基于IC与UPLC的石膏-知母组合物指纹图谱及多指标成分测定△

田甜，徐杰，李美洲，周颖欣，刘权震，邓成程，刘燎原，沈斌斌

广东一方制药有限公司/广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244

石膏性大寒，味甘、辛，生用除烦止渴、清热泻火力强；知母性寒，味苦、甘，生用滋阴润燥、清热泻火力强[1]。石膏-知母药对配伍最早源于《伤寒论》的白虎汤，临床上常相须为用，两者配伍可增强清热泻火、除烦、生津止渴的功效，是治疗伤寒阳明病热症、气分热盛证的常用药对[2-5]。现代药理学研究表明，石膏和知母配伍能增强解热、清胃热的作用[6-7]。石膏主要成分为含水硫酸钙（CaSO4·2H2O），也含有Al2O3、CaO、MgO、SiO2、Fe2O3、SO3、K2O等无机成分[8]。知母主要含有皂苷、双苯吡酮、生物碱、氨基酸、挥发油等类成分[9]。有研究报道，石膏与知母配伍能显著增加Ca2+浓度，促进新芒果苷的溶出[10-11]。对中药方剂数据库[12]所含方剂进行检索，发现有182个处方中含有石膏-知母药对，如白虎汤、辛夷清肺饮、化斑汤、玉女煎、清瘟败毒饮等。药对作为最简单的中药配伍组合，是连接单味药与经典复方的重要桥梁，在临床疗效上发挥着巨大作用。在现代制剂过程中，通过石膏、知母共煎提取，不仅可以减轻知母喷雾干燥过程中的粘机问题，也可使石膏中的Ca2+、Mg2+、Na+、K+等离子吸附在知母提取物上并转移至成品中，减少物料流转过程中固形物的损耗，保证临床用药剂量的准确[13-16]。为探究石膏-知母药对中无机元素及有机化合物的组成情况，本研究采用离子色谱法（IC）、超高效液相色谱-紫外检测法（UPLC-UV）、超高效液相色谱-蒸发光散射检测法（UPLC-ELSD）对石膏-知母组合物进行定性和定量分析，以期为石膏-知母药对的质量评价和物质基础研究提供参考。

1 材料

1.1 仪器

Dionex ICS-6000型离子色谱仪[赛默飞世尔（中国）科技有限公司]；H-Class 型超高液相色谱仪、Arc 型超高液相色谱仪（美国沃特世公司）；Alltech 6000型蒸发光散射检测器[奥泰科技（中国）有限公司]；ME203E型万分之一分析天平、XP26型百万分之一天平（美国Mettler-Toledo 公司）；Milli-Q 型超纯水系统（Merck股份有限公司）。

1.2 试药

对照品芒果苷（批号：111607-201704，纯度：98.1%）、知母皂苷BⅡ（批号：111839-202107，纯度：95.4%），知母对照药材（批号：121070-201806）均购自中国食品药品检定研究院；对照品新芒果苷（批号：DST201128-017，纯度：99.01%，成都乐美天医药科技有限公司）；对照品异芒果苷（批号：CFS202002，纯度：98%，武汉天植生物技术有限公司）；硫酸盐（批号：BWZ6783-2016）、钙单元素溶液标准物质[批号：GBW（E）080118]、钠单元素溶液标准物质[批号：GBW（E）080526]、钾单元素溶液标准物质[批号：GBW（E）083296]、镁单元素溶液标准物质[批号：GBW（E）083298]均购自北京北方伟业计量技术研究院，质量浓度均为1000 μg·mL-1；色谱纯甲酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）；色谱纯甲醇、乙腈（Merck 股份有限公司）；优级纯甲烷磺酸、无水碳酸钠、碳酸氢钠[阿拉丁试剂（上海）有限公司]；水为自制超纯水。

12 批石膏、知母药材均经广东一方制药有限公司孙冬梅主任中药师鉴定，分别为硫酸盐类矿物石膏族石膏、百合科植物知母Anemarrhena asphodeloidesBge.的干燥根茎，药材信息见表1。

