AFP、GP73 及GPC3 检测在原发性肝癌诊断及预后评估中的价值

何平 徐婧怡 张雪雪 陈晓龙

原发性肝癌（Primary liver cancer，PHC）临床表现极不典型，早期症状不明显，随时间推移，患者可出现肝区疼痛、乏力、食欲缺乏、消瘦等症状，症状一旦出现往往患者肿瘤已经较大，且病情发展迅速，如未及时有效治疗，患者在几个月至1 年内即可死亡［1］。有研究证实，在PHC 患者发病早期及时行手术治疗可使患者5 年生存率达到50%～70%［2］。因此，早诊断、早治疗PHC，对患者病情进展、转归及预后具有重要意义。当前，临床认为血清甲胎蛋白（alpha⁃fetoprotein，AFP）对于鉴别PHC、肝硬化具有重要意义，在PHC 中，AFP 水平呈升高，可作为PHC 阳性检测指标，但其诊断敏感性不高，在部分PHC 患者中检测呈阴性，因此仅依靠AFP 对PHC 早期诊断与筛查具有一定局限性［3］。相关文献报道，PHC患者中可见血清高尔基体糖蛋白73（Golgi glyco⁃protein 73，GP73）与磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Phos⁃phatidyl inositol proteoglycan 3，GPC3）升高［4］。近年来相关研究证实，GP73 与GPC3 在AFP 检测阴性患者的血清中有较高的阳性检出率，可用于PHC 的早期诊断［5］。本文旨在分析血清AFP、GP73 及GPC3 检测在PHC 诊断及预后评估中的价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年5 月至2022 年5 月郑州大学第一附属医院收治的原发性肝癌患者52 例为研究对象，设为PHC 组，其中男41 例，女11 例，平均年龄（49.62±2.95）岁，平均体重指数（Body mass index，BMI）（17.59±1.24）kg/m2。根 据TNM 病理分期［6］：Ⅰ期18 例，Ⅱ期16 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期10例。纳入标准：①符合《原发性肝癌诊疗规范（2019 年版）》相关标准［6］；②临床资料完整；③既往未行无水乙醇注射、射频消融等治疗；④依从性良好者；⑤意识清晰，可正常沟通者。排除标准：①无法正常交流；②伴其他系统疾病或器质性病变者；③合并慢性感染性疾病。另外再选取同期本院收治的肝硬化患者46 例与健康体检者48 名，分别设为肝硬化组与健康组，其中肝硬化组男39 例，女7 例，平均年龄（45.36±3.95）岁，平均BMI（17.63±1.23）kg/m2。纳入标准：①符合《肝硬化诊治指南》相关标准［7］；②临床资料完整；③患者存在明确基础肝病史及相关体征。排除标准同PHC 组。健康组男40 名，女8 名，平均年龄（46.90±4.95）岁，平均BMI（18.15±2.10）kg/m2。三组一般临床资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，且受试者及家属知晓并同意。

1.2 方法

1.2.1 血清AFP、GP73 及GPC3 检测

PHC 组、肝硬化组入院当日，健康组于体检当日均采集静脉血5 mL，放置抗凝管内，离心（3 000 r/min、15 min、离心半径10 cm），采集血清，在6 h 内完成检测，采用全自动化学发光仪（罗氏E601 型）、电化学发光法检测AFP 水平；应用酶联免疫吸附法测GP73、GPC3 水平，试剂盒来于美国Phoenix 公司，严格按照说明书进行操作。

1.2.2 随访

PHC 患者出院后进行3 个月随访，了解患者预后情况，并根据患者预后情况分为预后良好组及预后不良组。预后良好：未发生多器官功能障碍症及死亡；预后不良：发生多器官功能障碍症或死亡［6］。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行分析，计量资料采用（）描述，多组比较采用方差分析（F），两组比较使用t检验；计数资料采用n（%）表示，用χ2检验。采用二元Logistic回归分析影响PHC 组预后不良的危险因素；绘制ROC 曲线分析AFP、GP73、GPC3 单独及联合诊断PHC 的效果。均以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同人群AFP、GP73、GPC3 水平比较

AFP、GP73、GPC3 水平：PHC 组＞肝硬化组＞健康组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同人群AFP、GP73、GPC3 水平比较（）Table 1 Comparison of AFP，GP73 and GPC3 levels among different populations（）

注：与健康组比较，aP＜0.05；与肝硬化组比较，bP＜0.05。

2.2 不同病理分期PHC 患者血清AFP、GP73、GPC3 水平比较

AFP、GP73、GPC3 水平：Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同病理分期AFP、GP73、GPC3 水平比较（）Table 2 Comparison of AFP，GP73 and GPC3 levels in different pathological stages（）

表2 不同病理分期AFP、GP73、GPC3 水平比较（）Table 2 Comparison of AFP，GP73 and GPC3 levels in different pathological stages（）

