冠心病患者血清miR⁃122⁃5p 变化及与斑块稳定程度、预后的关系

杨亚楠 王蕊 张文婷 刘恒

心血管疾病的类型较多，其中冠心病（Coro⁃nary heart disease，CHD）最为常见，其在中老年群体的发病率、致残率及死亡率较高［1］。临床研究显示，冠状动脉斑块稳定程度与CHD 病情进展密切相关［2］。稳定斑块具有声影较强、回声强等特点；不稳定斑块包括钙化结节、糜烂斑块及破裂斑块等，易发生破裂从而引起管腔闭塞、血流中断及血栓形成，严重者还会出现心源性休克［3］。因此，寻找简便易行、高效的生物标志物在早期及时诊断CHD 患者斑块稳定程度对制定治疗方案、改善患者预后具有重要的价值。

近年来微小RNA（microRNA，miRNA）在心血管疾病中的作用逐渐受到临床关注，有报道显示CHD 患者血清miRNA 存在异常表达［4］。国内外研究也发现，miRNA 与CHD 患者斑块形成有关，部分miRNA在CHD中呈特异性表达［5］。miR⁃122⁃5p具有较强的组织特异性，与心脏疾病的发生有关，临床研究发现抑制miR⁃122⁃5p表达可以诱导心肌细胞抗凋亡［6］。本研究拟分析CHD 患者血清miR⁃122⁃5p水平与斑块稳定程度、预后的关系，旨在为探寻评估CHD 患者预后的指标提供新参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

取张家口市第五医院2019 年8 月至2021 年8月186 例CHD 患者作为研究组。另取同期90 名健康体检者作为对照组。本研究经院医学伦理委员会批准通过。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①满足《心血管内科疾病诊疗指南》［7］CHD 标准；②影像学检查确诊；③首次发病；④患者签署知情同意书；⑤近1 个月未接受相关治疗。排除标准：①其他类型心脏疾病者；②精神疾病、凝血及认知功能严重损伤者；③近期有手术史及创伤史者；④肾、脑、肝等重要脏器严重损伤者；⑤自身免疫性疾病、急慢性感染性疾病、恶性肿瘤；⑥临床资料不全者；⑦缺乏随访资料。

1.3 方法

1.3.1 资料收集

通过询问患者、查询电子病历等途径收集患者年龄、性别、体重指数、吸烟史、舒张压、收缩压、糖尿病史、高血脂史、血脂相关指标等临床资料。

1.3.2 血清miR⁃122⁃5p水平检测

研究组于入院当日、对照组于体检当日清晨取肘静脉血5 mL，室温下离心处理（转速3 000 r/min、离心半径10 cm、时间10 min），取上清液待测。通过Trizol 试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司）提取血清总RNA，使用甲醛变性电泳检测其完整性，经逆转录试剂盒（北京诺为生物技术公司）合成cDNA，反转录体积10 μL：5×PrimeScript RT Master Mix 2.0 μL、RNA 2.0 μL、RNase Free H2O 6.0 μL；反应条件：37℃15 min、85℃5 s、4℃反应至结束后保存于-20℃冰箱。血清miR⁃122⁃5p通 过qRT⁃PCR检测，反应体系 为：cDNA模板2 μL，上下游引物各1.5 μL，SYBR Green Master Mix 10 μL，ddH2O 8 μL。miR⁃122⁃5p上游引物序列：5′⁃ACACTCCAGCTGGGTGGAGTGTGACAA TGG⁃3′，下游引物序列：5′⁃TGGTGTCGTG⁃GAGTCG⁃3′，内参选择U6，U6上游引物序列：5′⁃GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT⁃3′；下游引物序列：5′⁃CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT⁃3′。反应条件：95℃5 min，95℃15 s，60℃1 min，72℃30 s，共40 个循环。通过2⁃ΔΔCt计算miR⁃122⁃5p水平。

1.3.3 斑块稳定程度评估

采用iLab 血管内超声显像仪进行检查，按照美国心脏病学会与欧洲心脏病协会联合制定的《冠脉血管内超声的检测指南》［8］分析图像，明确斑块性质，稳定斑块：病变血管狭窄程度小于70%，斑块边缘清晰、突入管腔内、回声均匀；不稳定斑块：斑块表面溃疡、破裂，斑块内脂质、钙化，回声不均匀。186 例CHD 患者根据斑块稳定程度分为不稳定斑块组（n=58）及稳定斑块组（n=128）。

1.4 随访

CHD 患者出院后均接受1 年随访，随访方式包括微信、电话及复诊，记录1 年内心血管不良事件发生情况，将心血管不良事件发生情况作为评估预后的标准［9］，分为预后不良组（n=50）及预后良好组（n=136）。心血管不良事件包括恶性心律失常、复发心绞痛、心源性再入院、心源性休克及心源性死亡等不良事件。

1.5 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计软件进行统计分析，计量资料以（x ± s）表示，组间行t检验；计数资料以n（%）表示，行χ2检验；采用ROC 曲线分析血清miR⁃122⁃5p水平对CHD 患者斑块稳定程度的诊断价值；采用Logistic 回归分析CHD 患者预后的危险因素。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组年龄、性别、体重指数、吸烟史、舒张压、收缩压、糖尿病史及高血脂史等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组一般资料比较［（），n（%）］Table 1 Comparison of General Information between the two Groups［（），n（%）］

表1 两组一般资料比较［（），n（%）］Table 1 Comparison of General Information between the two Groups［（），n（%）］

