类风湿关节炎患者血清脂肪因子趋化素与疾病活动度和Th17/Treg的关系

许文静 高冬梅 李慧心 王莉 佟胜全

摘要：目的 探究類风湿关节炎（RA）患者血清脂肪因子趋化素水平与疾病活动度和辅助性T细胞17/调节性T细胞（Th17/Treg）比值的相关性。方法 纳入RA患者180例为观察组，根据DAS28评分将观察组分为高活动组、中活动组和低活动组，每组60例；另选取同期体检的健康者180例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清趋化素、白细胞介素（IL）-9、IL-10、IL-17水平；流式细胞术检测Th17/Treg比例；分析RA患者血清趋化素水平与DAS28评分，Th17、Treg细胞百分比及Th17/Treg比值的相关性。结果 观察组血清趋化素水平高于对照组（P＜0.05）。RA患者血清趋化素水平与DAS28评分呈正相关；高、中、低活动组血清趋化素水平和DAS28评分依次降低；观察组Th17细胞百分比、Th17/Treg比值、IL-17、IL-9水平高于对照组，Treg细胞百分比、IL-10水平低于对照组（P＜0.05）。RA患者血清趋化素水平与Th17细胞百分比、Th17/Treg比值呈正相关，与Treg细胞百分比呈负相关（P＜0.05）。结论 RA患者的血清趋化素水平升高，与疾病活动度和Th17/Treg比值具有密切关系。

关键词：关节炎，类风湿；趋化因子类；Th17细胞；T淋巴细胞，调节性；白细胞介素类；疾病活动度

中图分类号：R593.22文献标志码：ADOI：10.11958/20230505

Correlation analysis of serum Chemerin with disease activity and Th17/Treg in patients with rheumatoid arthritis

Abstract： Objective To explore the correlation of serum Chemerin level with disease activity and the ratio of T helper 17/regulatory T cells （Th17/Treg） in patients with rheumatoid arthritis （RA）. Methods A total of 180 patients with RA who were admitted to our hospital were regarded as the observation group. According to the DAS28 score， the observation group was divided into the high activity group （60 cases）， the moderate activity group （60 cases） and the low activity group （60 cases）. Another 180 healthy people who underwent physical examination in our hospital during the same period were regarded as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect serum levels of Chemerin， interleukin-9 （IL-9）， interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17）. Flow cytometry was used to detect the Th17/Treg ratio. Spearman correlation analysis was applied to analyze the correlation between serum Chemerin level and DAS28 score. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between serum Chemerin level and Th17， Treg cell percentage and Th17/Treg ratio. Results The results of this study showed that the serum level of Chemerin was higher in the observation group than that in the control group （P＜0.05）. The serum Chemerin level was positively correlated with DAS28 score （P＜0.05）. Serum Chemerin levels and DAS28 scores decreased in turn in the high， moderate and low activity groups （P＜0.05）. The percentage of Th17 cells and the ratio of Th17/Treg were higher in the observation group than those in the control group， and the percentage of Treg cells was lower in the observation group than that in the control group （P＜0.05）. The level of IL-10 was lower in the observation group than that in the control group， while levels of IL-17 and IL-9 were higher in the observation group than those in the control group （P＜0.05）. The results of Pearson correlation analysis showed that serum Chemerin level was positively correlated with the percentage of Th17 cells and the ratio of Th17/Treg， and negatively correlated with the percentage of Treg cells （P＜0.05）. Conclusion Serum Chemerin level is elevated in patients with RA， which is closely related to disease activity and Th17/Treg ratio.