表1 石膏、知母样品信息

2 方法与结果

2.1 样品制备

2.1.1 组合物制备 取石膏、知母药材，分别按照《中华人民共和国药典》2020 年版[1]石膏、知母项下炮制方法炮制，得到石膏饮片、知母饮片。分别称取石膏饮片、知母饮片（质量比为1∶1）适量，加水煎煮2 次（石膏先煎），滤过，合并2 次煎液，减压浓缩，干燥，得石膏-知母组合物（编号S1～S12）。

2.1.2 单煎混合样品 取石膏饮片适量，加水煎煮2 次，滤过，合并煎液，减压浓缩，干燥，得石膏提取物。取知母饮片适量，加水煎煮2 次，滤过，合并煎液，减压浓缩，干燥，得知母提取物。按公式（1）计算石膏、知母出膏率。根据出膏率情况，按石膏-知母（1∶1）称取石膏、知母单煎提取物适量，混匀，得石膏-知母药对单煎混合样品。

2.2 指纹图谱

2.2.1 IC指纹图谱

2.2.1.1 色谱条件 IonPac CG12A保护柱（50 mm×4 mm，8 μm）、IonPac CS12A 分析柱（250 mm×4 mm，8 μm）；CSRS 4 mm 抑制器，抑制电流为47 mA；淋洗液为20 mmol·L-1甲烷磺酸水溶液，流速为0.8 mL·min-1；电导检测器，检测池温度为35 ℃，检测器灵敏度为5 μs·cm-1；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。

2.2.1.2 对照品溶液的制备 分别取钠、钾、镁、钙单元素溶液标准物质0.15、1.20、0.15、0.30 mg，精密称定，加入纯水30 mL，制成Na+、K+、Mg2+、Ca2+质量浓度为分别5、40、5、10 μg·mL-1的混合对照品溶液，即得。

2.2.1.3 供试品溶液的制备 取石膏-知母组合物，研细，精密称取约0.15 g，置于塑料量瓶中，精密量取0.54%甲烷磺酸水溶液30 mL 加入量瓶中，用涡旋振荡仪充分振摇使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.1.4 方法学考察 精密度试验：分别精密吸取2.2.1.3 项下S7 供试品溶液，按2.2.1.1 项下色谱条件连续进行6 次样品测定，选择K+为参照峰，结果显示，IC 指纹图谱中各共有色谱峰相对保留时间的RSD 为0.01%～0.05%，相对峰面积RSD 为0.58%～0.72%，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取S7供试品6份，分别按2.2.1.3项下制备方法平行制备供试品溶液，按照2.2.1.1项下色谱条件进行样品检测，选择K+作为参照峰，结果显示，IC 指纹图谱中各共有色谱峰的相对保留时间的RSD 为0.04%～0.05%，相对峰面积的RSD为0.99%～2.72%，表明该供试品溶液的制备方法重复性良好。

稳定性试验：取S7供试品溶液，分别按2.2.1.1项下色谱条件，在0、2、4、8、12、24 h 进行供试品检测，选择K+作为参照峰，结果显示，IC指纹图谱中各共有色谱峰的相对保留时间的RSD为0.02%～0.04%，相对峰面积的RSD 为0.42%～2.57%，表明按照上述方法制得的供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.2.1.5 指纹图谱的建立 取12 批石膏-知母组合物样品，按2.2.1.3 项下方法制备供试品溶液，按照2.2.1.1 项下色谱条件进行测定，记录得到IC 色谱图。运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012 版），以S1 供试品色谱图为参照图谱，选择中位数法分别生成对照图谱，时间窗宽度设置为0.1 min，采用多点校正法进行Mark 峰匹配，建立12 批石膏-知母组合物的IC 叠加指纹图谱，生成对应的IC 对照指纹图谱R1（图1）。IC 指纹图谱中共标定5 个共有峰（图2），经与对照品溶液比对，确定1 号峰为Na+、3 号峰为K+、4 号峰为Mg2+、5 号峰为Ca2+。以K+为指纹图谱参照峰，计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表2、表3。结果显示，12 批石膏-知母组合物样品IC 指纹图谱各色谱峰相对保留时间RSD 为0～0.56%，表明各色谱峰出峰时间稳定，IC 指纹图谱重复性好，但各色谱峰相对峰面积RSD 存在较大差异，表明不同批次石膏-知母组合物所含离子含量存在一定差异。

