系统性红斑狼疮患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1与白细胞介素-17的分析及其临床意义

吴爱瑜 马小美 张子渺 田畔 赖勤 余莲

【摘 要】目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1（Pin1）活性的表达与细胞因子白细胞介素-17（IL-17）水平相关性及其临床意义。方法：选取98例SLE患者，其中42例为SLE初治患者，另选43例健康體检者为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象入组时及98例SLE患者治疗后3个月血清中Pin1、IL-17水平，分析98例SLE患者血清Pin1水平变化及与细胞因子IL-17、SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分、实验室指标的相关性，分析

42例SLE患者初治时、治疗后3个月时其水平变化及意义。结果：①SLE稳定组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组（H = 28.913，P < 0.05），SLE活动组外周血的Pin1表达水平明显高于SLE稳定组（H = 31.738，P < 0.05）。②SLE患者Pin1与IL-17、SLEDAI评分呈正相关（r = 0.640，P < 0.05；r = 0.461，P < 0.05），与抗ds-DNA抗体、C反应蛋白、红细胞沉降率无明显相关性。③SLE初治组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组（H = 55.568，P < 0.05），SLE初治组治疗后3个月的Pin1表达水平较治疗前下降（H = 28.136，P < 0.05）。④血清Pin1水平在有肾脏损害的SLE患者表达增高，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：SLE患者外周血Pin1过表达，IL-17增高且与其呈正相关，经过治疗能显著降低Pin1活性，降低IL-17细胞因子水平，抑制Pin1蛋白表达，可能会延缓SLE的进展，Pin1抑制剂可能成为SLE治疗的新靶点之一。

【关键词】 系统性红斑狼疮；肽基脯氨酰顺反异构酶1；白细胞介素-17；酶联免疫吸附测定

Analysis and Clinical Significance of Pin1 and IL-17 in Peripheral Blood of Patients with Systemic Lupus Erythematosus

WU Ai-yu，MA Xiao-mei，ZHANG Zi-miao，TIAN Pan，LAI Qin，YU Lian

【ABSTRACT】Objective：To explore the correlation between the expression of Pin1 activity and cytokine interleukin-17（IL-17）levels in peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus（SLE）and its clinical significance.Methods：Ninety-eight SLE patients were selected，of which 42 cases were newly treated SLE patients，and another 43 healthy examinees were selected as the healthy control group.Enzyme Linked Immunosorbent Assaywas used to detect the levels of Pin1 and IL-17 in the serum of all study subjects at enrollment and 3 months after treatment in 98 SLE patients.The changes in serum Pin1 levels in 98 SLE patients and their correlation with cytokine IL-17，SLE disease activity index（SLEDAI）score，and laboratory indicators were analyzed.The changes and significance of these levels in 42 SLE patients at initial treatment and 3 months after treatment were also analyzed.Results：①The expression level of Pin1 in peripheral blood of the SLE stable group was significantly higher than that of the healthy control group（H = 28.913，P < 0.05），and the expression level of Pin1 in perpheral blood of the SLE active group was significantly higher than that in the SLE stable group（H = 31.738，P < 0.05）.②Pin1 is positively correlated with IL-17 and SLEDAI scores in SLE patients（r = 0.640，P < 0.05;r = 0.461，P < 0.05），but not significantly correlated with anti ds-DNA antibodies，C-reactive protein，and erythrocyte sedimentation rate.③The expression level of Pin1 in peripheral bloodof the SLE initial treatment group was significantly higher than that of the healthy control group（H = 55.568，P < 0.05），and the expression level of Pin1 in the SLE initial treatment group decreased after 3 months' treatmentcompared to before treatment（H = 28.136，P < 0.05）.④The expression of serum Pin1 level increased in SLEpatients with renal damage，and the difference is statistically significant（P < 0.05）.Conclusion：Pin1 in peripheral blood is overexpressed in SLE patients，and IL-17 is increased and positively correlated with it.Treatment can significantly reduce Pin1 activity，lower IL-17 cytokine levels，and inhibit Pin1 protein expression，which may delay the progression of SLE.Pin1 inhibitors may become one of the new targets for SLE treatment.

