非小细胞肺癌患者血清CA211水平和NK细胞数与预后相关

丁 飞，王 洒，黄常新

1.杭州师范大学附属医院 肿瘤科，浙江 杭州 310015；2.杭州师范大学 临床医学院，浙江 杭州 310018

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的类型之一,约占肺癌的80%[1]。由于NSCLC早期临床表现并不特异,大多患者确诊时已错过最佳治疗时间,手术及放疗效果较差,危害患者的生命健康[2]。因此寻找能够预测NSCLC患者预后状态的因子意义重大。糖类抗原211(carbohydrate antigen 211,CA211)存在于肿瘤细胞胞质中,当肿瘤细胞坏死时,CA211会释放至血液,因此临床常将血清CA211表达水平作为监测胰腺癌、肺癌等肿瘤疾病进展的特异性指标[3-4]。自然杀伤(natural killing,NK)细胞具有免疫清除、免疫监视和提高人体抗肿瘤免疫能力等功能,还能起到抑制肿瘤形成的作用[5],相关研究发现,肺癌的发生也与NK细胞数有关[6]。基于此,本研究测定了NSCLC患者血清CA211表达水平及NK细胞数,并分析了二者与NSCLC患者预后的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取杭州师范大学附属医院2019年6月至2022年7月收治的132例NSCLC患者作为实验组,年龄30～80岁,平均(67.6±11.1)岁。纳入标准:1)符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018)版》[7]中NSCLC的诊断标准;2)患者及家属同意参与本研究并签署知情同意书。排除标准:1)合并心、肝等脏器功能损伤者;2)合并其他恶性肿瘤者;3)伴有慢性炎性反应、免疫疾病者;4)不能积极配合随访者。另选取同期于杭州师范大学附属医院检查,一般资料与实验组患者相匹配的132例肺部良性病变患者作为对照组。本研究经杭州师范大学附属医院伦理委员会批准后执行(批准号:201905-1506)。

1.2 方法

1.2.1 资料收集:收集所有研究对象的年龄、性别、体质指数(body mass index,BMI)、吸烟史、高血压、糖尿病、高脂血症、其他疾病史(甲状腺结节、腰椎间盘突出等)、血肌酐、血红蛋白、中性粒细胞/淋巴细胞值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)及血小板计数等一般资料。并于杭州师范大学附属医院检验科收集血清 CA211 表达水平和NK 细胞水平数据。

1.2.2 血清CA211表达水平和NK细胞水平的测定:采集所有研究对象的空腹外周血3 mL,于3 500 r/min转速下离心5 min,收集上层血清置于无菌离心管中并于-80 ℃的冰箱中保存,待检。采用CA211检测试剂盒(厦门万泰凯瑞生物技术有限公司),利用Wan 200+全自动化学发光免疫分析仪(厦门万泰凯瑞生物技术有限公司)检测血清CA211表达水平。

采集所有研究对象的空腹外周血100 μL,与10 μL荧光抗体CD45/CD3/CD19/CD56混匀后于室温下避光染色15 min,随后加入300 μL红细胞裂解液,涡旋3 s后静置1 min,再加入100 μL中和缓冲液,涡旋混匀,最后加入500 μL鞘液,涡旋混匀,采用Navios型流式细胞仪(Beckman-Coulter公司)检测NK细胞数。

以血清CA211表达水平(5.60 ng/mL)、NK细胞数(200×106/L)的中位数为临界值,将NSCLC患者分为CA211低表达组(66例)、CA211高表达组(66例)、NK细胞低水平组(68例)及NK细胞高水平组(64例)。

1.2.3 随访:采用电话及门诊复查等方式对纳入研究的NSCLC患者进行1年随访,以患者复发或癌因死亡为随访终点,生存时间记录为术后日期至患者复发或癌因死亡时间或最终随访截止时间。本研究中患者随访率为100%。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般资料比较

两组年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史等一般资料差异无统计学意义,而实验组NLR值(3.93±0.79)高于对照组(2.90±0.42)(P<0.05)。