图1 12 批石膏-知母组合物样品IC 指纹图谱及对照指纹图谱

图2 石膏-知母组合物样品IC指纹图谱

表2 石膏-知母组合物样品IC 指纹图谱色谱峰相对保留时间

表3 石膏-知母组合物样品IC指纹图谱各色谱峰相对峰面积

2.2.1.6 指纹图谱相似度评价 采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012 版），以对照指纹图谱R1 为参照，对12 批石膏-知母组合物指纹图谱进行整体相似度评价。结果显示，12批石膏-知母组合物供试品的IC 指纹图谱相似度均为1.000，大于0.963，与对照图谱具有较好的一致性，表明石膏-知母组合物各批间质量均一稳定。

2.2.2 UPLC指纹图谱

2.2.2.1 色谱条件 Waters HSS T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈∶甲醇（3∶1，B）；梯度洗脱（0～3 min，0%B；3～7 min，0%～4%B；7～14 min，4%～7%B；14～20 min，7%～13%B；20～27 min，13%～16%B；27～28 min，16%～20%B；28～34 min，20%～25%B；34～42 min，25%～32%B；42～44 min，32%～60%B；44～54 min，60%～70%B；54～57 min，70%～90%B；57～59 min，90%～0%B；59～65 min，0%B）；柱温为30 ℃；流速为0.25 mL·min-1；检测波长为275 nm；进样量为1 μL。

2.2.2.2 对照品溶液的制备 分别称取新芒果苷、芒果苷、异芒果苷对照品约5、10、1 mg，精密称定，精密加入70%甲醇25 mL，制成质量浓度为199.010、392.989、41.895 µg·mL-1的混合对照品溶液，即得。

2.2.2.3 供试品溶液的制备 取石膏-知母组合物，研细，精密称取约1.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密量取70%甲醇50 mL 置于锥形瓶中，称定质量，密塞，超声处理60 min，取出，放凉至室温，再称定质量，用溶解溶剂补足损失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.4 方法学考察 精密度试验：分别精密吸取2.2.2.3 项下S7 供试品溶液，按2.2.2.1 项下色谱条件连续进行6 次样品测定，选择芒果苷作为参照峰，结果显示，UPLC指纹图谱中各共有色谱峰的相对保留时间RSD为0.02%～0.14%，相对峰面积RSD为0.16%～3.17%，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取S7供试品6份，分别按2.2.2.3项下方法平行制备供试品溶液，按照2.2.2.1项下色谱条件进行样品检测，选择芒果苷作为参照峰，结果显示，UPLC指纹图谱中共有色谱峰的相对保留时间的RSD 为0.01%～0.17%，相对峰面积的RSD 为1.02%～3.41%，表明该供试品溶液的制备方法重复性良好。

稳定性试验：取S7供试品溶液，分别按2.2.2.1项下色谱条件在0、2、4、8、12、24 h 进行供试品检测，选择芒果苷作为UPLC 指纹图谱的参照峰，结果显示，UPLC指纹图谱中各共有色谱峰的相对保留时间的RSD为0.01%～0.11%，相对峰面积的RSD为0.59%～2.46%，表明按照上述方法制得的供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.2.5 UPLC指纹图谱的建立 取12批石膏-知母组合物样品，分别按2.2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.2.1项下色谱条件进行供试品测定，得到UPLC 色谱图。运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012 版），以S1 供试品色谱图为参照图谱，选择中位数法分别生成对照图谱，时间窗宽度设置为0.1 min，采用多点校正法进行Mark 峰匹配，建立12 批石膏-知母组合物的UPLC 叠加指纹图谱，生成对应的UPLC对照指纹图谱R2（图3）。UPLC指纹图谱中共标定15个共有峰（图4），经与对照品溶液比对，确定7 号峰为新芒果苷、10号峰为芒果苷、11号峰为异芒果苷。以芒果苷为指纹图谱参照峰，计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表4、表5。结果显示，12批石膏-知母组合物样品各色谱峰相对保留时间RSD 为0～1.54%，表明各色谱峰出峰时间稳定，UPLC指纹图谱重复性好，但各色谱峰相对峰面积RSD 存在较大差异，表明不同批次石膏-知母组合物所含化学成分存在一定差异。