【Keywords】 systemic lupus erythematosus;Pin 1;IL-17;Enzyme Linked Immunosorbent Assay

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，

SLE）是一种以多种致病性自身抗体和大量免疫复合物沉积，介导器官、组织损伤的系统性自身免疫性疾病。其发病机制复杂，主要为免疫系统调节异常，如果诊治不及时或疾病控制不佳，将导致不可逆的组织、脏器损害，甚至死亡［1-2］。目前，临床上普遍使用糖皮质激素、抗疟药和免疫抑制剂等治疗，但部分患者治疗反应欠佳，长期完全缓解率较低，且有较多的不良反应。近年来，随着对SLE发病机制的认识，出现了一些针对B细胞的生物靶向治疗药物，如抗CD20单抗利妥昔单抗、B淋巴细胞刺激因子抑制剂贝利尤单抗等［3］，因价格昂贵，患者常常难以承受。寻找新的有效且价廉的靶向治疗药物仍是国内外学者关注的热点。肽基脯氨酰顺反异构酶1（Pin1）可使多种免疫细胞活化，参与细胞信号通路的活化，促进多种细胞因子的释放，发挥促炎作用，从而调节免疫反应，在自身免疫性疾病发病过程中起重要作用［4-5］。但有关Pin1在SLE发生、发展中作用的研究报告较少。本研究采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测SLE患者及健康对照者血清中Pin1水平，探讨其与细胞因子白细胞介素-17（IL-17）的相关性及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年12月至2022年4月

在福建医科大学附属龙岩第一医院就诊的98例SLE患者为SLE组，其中42例初治SLE患者为SLE初治疗组，所有患者均符合1997年美国风湿病学会（ACR）修订的SLE分类标准［6］。其中男10例，女88例；年龄18～68岁，中位数36岁；病程最短7个月，最长23年，中位数4年。同时排除肿瘤、炎症及其他自身免疫性疾病。另选取同期健康志愿者43例为健康对照组，其中男5例，女38例；年龄19～48岁，中位数38岁。2组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P > 0.5），具有可比性。本研究经福建医科大学附属龙岩第一医院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂 Pin1 ELISA试剂盒（武汉华美生物有限公司，批号CSB-E11308h）；IL-17 ELISA试剂盒（美国eBioscience，批号900-TM234）。

1.3 检测血清Pin1、IL-17水平 SLE患者和健康志愿者均晨起空腹，用肝素抗凝管采集静脉血5 mL，颠倒混匀。待其析出血清，抽取血清置于1.5 mL EP管中，室温静置30 min，置于离心机以3000 r·min-1离心15 min，离心半径10 cm，然后吸取上层清液。采用ELISA法检测血清Pin1、IL-17水平，按照Pin1、IL-17试剂盒说明书进行检测。

1.4 记录SLE患者临床症状，测定相关实验室指标及进行活动度评估 记录98例SLE患者治疗后3个月的皮肤、肾脏、关节、精神神经等相关临床症状。由福建医科大学附属龙岩第一医院检验科检测抗ds-DNA抗体、抗核抗体、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）等相关实验室指标。按照加拿大Toronto大学制定的SLE疾病活动度指数（SLEDAI）进行评分。SLEDAI < 5分为疾病稳定，SLEDAI≥5分为疾病活动。将98例SLE患者分为稳定组41例，活动组57例。

1.5 统计学方法 采用SPSS 25.0软件进行统计分析。计量资料符合正态分布以表示，采用

t检验；不符合正态分布以中位数和四分位数间距［M（P25，P75）］表示，采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis秩和检验；采用Pearson相关性分析直线相关分析进行相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 SLE活动组、稳定组及健康对照组外周血Pin1表达水平比较 SLE稳定组外周血Pin1

［8.93（6.14，15.41） ng·mL-1］表达水平明显高于健康对照组［6.12（3.63，9.64）ng·mL-1］，差异有统计学意义（H = 28.913，P < 0.05）；与SLE稳定组比较，SLE活动组外周血Pin1［16.37（11.48，27.34）ng·mL-1］表达水平上升（H = 31.738，P < 0.05）。

2.2 SLE组外周血Pin1表达与IL-17、SLEDAI评分、实验室指标的相关性 98例SLE患者的IL-17 36.19（19.72，70.93） pg·mL-1、SLEDAI评分10（3，12）分、抗ds-DNA抗体134.5（34.4，28.6）IU·mL-1、ESR 30（14，56） mm·h-1、CRP 3.2（0.8，15.8）mg·L-1。结果显示，Pin1与IL-17、SLEDAI评分呈正相关（r = 0.640，P < 0.05；r = 0.461，P < 0.05），而與抗ds-DNA抗体、CRP、ESR无明显相关性（P ﹥ 0.05）。见表1。