2.2 两组血清miR⁃122⁃5p 水平比较

研究组血清miR⁃122⁃5p水平为（0.54±0.13），对照组血清miR⁃122⁃5p水平为（0.19±0.03），研究组血清miR⁃122⁃5p水平高于对照组，差异有统计学意义（t=25.197，P＜0.001）。

2.3 CHD 不同斑块稳定程度患者血清miR⁃122⁃5p水平比较

不稳定斑块组血清miR⁃122⁃5p水平为（0.69±0.13），稳定斑块组血清miR⁃122⁃5p水平为（0.47±0.11），不稳定斑块组血清miR⁃122⁃5p水平高于稳定斑块组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 血清miR⁃122⁃5p 水平对CHD 患者斑块稳定程度的诊断价值

由ROC 曲线可知，血清miR⁃122⁃5p水平诊断CHD 患者斑块稳定程度的AUC 为0.845，95% CI为0.785～0.905，截断值为0.54，特异度为0.805，敏感度为0.810（P＜0.05）。见图1。

2.5 影响CHD 患者预后的单因素分析

随访1 年，186 例CHD 患者中，预后不良患者50 例，预后良好患者136 例。预后不良组血清miR⁃122⁃5p水平高于预后良好组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 影响CHD 患者预后的单因素分析［（），n（%）］Table 2 Univariate analysis of prognostic factors affecting CHD patients［（），n（%）］

表2 影响CHD 患者预后的单因素分析［（），n（%）］Table 2 Univariate analysis of prognostic factors affecting CHD patients［（），n（%）］

2.6 影响CHD 患者预后的多因素分析

CHD患者预后情况作为因变量（预后良好=0；预后不良=1），以血清miR⁃122⁃5p水平作为自变量（以所有患者平均值为界：≤平均值=0；＞平均值=1），Logistic分析显示，血清miR⁃122⁃5p水平过高是CHD 患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响CHD 患者预后的多因素分析Table 3 Multivariate analysis of factors affecting the prognosis of CHD patients

3 讨论

CHD 属于慢性炎症性疾病，发病基础为动脉粥样硬化，但病理机制较为复杂，其发生发展与炎症反应、自身免疫、遗传及代谢紊乱等因素有关。有报道显示，CHD 患者的内皮细胞能吸引白细胞至新生动脉粥样硬化位置，且随动脉粥样硬化的发展，白细胞及其他血管壁细胞会释放大量不同类型的促炎介质，促进冠状动脉斑块损伤，从而增加斑块破裂风险［10］。有报道发现，约3/4 的CHD 患者是不稳定斑块破裂而引起急性发病［11］。不稳定斑块具有血栓形成倾向，其不稳定性会引起斑块破裂，增加不良预后风险。及早识别不稳定斑块对评估CHD 病情进展和指导治疗具有重要的意义。现阶段临床上主要通过冠状动脉造影对冠状动脉狭窄程度进行评估，但该检查手段无法有效判断冠状动脉斑块的组织结构特性。因此，临床亟需探寻其他有效手段诊断CHD 患者斑块稳定程度。

miRNAs 是一类具有组织特异性的非编码RNA，能调控细胞分化、生长、增殖及凋亡等生命活动过程，其可配对靶基因mRNA，诱导沉默复合体，影响mRNA 过程。临床研究发现，心血管疾病的发生发展与miRNAs 存在密切联系，miRNAs 结合靶基因后通过复杂调控网络影响血小板活化及斑块破裂等过程，促进动脉粥样硬化后血管生成［12］。miR⁃122⁃5p属于组织特异性较强的miRNA，在肝脏组织中呈特异性表达。临床研究发现，心血管疾病患者血清miR⁃122⁃5p水平随着病情进展而升高［13］。国外报道认为，miR⁃122⁃5p与心脏疾病药物治疗效果有关，其过表达会降低药物对心脏疾病的治疗效果［14］。本研究结果显示，研究组血清miR⁃122⁃5p水平均高于对照组，提示miR⁃122⁃5p在CHD 患者血清中呈高表达。这可能是因为：CHD 会引起血管内壁炎症反应，损伤血管内皮细胞功能，促进心肌细胞凋亡，导致miR⁃122⁃5p水平升高。既往研究显示，不稳定斑块是引起CHD 的重要因素，破裂的薄壁纤维粥样斑块、局部炎症反应是不稳定斑块的重要特征［15］。但现阶段临床关于血清学指标诊断斑块稳定程度的研究较少。本研究对比不同斑块稳定程度CHD 患者血清miR⁃122⁃5p水平发现，不稳定斑块组远高于稳定斑块组，表明miR⁃122⁃5p与CHD 患者斑块稳定程度有关。进一步的ROC 曲线分析显示，血清miR⁃122⁃5p诊断CHD 患者斑块稳定程度的AUC为0.845，提示miR⁃122⁃5p可作为诊断斑块稳定程度的参考指标。本研究还发现，预后不良组血清miR⁃122⁃5p水平高于预后良好组，表明miR⁃122⁃5p与CHD 患者预后有关。进一步的Logistic 回归分析显示，血清miR⁃122⁃5p水平过高是CHD 患者预后不良的独立危险因素，提示临床应重点关注CHD 患者血清miR⁃122⁃5p水平变化，并予以针对性干预，从而避免不良预后。

综上所述，miR⁃122⁃5p在CHD 患者血清中呈高表达，对斑块稳定程度具有一定的诊断价值，其水平过高是CHD 患者预后不良的独立危险因素。