图3 12批石膏-知母组合物样品UPLC指纹图谱及对照指纹图谱

图4 石膏-知母组合物样品UPLC指纹图谱

表4 石膏-知母组合物样品UPLC指纹图谱各色谱峰相对保留时间

表5 石膏-知母组合物样品UPLC指纹图谱各色谱峰相对峰面积

2.2.2.6 指纹图谱相似度评价 采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012 版），分别以对照指纹图谱R2为参照，对12批石膏-知母组合物指纹图谱进行整体相似度评价。结果显示，12批石膏-知母组合物供试品UPLC 指纹图谱相似度依次为0.997、0.998、0.997、0.999、0.999、0.963、0.974、0.995、0.999、0.999、0.986、0.999，均大于0.963，与对照图谱具有较好的一致性，表明石膏-知母组合物各批间质量均一稳定。

2.2.3 聚类分析 将12 批石膏-知母组合物IC、UPLC指纹图谱共有峰面积作为变量，导入SPSS 20.0软件，进行Z得分标准化处理。以标准处理后的数据作为变量，选择组间连接法，以平方欧氏距离为测量区间，对样品进行聚类分析（图5）。当平方欧氏距离为22.5时，12批石膏-知母组合物大致可分为2类，S1～S6、S8～S12聚为第1类，S7聚为第2类。当平方欧氏距离为15 时，大致可分为3 类，S1～S5、S8～S12聚为第1类，S6聚为第2类，S7聚为第3类。

图5 石膏-知母组合物样品聚类分析

2.2.4 主成分分析 将IC、UPLC 指纹图谱标准化处理后得到的数据导入SPSS 20.0 软件进行主成分分析，以特征值>1为指标，从20个变量成分中提取得到5 个变量成分，累积方差贡献率>89.052%，见表6。同时将数据导入SIMCA 14.1 软件中，以提取得到的5 个主成分绘制主成分得分图，见图6。结果表明，S6、S7 与其余批次样品差异较大，这与聚类分析结果基本一致。

图6 石膏-知母组合物样品主成分分析

表6 石膏-知母药对主成分特征值及方差贡献率

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 Ca2+色谱条件：同2.2.1.1 项下IC指纹图谱色谱条件。

SO42-色谱条件：色谱柱选择IonPac AG14 保护柱（50 mm×4 mm，9 µm）、IonPac AS14 分析柱（250 mm×4 mm，9 µm）；ASRS 4 mm 抑制器，抑制电流为31 mA；淋洗液为4.5 mmol·L-1碳酸钠与1.4 mmol·L-1碳酸氢钠均匀混合的溶液，流速为1.2 mL·min-1；电导检测器，检测池温度为35 ℃，检测器灵敏度为5 µs·cm-1；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。

芒果苷、新芒果苷、异芒果苷色谱条件：同2.2.2.1项下UPLC 指纹图谱色谱条件，检测波长为258 nm。

知母皂苷BⅡ色谱条件：选择Agilent ZORBAX StableBond C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（25∶75）为流动相；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度104 ℃；载气流速为2.9 mL·min-1；进样量为5～10 μL。

2.3.2 对照品溶液的制备 Ca2+、SO42-对照品溶液的制备：分别称取钙单元素溶液标准物质、硫酸盐溶液标准物质约3、5 mg，精密称定质量，精密加入纯水30 mL，分别制成Ca2+、SO42-质量浓度为100.055、166.682 μg·mL-1的溶液，即得。

芒果苷、新芒果苷、异芒果苷对照品溶液的制备：同2.2.2.2 项下UPLC 指纹图谱对照品溶液。

知母皂苷BⅡ对照品溶液的制备：称取知母皂苷BⅡ对照品约23 mg，精密称定，精密加入30%丙酮水溶液25 mL，制成质量浓度为889.471 µg·mL-1的对照品溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 Ca2+、SO42-供试品溶液的制备：精密吸取2.2.1.3 项下IC 指纹图谱供试品溶液0.6 mL，加水稀释至30 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