Key words： arthritis， rheumatoid; chemotactic factors; Th17 cells; T-lymphocytes， regulatory; interleukins; disease activity

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一类常见的自身免疫类疾病，发病率、致残率高［1］。RA主要表现为慢性关节炎症，病情持续、反复，可导致关节破坏、功能丧失，并伴有并发症，严重影响患者生活和健康［2-3］。趋化素（Chemerin）是一种脂肪细胞因子，参与人体内多种反应的调节，如调节脂肪、血管生成，糖脂、能量代谢，炎症、免疫反应等［4］。有研究表明，趋化素在RA患者外周血、炎症关节滑液中水平明显升高，刺激炎症及组织损伤，参与关节及骨破坏等［5］。辅助性T细胞17/调节性T细胞（Th17/Treg）平衡失调与RA的发生发展密切相关。Th17具有促炎作用，而Treg具有调节免疫、抑制炎症发生的功能，二者共同维持免疫平衡［6］。白细胞介素（IL）-9、IL-10及IL-17等炎性因子通过调节炎症反应，参与RA的进程［7］。目前关于血清趋化素水平对RA患者的疾病活动度和Th17/Treg比值影响的研究较少。本研究通过检测RA患者血清趋化素水平，探究其与患者疾病活动度和Th17/Treg比值的相关性，为RA的治疗提供新的研究方向。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2019年5月—2021年5月唐山市工人医院收治的RA患者180例为观察组，男96例，女84例，年龄47～70岁，平均（59.20±7.14）岁；根据28处关节疾病活动评分（DAS28），将观察组分为高活动组（DAS28＞5.1分）、中活动组（3.2分＜DAS28≤5.1分）、低活动组（2.6分＜DAS28≤3.2分），每组60例。纳入标准：（1）符合RA诊断标准［8］。（2）18岁≤年龄≤75岁。排除标准：（1）妊娠期、哺乳期妇女。（2）合并系统性红斑狼疮等其他自身免疫性疾病。（3）患有肿瘤、感染性疾病、高血压、高胆固醇血症。（4）患有精神障碍等精神疾病。另选取同期在本院体检的健康者180例作为对照组，男89例，女91例，年龄49～70岁，平均（60.25±6.85）岁。观察组和对照组性别（χ2=0.545）、年龄（t=1.424）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。患者对本研究知情同意且签署知情同意书，本研究通过本院伦理委员会批准（伦理号：GRYY-LL-KJ2022-110）。

1.2 主要试剂和仪器 趋化素酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海化邦生物科技有限公司，IL-17、IL-9、IL-10 ELISA试剂盒均购自北京雅安达生物技术有限公司，Space流式细胞仪购自广州吉源生物科技有限公司，RPMI-1640培养基购自上海谷研实业有限公司，佛波酯（PMA）购自北京孚博生物科技有限公司，布雷非德菌素（BFA）购自上海莼试生物科技有限公司，鼠抗人CD4购自南通表源生物技术有限公司，鼠抗人CD25购自苏州亚科科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 临床资料收集 收集患者入院时临床资料，包括C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽（抗-CCP）抗体，以及补体C3、C4等。

1.3.2 血液样本采集 分别抽取观察组检查日清晨和对照组体检当天的空腹静脉血5 mL，静置30 min，4 ℃、3 000 r/min离心15 min，取血清样本，置于-80 ℃保存待测。

1.3.3 ELISA法检测趋化素、IL-17、IL-9、IL-10水平 采用ELISA法检测血清趋化素、IL-17、IL-9、IL-10水平，操作步骤严格按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.3.4 流式细胞术测定Th17细胞、Treg细胞百分比 使用密度梯度离心法分离外周血单核细胞，加入RPMI-1640培养基稀释，然后加入PMA、BFA，置于CO2培养箱孵育。分别孵育抗人CD4、CD25抗体后检测Th17细胞和Treg细胞百分比；使用磷酸盐缓冲液（PBS）反复洗涤后放入流式细胞仪进行检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 25.0进行数据分析。计量资料以[x] ±s表示，2组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用SNK-q检验；非正态资料以M（P25，P75）表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验；计数资料用例（%）表示，组间比较采用χ2检验；RA患者血清趋化素与DAS28评分的相关性采用Spearman相关，血清趋化素与Th17、Treg细胞百分比、Th17/Treg比值的相关性分析采用Pearson相关。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较 2组受试者补体C3、C4水平差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组CRP、ESR、类风湿因子、抗-CCP抗体、趋化素水平高于对照组（P＜0.01），見表1。

