高效液相色谱法测定猪肉中8 种磺胺类药物的残留

◎ 宁舵华，赵 妍

（汉台区农产品质量安全监测检验中心，陕西 汉中 723000）

磺胺类药物属于合成源的广谱抗菌剂，它可以抑制微生物体内的二氢叶酸合成酶，使微生物二氢叶酸合成受阻，进而影响微生物核苷酸和核酸的合成，最终抑制微生物的生长和繁殖[1-2]。磺胺类药物具有使用方便、药物毒性低、抗菌谱较广、性质稳定以及价格低廉的优点，因此在动物养殖过程中被广泛应用，长期不合理使用磺胺类药物，会使动物产生耐药性，人们食用含磺胺类药物残留的动物性食品，会对身体产生危害。磺胺类药物极易吸附在土壤中，且难以降解，会污染水资源，破坏生态环境[3-4]。因此，对动物性食品中的磺胺类药物残留进行准确测定具有重要意义，通过对动物性食品中的磺胺类药物残留进行检测可以确保动物性食品的安全性，减少环境污染[5]。

磺胺类药物兼具酸碱两性[6]，易溶于有机溶剂，根据其理化特性，当前实验室检测磺胺类药物主要采用高效液相色谱法-紫外检测法和高效液相色谱串联质谱法，其中质谱检测法具有分离能力强、准确性高等特点，但是质谱法存在仪器成本高，操作复杂等问题，基层农产品检测实验室通常难以普及，而基层农产品检测实验室几乎都配置有高效液相色谱仪，结合本实验室相关配置情况，采用高效液相色谱法-紫外检测法来测定猪肉中磺胺类药物残留。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

样品：猪肉监督抽检样，于-20 ℃保存；乙酸乙酯、甲醇、正己烷（色谱纯，默克）；乙腈、甲酸（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；盐酸、氨水（优级纯，沪试国药集团化学有限公司）；固相萃取柱MCX 柱（沃特世）；0.2 μm 有机滤膜（天津市津腾实验室设备有限公司）；纯水（一级水）；磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲氧哒嗪和磺胺吡唑共8 种磺胺类药物标准物质（农业农村部环境保护科研监测所）。

1.2 仪器与设备

1260 安捷伦液相色谱仪（VWD，美国安捷伦公司）；AUW220D 型电子分析天平（日本岛津公司）；JY601 型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；RE-52AA 型旋转蒸发仪（上海贤德实验仪器有限公司）；Vm-01u（HYQ-3110）型旋涡振荡器（宁波新芝科技有限公司）；H1850R 型高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制

将浓度为100 μg·mL-1的8 种磺胺类药物标准溶液分别转移到10 mL 棕色容量瓶内，随后以乙腈为稀释剂进行定容操作，制得浓度为10 μg·mL-1的标准储备溶液，并在-18 ℃下冷冻保存。分别吸取8 种标准储备液各1 mL，放入10 mL 的棕色容量瓶中，用乙腈稀释定容，配制成浓度为1 μg·mL-1的标准混合液，-18 ℃冷冻保存。用0.1%甲酸乙腈溶液将标准混合液分别稀释成0.03 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.07 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1的标准工作溶液。

0.1% 甲酸溶液，吸取1 mL 甲酸溶液放置到1 000 mL 的容量瓶中，用纯水溶解稀释定容至1 000 mL；0.1%甲酸乙腈溶液，吸取配制好的0.1%甲酸溶液830 mL，放置到1 000 mL 容量瓶中，用乙腈溶解稀释定容至1 000 mL；0.1 mol·L-1盐酸溶液，吸取盐酸溶液0.83 mL，用纯水溶解稀释定容至100 mL；50%甲醇乙腈溶液，量取50 mL 甲醇溶液放置到100 mL 容量瓶中，用乙腈稀释溶解定容到100 mL；氨水洗脱液，吸取氨水5 mL 放置到100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀释定容至100 mL。

1.3.2 色谱分析条件

色谱柱型号：C18（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）；紫外检测器波长：270 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；流动相流速：1.0 mL·min-1，流动相组成见表1。