芒果苷、新芒果苷、异芒果苷供试品溶液的制备：同2.2.2.3 项下UPLC 指纹图谱供试品溶液制备方法。

知母皂苷BⅡ供试品溶液的制备：取石膏-知母组合物样品，研细，精密称取样品约0.2 g，置于具塞锥形瓶中，精密量取30%丙酮水溶液25 mL置于锥形瓶中，称定质量，密塞，超声溶解30 min，取出，放凉至室温，再称定质量，用溶解溶剂补足损失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 方法学考察 标准曲线绘制：精密吸取2.3.2 项下各成分对照品溶液，分别制成各成分的系列对照品溶液，分别按照2.3.1 项下色谱条件进行对照品测定，以各成分对照品溶液的质量浓度（或质量浓度对数值）为横坐标（X），对应的峰面积（或峰面积对数值）为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得到线性回归方程，见表7。

表7 石膏-知母组合物各指标线性关系考察结果

精密度试验：精密吸取2.3.2 项下各成分对照品溶液少许，分别按照2.3.1 项下色谱条件连续进行样品测定6 次，得到各成分的色谱峰面积。结果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷BⅡ 6 个指标色谱峰面积的RSD 为0.73%、1.54%、0.22%、0.23%、0.95%、0.83%，表明该仪器精密度良好。

稳定性试验：取S7 供试品，分别按2.3.3 项下方法制备3 份供试品溶液，分别按2.3.1 项下色谱条件，在0、2、4、8、12、24 h 内进行样品检测，得到各成分的色谱峰面积。结果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷BⅡ 6个指标峰面积的RSD分别为1.36%、3.02%、0.46%、0.48%、0.52%、2.61%，表明按照上述方法制得的供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

重复性试验：取S7 供试品6 份，按2.3.3 项下方法平行制备各成分供试品溶液，按2.3.1 项下色谱条件进行样品检测，得到各成分的色谱峰面积，按照标准曲线回归方程计算各成分含量。结果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷B Ⅱ 6 个指标质量分数的RSD分别为2.94%、2.72%、2.62%、2.92%、3.28%、1.08%，表明该供试品溶液的制备方法重复性良好。

加样回收率试验：按2.3.3 项下各成分制备方法，分别平行精密称取已知成分含量的石膏-知母组合物样品（S7）9 份，按供试品中待测成分含量的50%、100%、150%原则，精密加入上述6 个待测指标的对照品，按2.3.3 项下制备方法分别制备各仪器的供试品溶液，按2.3.1 项下色谱条件进行样品检测，按照标准曲线回归方程计算各指标的含量，得到Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷BⅡ的加样回收率均值分别为102.06%、97.59%、101.13%、102.01%、91.29%、100.08%，RSD 分别为1.57%、0.93%、1.33%、1.53%、1.32%、1.68%，均在限度要求范围内，表明本方法回收率良好。

2.3.5 样品含量测定 取12 批石膏-知母组合物样品，分别按2.3.3项下方法制备供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件进行样品检测，见表8。结果表明，Ca2+和SO42-质量分数分别为58.35～100.56、127.85～223.13 mg·g-1；新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷B Ⅱ质量分数分别为0.52～5.91、5.10～8.20、0.51～0.78、21.14～38.35 mg·g-1。

表8 石膏-知母组合物各指标质量分数 mg·g-1

2.4 石膏-知母合煎样品与单煎合用样品指纹图谱及含量测定

取石膏-知母合煎组合物、石膏-知母单煎混合样品，分别按照指纹图谱方法、含量测定方法，平行测定3份。将测定数据导入SPSS 20.0统计分析软件，采用独立样本t检验对样品进行分析，见表9、表10。结果表明，与单煎合用样品比较，合煎样品中Na+，K+，Mg2+，UPLC 峰1、峰2、峰3、峰6、峰9、峰12、峰13、新芒果苷、芒果苷峰面积与称样量的比值，以及新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ含量差异有统计学意义（P<0.05）；Na+，IC 峰2，K+，Mg2+，新芒果苷，UPLC峰4、峰14、峰15 峰面积与称样量的比值，以及新芒果苷、知母皂苷BⅡ含量明显增大，表明石膏与知母合煎可有效促进化学成分的溶出。

