA 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 早产儿BPD的单因素分析

2.2 早产儿BPD 的多因素logistic 回归分析 将有差异的单因素（机械通气时间、吸氧时间、血浆BMP-7 水平、血浆miR-15b 水平、血浆25-（OH）D3 水平：具体数值；脓毒血症：无=0，有=1）作为自变量，将早产儿BPD发生情况作为因变量（BPD=1，非BPD=0），采用向前极大似然法进行多因素logistic 回归分析，结果显示，机械通气时间长（＞均值7 d）、血浆BMP-7、miR-15b 水平偏高、血浆25-（OH）D3水平偏低是早产儿BPD 的独立危险因素（P＜0.05）。见表2。

表2 早产儿BPD的多因素logistic回归分析

2.3 血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对早产儿BPD的诊断价值 以BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3为检验变量，以早产儿BPD 发生情况为状态变量，绘制ROC曲线，结果显示，BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3的曲线下面积值＞0.8，准确度较高，将3 项指标联合，其预测早产儿BPD 的曲线下面积值为0.947，高于3 项指标单独检测（P＜0.05），灵敏度为84.44%，特异度为90.11%。见表3、图1。

图1 血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3 诊断早产儿BPD 的ROC曲线

表3 血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3对早产儿BPD的诊断价值

3 讨论

BPD 是早产儿常见的并发症之一，在早产儿中具有较高的病死率，严重影响早产儿生存质量[9-11］。因此，早诊断、早治疗早产儿BPD，对预防早产儿发生反复下呼吸道感染、高反应性气道疾病，并促进患儿生长发育迟缓等情况的改善尤为关键。

本研究发现，两组患儿机械通气时间、吸氧时间、有无脓毒血症及血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比较，差异有统计学意义；进一步分析发现，机械通气时间长、血浆BMP-7、miR-15b 水平偏高、血浆25-（OH）D3水平偏低是早产儿BPD 的危险因素。机械通气时间长容易导致早产儿气道黏膜受损，进一步增加气压伤的发生风险，进而易损伤患儿肺组织和结构，增加BPD 的发生概率[12-14］。BMP-7 是丝氨酸/苏氨酸激酶受体，其可通过参与调控Smads 信号通路而参与机体肺损伤过程，正常情况下其水平较低，但当机体发生肺损伤时其水平异常升高[15］。既往有学者指出，血浆BMP-7 是早产儿BPD 的独立危险因素，且其对早产儿BPD 具有一定的诊断价值[16］，与本研究结果基本相符。BMP-7 参与早产儿BPD 的疾病进展过程，考虑可能与BMP-7 水平升高可加重机体肺损伤有关。miR-15b 被认为是一种致癌基因，可参与细胞增殖与分化过程，并可参与调节血管生成的各个阶段[17-18］。血浆miR-15b在BPD 早产儿血浆中明显上调[19］。miR-15b 参与早产儿BPD 的疾病进展过程考虑可能与miR-15b 水平升高可损伤肺结构和功能有关。维生素D 属类固醇激素，在促进机体生长发育过程中起着重要作用[20］。25-（OH）D3可通过AD 受体介导而和AD 反应元件结合，发挥调节AD 靶基因表达的作用，而AD 信号通路基因在机体肺发育的囊状期、假腺期均处于偏高水平，可在一定程度上促进生长发育[21］。25-（OH）D3缺乏，会增加肺部炎症发生的概率，而充足的25-（OH）D3不仅可促进蛋白质及肺表面活性磷脂的合成，还可促进纤维原细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞的分化，使肺功能成熟，但当其水平偏低时可在一定程度上影响肺功能成熟，进而影响生长发育[22］。25-（OH）D3参与早产儿BPD 的疾病进展过程，考虑可能与25-（OH）D3水平降低可影响肺功能成熟有关。此外，本研究发现，血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3联合诊断早产儿BPD 的曲线下面积值高于血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3单独检测，表明血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3联合检测可相互补足，进一步提高对早产儿BPD 的诊断价值。

综上，早产儿BPD 的危险因素与机械通气时间长、血浆BMP-7、miR-15b 水平偏高、血浆25-（OH）D3水平偏低有关，且血浆BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3联合检测对早产儿BPD 的诊断价值更高。