EB病毒抗体联合检测在临沂地区鼻咽癌筛查中的应用研究
2024-01-11王艳丽李钦秦娜娜孙雨浩魏健
王艳丽,李钦,秦娜娜,孙雨浩,魏健
(1.青岛大学医学部 临床医学系,山东 青岛 266071;2.临沂市人民医院 耳鼻咽喉头颈外科,山东 临沂 276600;3.潍坊医学院 临床医学系,山东 潍坊 262500)
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是发生在鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤,其发病位置隐蔽、恶性程度高、常呈浸润性生长、易发生早期转移,被发现时往往已经处于中晚期。其中15~45岁年龄组5年生存率为72%,而65~74岁年龄组仅为36%[1],因此,早期发现是提高NPC患者生存率的关键。已有大量研究报道证实EB病毒与NPC的发生密切相关[2], EB病毒血清学抗体检测结果可为NPC临床诊断、预后及随访提供理论依据[3-5]。本研究通过酶联免疫法检测临沂地区不同人群EB病毒相关血清标志物Rta蛋白IgG抗体(Rta protein IgG antibody,Rta/lgG)、衣壳抗原IgA抗体(capsid antigen IgA antibody,VCA/lgA)、早期抗原IgA抗体(early antigen IgA antibody,EA/IgA)水平,旨在探讨3种抗体联合检测在NPC筛查中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 资料
选取2019年10月—2022年10月在临沂市人民医院健康管理中心的体检人群15 873例研究对象为体检组,其中男10 256例,女5 617例,年龄9~96岁,平均年龄50.36岁;同期因鼻塞、涕中带血、耳闷、颈部肿物等鼻咽部相关症状而就诊于本院耳鼻咽喉科的1 800例患者为筛查组,其中男962例,女838例,年龄2~92岁,平均年龄46.35岁;同期就诊于本院并经病理确诊为NPC的48例患者为确诊组,其中男35例,女14例,年龄8~83岁,平均年龄50.13岁。3组年龄整体呈正态分布。
1.2 方法
采集每位受试对象静脉血3~5 mL,用ELISA法检测Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3项抗体,均采用同昕生物技术(北京)有限公司的试剂盒并严格按说明书操作。3项抗体Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA的诊断界值(cut-off值)分别为0.54、0.22、0.40,标本吸光度大于诊断界值时为阳性。根据检测结果绘制受试者工作曲线(receiver operating curve,ROC)。
1.3 统计学分析
采用SPSS 26.0统计软件进行统计学分析,Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体阳性率的比较行χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。根据检测结果绘制ROC,根据灵敏度、特异度、Youden指数、曲线下面积等评估3种抗体的NPC诊断效能。
2 结果
2.1 3组间EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体阳性率比较
体检组、筛查组、确诊组3组Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA阳性率结果显示,确诊组的Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3项抗体阳性率明显高于筛查组和体检组,差异具有统计学意义(χ2分别为259.796、185.569、373.484,P均<0.01);对以上3组抗体阳性率进行两组间比较:确诊组高于筛查组,差异均具有统计学意义(χ2分别为95.918、78.029、136.589,P均<0.01);确诊组高于体检组,差异均具有统计学意义(χ2分别为198.823、132.894、297.787,P均<0.01);筛查组要高于体检组,差异具有统计学意义(χ2分别为76.61、59.850、101.511,P均<0.01)。在总体研究中,VCA/IgA抗体阳性率在筛查组和体检组高于Rta/IgG、EA/IgA(χ2分别为67.823、780.030,P均<0.01),在确诊组中VCA/IgA抗体阳性率与EA/IgA持平。见表1。
表1 3组患者EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体阳性率 [例(%)]
2.2 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体单项检测结果分析
研究发现,确诊组48例患者中EB病毒抗体多为2项或3项阳性,只有2例患者表现为3项抗体全阴性,其中1例为8岁儿童,另1例为经放射治疗后37岁女性患者。在确诊组中,VCA/IgA、EA/IgA检测为阳性例数均为41例,高于Rta/IgG(35例)阳性例数。在筛查组及体检组中VCA/IgA抗体阳性例数,高于EA/IgA、Rta/IgG。具体数据见表2。
表2 3组患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体单项检测结果统计 (例)
2.3 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体联合检测结果分析
将Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3项抗体进行联合检测。串联检测标准:EA和VCA和Rta均为阳性才判断受试者为阳性患者;并联检测标准:Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1项为阳性时就判断受试者为阳性患者。在进行串联检测时筛查组阴性例数(1 734例)多于3项抗体单独检测例数(1 491、1 313、1 481例),体检组阴性例数(15 784例)亦多于3项抗体单独检测例数(14 231、12 803、14 292例);并联检测时确诊组阳性例数(46例)多于3项抗体单独检测时阳性例数(35、41、41例),筛查组阳性例数(783例)稍多于3项抗体单独检测时阳性例数(309、487、319例),体检组阳性例数(5 196例)远多于3项抗体单独检测时阳性例数(1 642、3 070、1 581例)。见表2、3。