表9 石膏-知母合煎组合物与单煎混合样品指纹图谱检测数据（,n=3）

表9 石膏-知母合煎组合物与单煎混合样品指纹图谱检测数据（,n=3）

注：与单煎合用样品比较，*P<0.05；表10同。

表10 石膏-知母合煎组合物与单煎混合样品指标质量分数（,n=3） mg·g-1

表10 石膏-知母合煎组合物与单煎混合样品指标质量分数（,n=3） mg·g-1

3 讨论

3.1 色谱条件选择

IC 指纹图谱考察了0.8、1.0、1.2 mL·min-13个流速，发现三者色谱峰信息完整、分离度较好，但流速为0.8 mL·min-1时各色谱峰的出峰时间居中，利于后期分析，最终确定流速为0.8 mL·min-1。淋洗液考察了18、20、22 mmol·L-13 种不同浓度的甲烷磺酸水溶液，发现3 种不同浓度淋洗液对色谱图影响较小，仅影响各色谱峰的出峰时间，为节省时间，确定淋洗液为20 mmol·L-1甲烷磺酸水溶液。

UPLC 指纹图谱考察了乙腈-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈∶甲醇（3∶1）-0.1%甲酸水溶液3种不同流动相，发现乙腈∶甲醇（3∶1）-0.1%甲酸水溶液的色谱图基线噪音小，色谱峰峰形最佳，各峰之间分离度达到1.5 以上，出峰时间适宜，满足指纹图谱对色谱峰的要求。同时，考察了258、275、310 nm 3个波长，发现258 nm下芒果苷、新芒果苷、异芒果苷的响应值最高，275 nm 下色谱峰数目最多，因此确定258 nm 为含量测定波长，275 nm为图谱测定波长。

3.2 指纹图谱结果分析

12 批石膏-知母组合物IC 指纹图谱、UPLC 指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，具有较好的一致性。聚类分析和主成分分析均能将12批石膏-知母组合物分为3 类，表明产地、加工方式、组合方式、生产工艺等因素均可影响石膏-知母组合物的质量，由此可侧面突出建立IC 指纹图谱、UPLC 指纹图谱的重要性，可全面反映石膏-知母组合物的整体化学信息[17]。

3.3 石膏-知母合煎组合物与石膏、知母单煎混合样品的比较分析

IC 指纹图谱中，石膏-知母合煎组合物中峰2 明显高于知母提取物以及单煎合用样品。此外，石膏提取物中未检测到峰2，说明峰2 主要来源于知母，且与石膏合煎能促进知母中峰2 所表征化合物的溶出。离子色谱常见的无机阳离子出峰顺序为Li+、Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+。峰2 的保留时间在峰1（Na+）和峰3（K+）之间。虽然本研究没有进行峰2的指认，但可推测其为NH4+离子。目前，暂未见有关石膏-知母中NH4+离子作用的相关文献报道，有待继续深入研究。

石膏-知母合煎组合物中Na+、K+、Mg2+峰面积/称样量明显大于单煎混合样品（P<0.05），这存在2种可能：1）2 味药物的煎煮出膏率并无明显变化，则表明合煎可明显促进Na+、K+、Mg2+溶出；2）石膏-知母合煎时可增强石膏细粉的保留，实际合煎石膏出膏率有增加，并减少石膏生产过程固形物的损耗[18]，导致这3种离子的量增多。就结果而言，合煎组合物样品确比单煎混合的样品Na+、K+、Mg2+量高，制剂过程不可不考虑。

UPLC指纹图谱中，石膏-知母合煎组合物中峰1、峰2、峰3、峰6、新芒果苷、峰9、芒果苷、峰12、峰13峰面积/称样量与单煎混合样品的差异有统计学意义，其中组合物中仅有新芒果苷峰面积/称样量大于单煎混合样品。同时，新芒果苷、知母皂苷BⅡ含量明显高于单煎混合样品（P<0.05），说明合煎能提高新芒果苷、知母皂苷BⅡ的溶出，这与文献报道结果一致[11,19]。综上所述，合煎与单煎有显著区别的成分可考虑纳入石膏-知母制剂质量研究的重点关注对象，本研究建立的方法可为石膏-知母组合物的质量研究提供有效的方法支持。

药对通常有2 味药组成，疗效确切，具备了复方的基本主治功能和疗效，是联系众多中药复方的纽带。本研究采用IC 和UPLC 探究了石膏-知母药对组合物中无机元素及有机化合物的组成情况，可为石膏-知母药对及白虎汤等经典方剂的质量评价及物质基础研究提供一定理论指导和技术支持。