2.2 两组血清CA211表达水平和NK细胞数

实验组患者血清CA211表达水平高于对照组,而NK细胞数则低于对照组(P<0.05)(表1)。

表1 两组血清CA211表达水平和NK细胞数

2.3 血清CA211表达水平及NK细胞数相关性分析

实验组患者血清CA211表达水平与NK细胞数呈负相关(r=-0.405,P<0.001)(图1)。

图1 血清CA211表达水平及NK细胞数相关性分析Fig 1 Relationship between the expression level of serum CA211 and the number of NK cells

2.4 血清CA211表达水平、NK细胞数与NSCLC患者临床病理特征的关系

血清CA211表达及NK细胞数与年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、有无胸腔积液、有无心包积液及组织学类型与无关,而不同血清CA211表达水平和NK细胞数的患者淋巴结转移情况以及TNM分期存在性差异(P<0.05)(表2)。

表2 血清CA211表达水平、NK细胞数与NSCLC患者临床病理特征的关系

2.5 NSCLC患者血清CA211表达水平、NK细胞数与生存时间的关系

CA211低表达患者1年生存率(61/66,92.42%)高于CA211高表达患者(53/66,80.30%)(χ2=4.117,P<0.05),NK细胞高水平患者1年生存率(63/68,92.65%)高于NK细胞低水平患者(51/64,79.69%)(χ2=4.702,P<0.05)(图2,3)。

图2 NSCLC患者血清CA211表达水平与患者1年总生存率的关系Fig 2 Relationship between serum CA211 expression level and 1-year overall survival rate in NSCLC patients

图3 NSCLC患者血清NK细胞数与患者1年总生存率的关系Fig 3 Relationship between serum NK cell count and 1-year overall survival rate in NSCLC patients

2.6 多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素

淋巴结转移、TNM分期、CA211是影响NSCLC患者预后的危险因素(P<0.05),NK细胞数是NSCLC患者预后的保护因素(P<0.05)(表3)。

表3 多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素Table 3 Multivariate Cox regression analysis of prognostic factors in NSCLC patients

3 讨论

NSCLC是临床常见的肺癌类型,常发于老年人群,大多数患者确诊时已存在不同程度的转移,导致常规治疗方法效果并不理想,患者生存率较低[8]。因此寻找相关指标对NSCLC患者的预后进行预测,并及时施以干预措施具有重要意义。本研究探究了血清CA211表达水平及NK细胞数与NSCLC患者预后的相关性。

CA211是临床常见的肿瘤标志物,其表达水平与胰腺癌、胃癌等肿瘤疾病的发生密切相关[9]。本研究中,实验组患者血清CA211表达水平高于对照组,并且NLR值也高于对照组。这主要是由于CA211存在于肿瘤细胞胞质中,当肿瘤细胞发生溶解、破裂时,CA211会释放入血液,进而导致血清CA211表达水平的升高。本研究结果还显示,CA211低表达患者1年生存率高于CA211高表达患者。相关研究也显示,CA211≥5 ng/mL的非小细胞癌患者无进展生存时间短于CA211<5 ng/mL的患者[10]。以上结果均表明血清CA211表达水平与NSCLC的发生及患者预后状态密切相关。NLR值是反映机体炎性反应与免疫平衡的指标,NLR值升高表明该平衡趋向于肿瘤前的炎性反应,因此实验组NLR值高于对照组。

大量研究表明,肺癌患者的预后状态与机体免疫逃逸有关,而NK细胞作为机体免疫系统的屏障,在抗肿瘤免疫逃逸过程中发挥着重要作用[11],因此在诊断评估恶性肿瘤疾病时具有较高的稳定性。本研究结果显示,实验组患者NK细胞数低于对照组,并且NK细胞高水平患者1年生存率高于NK细胞低水平患者,推测是由于NK细胞能够与肿瘤细胞表面的活化或抑制体结合,起到杀伤肿瘤细胞、抑制细胞逃逸的作用,进而也会影响NSCLC患者的预后状态[12]。进一步分析NSCLC患者的临床病理特征,结果显示,淋巴结转移、TNM分期、CA211,及NK细胞是影响NSCLC患者预后的重要因素。

综上所述,NSCLC患者血清CA211表达水平、NK细胞数与临床病理特征及预后有密切联系,但CA211及NK细胞对NSCLC患者预后状态的具体影响机制还需进行深入探讨。