表3 3组患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体联合检测结果分析 (例)
2.4 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体诊断价值评估
Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体诊断价值评估结果显示,VCA/IgA、EA/IgA灵敏度相当,为85.41%;EA/IgA特异度要高于VCA/IgA,为89.24%;Rta/IgG特异度界于两者之间。当VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG此3项抗体进行联合检测时灵敏度及特异度均得到提高,并联联合检测时灵敏度可达95.83%,串联联合检测时特异度达99.12%,正确度达99.01%,阳性预测值高于3项单独检测,而阴性预测值无明显差异。见表4。
表4 EB病毒3种抗体诊断价值评估 [%(例)]
2.5 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体ROC分析
将总体Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3项及联合检测结果绘制ROC。结果显示,由ROC获得的曲线下面积分别是0.846、0.901、0.916、0.949;Youden指数分别为0.619、0.653、0.746、0.807;Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3项抗体分别对应的诊断界值(cut-off值)分别为0.54、0.22、0.40。由此可见,VCA/IgA、EA/IgA诊断效果相当,差异无统计学意义(Z=0.632,P=0.527),3项抗体联合检测诊断效能明显高于Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA任何一项单独检测,差异具有统计学意义(Z值分别为3.277、2.237、2.676,P均<0.05)。见图1。
图1 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗体联合检测的ROC比较
3 讨论
EB病毒是疱疹病毒科γ亚科成员,其编码约80个蛋白质,拥有众多抗原表位,主要通过潜伏感染和裂解感染两种形式将细胞感染。当EB病毒从潜伏感染变为裂解感染时,就开始进入立即早期,其可以促使立即早期基因BRLF1、BZLFl产物Rta的表达,然后引发一系列级联反应,进入裂解周期。而当病毒处于裂解性感染时,感染周期中早期抗原EA、衣壳抗原 VCA得到表达[6]。近年研究发现,EB病毒相关血清学标志物Rta/IgG、EA/IgA、VCA/IgA抗体可作为NPC筛查、诊断及预测的新指标[7-11]。目前对EB病毒相关抗体的研究主要集中于福建、广东、广西等NPC高发地区,尚无临沂地区此类大样本研究数据。本研究样本量大,使研究数据更具代表性,实验结果更具说服力,可以更好地反映临沂地区不同人群EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3项抗体水平。
本研究结果显示在体检组中VCA/IgA抗体阳性率为19.30%,高于Rta/IgG(10.34%)、EA/IgA(9.96%),说明VCA/IgA抗体在体检人群中阳性检出率高于Rta/IgG、EA/IgA,这与王俊霞等[11]研究的郑州市体检人群的检测结果一致,张晗等[12]对北京地区体检人群的研究也证实了这一点。但是临沂地区抗体阳性率总体高于北京和郑州,分析其原因可能与地域间的差异有关。因此,在统一检验标准的同时需要根据当地人群抗体情况建立适合当地人群的筛查方法,周勇等[13]研究证实了这一点。本研究中增加了筛查组的对照,在筛查组中VCA/IgA抗体阳性率为27.06%,高于Rta/IgG(17.17%)、EA/IgA(17.72%),确诊组VCA/IgA抗体阳性率为85.41%,与EA/IgA(85.41%)持平,均高于Rta/IgG(72.90%),这与张晓琍等[3]研究结果稍显不同,可能与确诊组样本量相对较少有关。3种抗体联合检测,串联时(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA均为阳性才判断为受试者为阳性)具有较高的特异性(99.12%),并联时(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1项为阳性时就判断受试者为阳性)具有较高的灵敏度(95.83%),均高于3项抗体单独检测。因此,联合检测也提高了阳性预测值及准确度,这与唐浩能等[7,9,14]研究结果一致。在分析ROC时发现EA/IgA、VCA/IgA曲线下面积分别为0.916、0.901,根据ROC分析,EA/IgA、VCA/IgA对NPC的诊断价值非常高,而3项联合检测时AUC为0.949,高于单项检测,具有更高的诊断价值。
本研究结果还发现,虽然EA/IgA的特异性最高(89.24%),但仍低于蚁雪涵等[15]研究结果,分析其原因可能与地域间差异及NPC组样本量有关。而Rta/IgG的阳性率为72.91%,稍低于唐浩能等[7]的研究结果,这可能与所采用的诊断临界值差异有关。在NPC确诊组中,有2例患者表现为3项抗体全阴性,其中1例为8岁儿童,另1例为经放射治疗后37岁女性患者。本研究中儿童NPC患者较少,尚无法推断年龄是否为影响EB病毒抗体水平的因素。黄小颜等[16]已研究证实NPC患者体内VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗体水平会随放射治疗时间延长而逐渐降低,这可以用来解释上述1例经放射治疗后的患者3项抗体均呈阴性的原因。在已确诊的48例患者中,有1例是在健康体检时检测出EB 病毒3项抗体均呈阳性,进一步行鼻咽镜及影像学检查,并随访观察后经病理确诊为NPC。因此对于EB病毒血清学检测呈现抗体阳性,尤其3项抗体皆阳性者,应高度警惕NPC的可能,并定期随访。
综上所述,临沂地区NPC发病与EB病毒密切相关,通过酶联免疫法进行EB病VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗体联合检测可提高NPC诊断的灵敏度及特异度,提高NPC检出率。然而,临沂地区属于NPC低发区,确诊组样本量相对较少,所以确诊组数据还需进一步丰富。通过数据比对,进一步发现其规律,更有利于临沂地区NPC的早防早治。