2.2 RA患者各活动组间趋化素水平比较及与DAS28的相关性分析 高、中、低活动组血清趋化素水平和DAS28评分依次降低（P＜0.05），见表2。相关性分析显示，RA患者血清趋化素与DAS28评分呈正相关（rs=0.623，P＜0.01）。

2.3 2组Th17、Treg、Th17/Treg及相关细胞因子水平比较 观察组的Th17细胞百分比，Th17/Treg比值，IL-17、IL-9水平高于对照组；Treg细胞百分比、IL-10水平低于对照组（P＜0.05），见表3。

2.4 RA患者血清趋化素水平与Th17、Treg细胞百分比以及Th17/Treg比值相关性 RA患者血清趋化素水平与Th17细胞百分比呈正相关，与Treg细胞百分比呈负相关，与Th17/Treg比值呈正相关（r分别为0.638、-0.435、0.552，P＜0.01）。

3 討论

3.1 RA研究现状 RA是一种慢性自身免疫性疾病，其临床特征主要为关节软骨或骨破坏、滑膜增生、关节滑膜炎等，有可能导致关节畸形甚至残疾，影响患者生活质量［9］。RA发病率、致残率高，随着诊治条件、技术等日趋完善，其致死率逐步降低，但RA的致死率仍显著高于自然人群［10］。目前，RA发病机制尚不十分明确，有研究显示RA与遗传、环境、感染等因素有关，有可能因感染病毒等发病，也可能由精神刺激、吸烟、过度疲劳等因素刺激而发病［11］。RA患者疾病活动度可根据DAS28评分判断，随着疾病活动度的发展，患者通常伴随类风湿因子、ESR等与炎症相关的指标升高，但具体何种因素导致疾病活动度的变化仍不清楚［12］。

3.2 趋化素在RA中的变化趋势 脂肪因子由脂肪组织分泌，参与RA的发生发展，具有调节滑膜、软骨、骨和各种免疫细胞的功能［13］。有研究显示，脂肪因子的过表达会破坏软骨，对RA的发生发展具有促进作用［14］。趋化素是一种促炎脂肪因子，其在慢性炎症疾病患者血清中表达水平升高，与炎症标志物呈正相关［15］。李奇等［16］研究表明，趋化素促进了上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移。刘梅娟等［4］研究表明，RA患者血清中趋化素表达升高，促进RA炎症反应并参与RA的发生发展过程。

3.3 DAS28与趋化素水平及Th17细胞的相关性 DAS28被广泛应用于RA患者疾病活动度的综合评价，包括关节触痛、肿胀计数、ESR等［17］。DAS28包括五大类，分别为血沉或C反应蛋白的水平、肿胀关节数、压痛的关节数以及患者对病情的总体评估，疾病活动度随着分值升高而升高［12］。Th17与Treg属于CD4+ T细胞亚群，二者相互拮抗，共同维持机体正常免疫功能，Th17/Treg失衡介导了包括RA等多种疾病的发生［18］。有研究表明，在RA患者中Th17细胞数量增加，Treg细胞数量减少，即Th17/Treg失衡与RA的发生发展密切相关［19］。刘洁等［19］研究表明，Th17/Treg失衡参与急性脑梗死的发展过程。本研究结果显示，观察组血清趋化素水平高于对照组，提示趋化素参与了RA的发生发展过程。患者血清趋化素水平与DAS28评分呈正相关；随着患者疾病活动度增强，血清趋化素水平与DAS28评分增大，提示血清趋化素水平与RA患者疾病活动度密切相关，血清趋化素水平可作为监测患者疾病活动度的潜在指标。观察组患者Th17细胞百分比、Th17/Treg比值及IL-17、IL-9水平高于对照组，而Treg细胞百分比、IL-10水平低于对照组，提示Th17/Treg与RA的发生发展密切相关。相关性分析提示RA中血清趋化素与Th17/Treg密切相关。