表1 流动相组成表

1.3.3 分析步骤

（1）提取。称取（5±0.05）g 猪肉样品，放置到100 mL 的离心管中，加入20 mL 乙酸乙酯，进行漩涡振荡，设置时长为2 min，振荡结束后，在4 000 r·min-1下离心5 min，离心结束后，取上清液放置到100 mL梨形瓶中，再次移取20 mL 乙酸乙酯加入离心管剩余残渣中，重复提取一次，把两次提取液合并放入100 mL梨形瓶中。

（2）净化。将4 mL 0.1 mol·L-1的盐酸溶液加入100 mL 梨形瓶中，并在旋转蒸发仪（设定温度40 ℃）下浓缩。当梨形瓶内的提取液量减少到3 mL 时，将剩余的液体转入10 mL离心管中。在离心管中加入2 mL 0.1 mol·L-1的盐酸溶液，用3 mL 正己烷冲洗梨形瓶，将洗液也倒入10 mL 离心管内。经过旋涡混合30 s 后，在3 000 r·min-1下离心5 min，弃去上层的正己烷。再用3 mL 正己烷冲洗梨形瓶，并将洗液转入10 mL 离心管，进行旋涡混合30 s。离心条件同上，弃去上层的正己烷，下层液体留作后续使用。以2 mL 甲醇和2 mL 0.1 mol·L-1盐酸溶液活化MCX 柱。将备用液通 过MCX 柱，流速控制在1 mL·min-1，用1 mL 0.1 mol·L-1盐酸溶液和2mL 50%甲醇乙腈溶液分别淋洗并吹干MCX 柱。使用4 mL 洗脱液收集MCX 柱中保留的磺胺类药物，再在40 ℃的氮气环境下吹干。在刻度离心管中加入1mL 0.1%甲酸乙腈溶液以溶解残留物，用0.45 μm 有机滤膜进行过滤，准备后续测试。

2 结果与分析

2.1 方法线性范围

把8 种磺胺类标准混合液分别配制成浓度为0.03 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.07μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.30 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1和0.50 μg·mL-1的系列标准工作溶液，用1.3.2 的色谱条件选取两组浓度范围进行分析测定。以标准工作溶液浓度为横坐标（μg·mL-1），以实验测得的峰面积为纵坐标，得到标准曲线线性回归方程，如表2 所示。8 种目标化合物的线性相关系数（R2）均大于0.99，表明8 种磺胺类药物在0.03～0.20 μg·mL-1、0.10～0.50 μg·mL-1内均呈良好的线性关系。

表2 化合物线性范围表

2.2 方法检出限测试

由2.1 得出结论，8 种磺胺类药物在0.03～0.20 μg·mL-1，药物浓度与峰面积有良好的线性关系。按信噪比（S/N）为3 确定本方法的检出限为10 μg·kg-1。

2.3 方法精密度测试和准确度测试

称取两组猪肉样品，每组6 份猪肉，每份猪肉样品在（5±0.05）g，向第一组猪肉样品中分别加入0.05 mL 1.0 μg·mL-1浓度的标准混合液，平行测定6 次，向第二组猪肉样品中分别加入0.175 mL 1.0 μg·mL-1的标准混合液，平行测定6 次，计算得到猪肉样品的回收率和相对标准偏差如表3 所示。相对标准偏差为1.3%～6.7%，回收率为61.00%～95.40%，符合《食品安全国家标准 动物性食品中13 种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法》（GB 29694—2013）中相对标准偏差≤15%、样品回收率在60%～120%的要求，说明本方法的精密度和准确度良好。

表3 方法精密度与加标回收率测定数据表

3 结论

本实验采用高效液相色谱法-紫外检测法，对猪肉样品中8 种磺胺类药物残留进行测定，通过选择适宜的样品处理方法，合理的仪器分析条件，能够准确检测出8 种磺胺类药物的残留。该方法的检出限为10 μg·kg-1，精密度在1.3%～6.7%，样品平均加标回收率在61.00%～95.40%。综上所述，该分析方法适用于猪肉样品中8 种磺胺类药物残留的同步检测。