2.3 SLE初治组入组时、治疗后3个月及健康对照组外周血Pin1表达水平比较 SLE初治组入组时外周血Pin1［14.23（11.21，24.28）ng·mL-1］表达水平明显高于健康对照组［6.14（3.57，9.63）ng·mL-1］，差异有统计学意义（H = 55.568，P < 0.05）；与入组时比较，SLE初治组治疗后3个月外周血Pin1［9.18（6.62，14.93）ng·mL-1］表达水平总体下降（H = 28.136，P < 0.05）。

2.4 外周血Pin1水平與相关临床表现的关系 在98例SLE患者中，肾脏损伤者占54.08%

（53例），皮肤损害者占48.98%（48例），关节损伤者占34.69%（34例）。在有肾脏损害的SLE患者中，血清Pin1水平明显增高，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

3 讨 论

Pin1是肽基脯氨酰顺反异构酶的一种亚型，其基因定位于19p13，由163个氨基酸残基组成，相对分子质量为18 KD。Pin1包含2个结构功能域，Pin1底物具有高度特异性，能特异性结合并催化pSer/Thr-Pro发生顺反异构，从而使底物蛋白的稳定性和生理功能受影响［7］。Pin1作用于p56亚基的特定基序nThr-254-Pro，使其磷酸化，以阻断核转录因子-κB（NF-κB）与其抑制剂的结合，进而增强NF-κB的活性，促进多种免疫分子如肿瘤坏死因子-α、环氧化酶-2、前列腺素的分泌，引起免疫反应的发生［8-10］。Pin1还是白细胞介素1受体关联激酶1（IRAK1）的调节器，在Toll样受体信号转导及Ⅰ型干扰素介导的先天及后天免疫中发挥重要作用［11］。SLE外周血单个核细胞中的NF-κB、IRAK1明显活化［12-14］。本研究发现，SLE外周血Pin1表达水平在SLE活动组明显高于SLE稳定组，SLE稳定组明显高于健康对照组，Pin1与SLEDAI评分呈正相关。且SLE初治组外周血Pin1表达水平明显高于健康对照组，SLE初治组治疗后3个月组的Pin1活性表达水平较入组时总体下降，表明SLE患者Pin1活性的过表达可能参与疾病的发生、发展过程，且可能参与多条通路、多种炎症因子的互相作用。

辅助性T细胞17（Th17）是一种独特的Th亚群，主要分泌IL-17。IL-17是一类有强致炎作用的炎性细胞因子，在人类中至少存在6个家族成员，均为IL-17的同源分子。IL-17在组织中可以诱导基质细胞产生集落刺激因子、趋化因子等炎性细胞因子［15］，招募白细胞，从而建立获得性免疫与先天性免疫之间的联系。其参加了许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生、发展，如类风湿关节炎等［16］。多数研究认为，IL-17水平在SLE患者外周血中明显升高，且与SLEDAI评分呈显著正相关［17-18］。全反式维甲酸（ATRA）作为Pin1新型特异性抑制剂，可以选择性地靶向抑制Pin1并降解其活性。WEI等［19］研究表明，ATRA通过对Pin1的抑制显著降低了SLE中Th17细胞的分化，且Pin1敲除也可以显著降低SLE易发小鼠模型中血清IL-17水平。多项研究表明，IRAK1的表达与Th17/IL-17A呈正相关，IRAK1抑制减弱Th17分化，减少IL-17A的产生［14，20］。本研究结果也显示，初诊SLE经过治疗后，Pin1水平下降，且在SLE患者中，Pin1与IL-17呈正相关，与WEI等［19］报道一致，说明Pin1在参与SLE疾病的发生、发展中与IL-17有关。但抑制Pin1活性减少了IL-17的表达，是否与IRAK1通路相关，有待进一步验证。

狼疮性肾炎是SLE常见且严重的并发症之一，肾脏受累的比例约为50%［21］，是本病主要致残致死的并发症。通过药物ATRA对Pin1的抑制或Pin1敲除可有效抑制B6.lpr小鼠肾小球中免疫球蛋白G、补体C3、IL-17和单核/巨噬细胞的沉积，从而减少肾小球肾炎，延长小鼠寿命［19］。本研究显示有肾脏损害的SLE患者血清中Pin1明显升高，Pin1可能在某种程度上参与狼疮性肾炎的发生、发展。

SLE患者外周血Pin1过表达，可能通过多条通路参与SLE的发生、发展，其确切机制尚不明确。IL-17增高与Pin1呈正相关，经过治疗能显著降低Pin1活性，减少IL-17细胞因子的表达。因此，抑制Pin1蛋白表达可能会延缓SLE的进展，Pin1抑制剂可能成为SLE治疗的新靶点之一。

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收稿日期：2023-06-12；修回日期：2023-07-23