综上所述，RA患者血清趋化素水平升高，与患者疾病活动度、Th17/Treg密切相关，临床可通过血清趋化素水平了解患者疾病活动度和Th17/Treg。但本研究样本量较小，且未深入研究血清趋化素影响患者疾病活动度、Th17/Treg的机制，后续需深入研究其相互作用的机制。

参考文献

［1］ LU S，ZHU M，GUO Q，et al. Metabolomic analysis of the urine from rats with collagen-induced arthritis with the effective part of caulophyllum robustum maxim［J］. Evid Based Complement Alternat Med，2021，2021：5580341. doi：10.1155/2021/5580341.

［2］ ZHU M，DING Q，LIN Z，et al. New targets and strategies for rheumatoid arthritis：from signal transduction to epigenetic aspect［J］. Biomolecules，2023，13（5）：766. doi：10.3390/biom13050766.

［3］ WON W，CHOI H J，YOO J Y，et al. Inhibiting peripheral and central MAO-B ameliorates joint inflammation and cognitive impairment in rheumatoid arthritis［J］. Exp Mol Med，2022，54（8）：1188-1200. doi：10.1038/s12276-022-00830-z.

［4］ 刘梅娟，王志刚. 类风湿关节炎不同中医证型与血清趋化素水平相关性研究［J］. 新中医，2021，53（8）：41-46. LIU M J，WANG Z G. Discussion on relationship between level of chemerin in serum and Chinese medicine syndrome types in patients with rheumatoid arthritis［J］. Journal of New Chinese Medicine，2021，53（8）：41-46. doi：10.13457/j.cnki.jncm.2021.08.011.

［5］ GONZALEZ-PONCE F，GAMEZ-NAVA J I，PEREZ-GUERRERO E E，et al. Serum chemerin levels：a potential biomarker of joint inflammation in women with rheumatoid arthritis［J］. PLoS One，2021，16（9）：e0255854. doi：10.1371/journal.pone.0255854.

［6］ SHA S，ZENG H，GAO H，et al. Adherent-invasive Escherichia coli LF82 aggravated intestinal inflammation in colitis mice by affecting the gut microbiota and Th17/Treg cell differentiation balance［J］. Arch Microbiol，2023，205（6）：218. doi：10.1007/s00203-023-03570-4.

［7］ 任通，朱芸，桑雨婷，等. D-二聚体、白介素-6、肿瘤坏死因子-α与类风湿关节炎活动性关系分析［J］. 中国现代医生，2020，58（4）：1-4. REN T，ZHU Y，SANG Y T，et al. Analysis of activity relationship between D-dimer，interleukin-6，tumor necrosis factor-αand rheumatoid arthritis［J］. China Modern Doctor，2020，58（4）：1-4.

［8］ 中華医学会风湿病学分会. 2018中国类风湿关节炎诊疗指南［J］. 中华内科杂志，2018，57（4）：242-251. Rheumatology Branch of Chinese Medical Association. 2018 Chinese guideline for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis［J］. Chinese Journal of Internal Medicine，2018，57（4）：242-251. doi：10.3760/cma.j.issn.0578-1426.2018.04.004.

［9］ RZEPKA D，SCHENKER H，GEINITZ H，et al. Chromosomal radiosensitivity in oncological and non-oncological patients with rheumatoid arthritis and connective tissue diseases［J］. Radiat Oncol，2023，18（1）：98. doi：10.1186/s13014-023-02291-8.

［10］ LIAO K P，SOLOMON D H. Lipids and cardiovascular risk through the lens of rheumatoid arthritis［J］. Arthritis & Rheumatology，2019，71（9）：1393-1395. doi：10.1002/art.40891.