注：与Ⅰ期比较，aP＜0.05；与Ⅱ期比较，bP＜0.05；与Ⅲ期比较，cP＜0.05。

2.3 不同预后PHC 患者的一般资料及AFP、GP73、GPC3 水平比较

随访结果显示，预后良好组45 例，预后不良组7 例。两组性别、年龄、BMI 指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。两组凝血酶原、红细胞计数、载脂蛋白A1、GGT、AFP、GP73、GPC3 水平比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 PHC 组不同预后一般资料及AFP、GP73、GPC3 水平比较（）Table 3 Comparison of general data of different prognosis and AFP，GP73 and GPC3 levels in PHC group（）

2.4 PHC 患者预后不良的危险因素分析

以是否预后不良为因变量，将单因素分析中具有统计学意义的变量纳入二元Logistic 回归模型进一步分析，结果显示凝血酶原、红细胞计数、载脂蛋白A1、GGT、AFP、GP73、GPC3 水平均上升是影响PHC 患者预后不良的危险因素（P＜0.05）。见表4。

表4 二元Logistic 回归分析PHC 患者预后不良的危险因素Table 4 Risk factors for poor prognosis in PHC patients using binary logistic regression analysis

2.5 AFP、GP73、GPC3 单一及联合检测对PHC 患者的诊断效能

依据ROC 曲线可知，AFP+GP73+GPC3 联合检测诊断PHC 的敏感度、特异度分别为0.956、0.857；AUC=0.950（95%CI：0.909～0.991），明显高于AFP、GP73、GPC3 单独检测（P＜0.05）。见表5、图1。

图1 ROC 曲线Figure 1 ROC curve

表5 AFP、GP73、GPC3 对PPHC 患者的诊断效能Table 5 Diagnostic efficacy of AFP，GP73 and GPC3 in patients with PPHC

3 讨论

据研究显示，PHC 目前是我国第2 位肿瘤致死病因［8］。由于PHC 起病较隐匿，早期临床症状不典型，诊断具有一定困难，确诊时多数患者已为中晚期，失去最佳治疗时机。因此，早期诊断PHC 并及时开展相应治疗，对扼制其病情发展及预后具有一定积极作用。本次研究显示，PHC 组AFP、GP73、GPC3 水平均显著高于肝硬化组与健康组，且不同病理分期PHC 患者的AFP、GP73、GPC3 水平存在差异，说明AFP、GP73、GPC3 的表达水平与PHC 患者的发生、病情发展具有一定关系。AFP是胚胎时期存在于血液中的一种糖蛋白，由胎儿肝脏和卵黄囊所合成，胎儿出生后AFP 水平逐渐下降，被白蛋白所代替。若肝细胞（或生殖腺胚胎组织）病变，与AFP 有关基因再次激活，重新合成AFP，血清中AFP 则会明显升高。有文献报道，90%以上PHC 患者中会出现AFP 水平显著上升，认为AFP 可作为PHC 的血清标志物［9］。既往有研究报道，GP73 及GPC3 在PHC 患者血清中呈现高表达现象，并在AFP 检测阴性患者的血清中也可呈高水平，对PHC 具有一定诊断价值［10］。GP73 属于跨膜蛋白，存在细胞高尔基体中，正常情况中，GP73 表达于胆管上皮细胞，肝细胞中几乎难见到GP73 表达。近年有研究报道，70%～80%肝细胞癌可见GPC3 呈特异性表达，认为其与肝细胞癌发生、预后具有紧密联系［11］。

有研究指出，AFP、GP73、GPC3 在肝癌中的浓度明显上升，且伴随着疾病严重程度的加重，其水平也呈逐渐升高趋势，三指标可作为预测预后的危险因素［12］。本次研究经多元Logistic 回归分析显示：AFP、GP73、GPC3 是影响PHC 预后的危险因素，与既往研究结果类似［12］，提示三者与PHC 预后关系密切。研究报道，PHC 患者行手术治疗后，多数术后2 个月内AFP 可降至正常范围，手术治疗后，AFP 水平出现上升，则表示治疗失败，且预后不佳［11］。GP73 在肝病表达中随病情发展表现为逐渐上升的趋势，健康人群的肝细胞中极少有GP73 的表达；肝癌组织表达GP73，与血管内皮生长因子有关，检测血清中GP73 可判断肝细胞癌患者肝切除术后的预后［10］。GPC3 与细胞粘附分子、生长因子、酶和酶抑制物等相互作用，可能参与多种信号通路，在肿瘤细胞生长过程中起到一定作用。国内研究显示，GPC3 低表达的患者一般预后良好，而GPC3 高表达被视为癌症复发的危险信号［13］。近年有研究认为，GP73、GPC 与AFP 联合检测有利于提高PHC 诊断及预后效能［14］。本研究ROC 曲线结果显示，AFP、GP73、GPC3 联合检测诊断PHC 的敏感度、特异度分别为0.956、0.857，AUC=0.950（95% CI：0.909～0.991），表明三指标联合检测助于PHC 早期诊断及筛查，且对于PHC 预后判定具有重要意义，与既往研究结果相似［15］。

综上所述，血清AFP、GP73、GPC3 三者联合检测在PHC 鉴别诊断中具有较高的诊断价值，可用于对PHC 的早期诊断，临床可通过检测上述血清水平来评估PHC 患者的预后情况。