［11］ NII T，MAEDA Y，MOTOOKA D，et al. Genomic repertoires linked with pathogenic potency of arthritogenic Prevotella copri isolated from the gut of patients with rheumatoid arthritis［J］. Ann Rheum Dis，2023，82（5）：621-629. doi：10.1136/ard-2022-222881.

［12］ 苏显都，林明利，符步远，等. 类风湿关节炎患者外周血单核细胞miR-24、miR-132表达及临床意义［J］. 中国免疫学杂志，2020，36（1）：90-93. SU X D，LIN M L，FU B Y，et al. Expression and clinical significance of miR -24 and miR-132 in peripheral blood mononuclear cells of patients with rheumatoid arthritis［J］. Chinese Journal of Immunology，2020，36（1）：90-93. doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2020.01.017.

［13］ MACDONALD I J，LIU S C，HUANG C C，et al. Associations between adipokines in arthritic disease and implications for obesity［J］. Int J Mol Sci，2019，20（6）：1505. doi：10.3390/ijms20061505.

［14］ NUGZAR O，ZANDMAN-GODDARD G，OZ H，et al. The role of ferritin and adiponectin as predictors of cartilage damage assessed by arthroscopy in patients with symptomatic knee osteoarthritis［J］. Best Pract Res Clin Rheumatol，2018，32（5）：662-668. doi：10.1016/j.berh.2019.04.004.

［15］ 张明萌，张斌，饶敏腊，等. 肥胖相关的部分脂肪因子研究进展［J］. 中国医药，2019，14（6）：952-956. ZHANG M M，ZHANG B，RAO M L，et al. Research progress of adipokines related with obesity［J］. China Medicine，2019，14（6）：952-956. doi：10.3760/j.issn.1673-4777.2019.06.037.

［16］ 李奇，高晨曦，芦恩婷，等. 趋化素（Chemerin）对卵巢癌细胞的增殖、迁移及细胞周期的影响［J］. 解剖科学进展，2020，26（3）：318-320，324. LI Q，GAO C X，LU E T，et al. The effect of chemerin on the proliferation， migration and cell cycle of ovarian cancer cells［J］. Progress of Anatomical Sciences，2020，26（3）：318-320，324. doi：10.16695/j.cnki.1006-2947.2020.03.020.

［17］ 姚血明，马武开，唐芳，等. 类风湿关节炎患者DAS28积分与疾病活动指标的相关性分析［J］. 中国慢性病预防与控制，2013，21（1）：79-81. YAO X M，MA W K，TANG F，et al. Correlation analysis between DAS28 score and disease activity indicators in patients with rheumatoid arthritis［J］. Chin J Prev Contr Chron Dis，2013，21（1）：79-81. doi：10.16386/j.cjpccd.issn.1004-6194.2013.01.040.

［18］ 张玉丽，范锐，隋华. 肠道微生态调控下的Th17/Treg细胞失衡及其在结直肠癌中的作用［J］. 现代肿瘤医学，2022，30（9）：1684-1689. ZHENG Y L，FAN R，SUI H. The imbalance of Th17/Treg under the regulation of intestinal microecology and its role in colorectal cancer［J］. Modern Oncology，2022，30（9）：1684-1689. doi：10.3969/j.issn.1672-4992.2022.09.033.

［19］ 劉洁，胡小辉，龚道恺. 急性脑梗死患者外周血Th17、Treg、Th17/Treg及炎症因子的动态变化过程研究［J］. 临床神经病学杂志，2020，33（2）：102-105. LIU J，HU X H，GONG D K. Dynamic variation of peripheral Th17，Treg，Th17/Treg and inflammatory biomarkers in patient with acute ischemic stroke［J］. J Clin Neurol，2020，33（2）：102-105. doi：10.3969/j.issn.1004-1648.2020.02.006.