乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA载量与α-SMA、AFP及肝纤维化的关系

廖洪柳, 徐海锋, 徐维蔓

达州市中西医结合医院检验科,四川达州 635000

乙型肝炎肝硬化常由慢性乙型肝炎病毒感染、炎症长期刺激所致[1]。全球每年死于乙型肝炎肝硬化的患者多达100万人,因此关注乙型肝炎肝硬化的防治工作尤为重要,应选择合适的临床检测指标对该类人群进行病情评估[2-3]。乙肝病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus DNA,HBV-DNA)具有良好的灵敏度和特异度,常被用于评估乙型肝炎病情进展[4]。α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)同时具有成纤维细胞和肌细胞的特性,近年来研究发现α-SMA可以用于评估肝组织损伤[5-6]。既往已有研究证实,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在慢性乙肝类型疾病病情评估中有较好的临床价值[7-8],但关于其与HBV-DNA载量水平关系的研究报道相对较少。鉴于此,本次研究旨在探讨乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA载量与α-SMA、AFP及肝纤维化的关系,旨在为临床诊治工作提供一定帮助。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取本院2020年5月—2022年5月收治的乙型肝炎肝硬化患者108例,参考李宁侠等[9]方法检测HBV-DNA载量,并依据其水平将患者分为低水平组(35例,HBV-DNA<1.0×103拷贝/mL)、中水平组(39例,1.0×103拷贝/mL～1.0×107拷贝/mL)和高水平组(34例,HBV-DNA≥1.0×107拷贝/mL)。纳入标准:①符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》诊断标准[10];②未接受过抗病毒治疗,或入组前半年内未进行抗病毒或免疫治疗;③无其他类型肝炎病毒感染。排除标准:①肝癌、胃癌、胆管癌;②免疫系统疾病;③心、肾等重要脏器功能损伤;④妊娠期或哺乳期妇女;⑤临床资料不完整。本研究为回顾性研究,检测指标所需样本采集均取得患者及家属知情同意,并签署同意书,且符合赫尔辛基宣言。各组一般资料比较差异无显著性(P>0.05;表1)。

表1 各组一般资料的比较

1.2 α-SMA的检测

所有患者均行肝组织活检术采集肝组织标本,以SP法依次切片、脱蜡、水化、修复、一抗和二抗温浴、显色、复染、脱水、透明和封片后,以PBS代替一抗为空白对照,胞质呈现棕黄色即可判定为阳性细胞,由Image 6.0软件计算α-SMA光密度(optical density,OD)。

1.3 肝纤维化指标检测

采用化学发光法检测血清肝纤维化指标,包括透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(lanminin,LN)、Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen,Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(procollagen Ⅲ,PC-Ⅲ)。仪器选择罗氏E601电化学发光免疫分析仪,试剂和试剂盒均为仪器配套产品。

1.4 肝功能指标和AFP的观察

比较各组谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)水平。采用ELISA法检测血清AFP水平,试剂与试剂盒购自美国Sigma公司,操作步骤严格按说明书进行。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比较

随着HBV-DNA载量水平升高,各组GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平比较,均低水平组<中水平组<高水平组(P<0.05;表2)。

表2 各组GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比较

2.2 各组肝纤维化指标的比较

随着HBV-DNA载量水平升高,各组HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比较,均低水平组<中水平组<高水平组(P<0.05;表3)。

表3 各组肝纤维化指标的比较 mg/L

2.3 HBV-DNA载量与各指标的相关性

对HBV-DNA载量水平进行变量赋值,HBV-DNA载量低水平、中水平和高水平分别赋值为1、2、3。Pearson相关性分析显示,HBV-DNA载量水平与α-SMA、AFP、HA、LN、Ⅳ-C、PC-Ⅲ均呈正相关(P<0.05;图1)。

图1 Pearson相关性分析HBV-DNA载量水平与各指标的相关性1为HBV-DNA载量低水平;2为HBV-DNA载量中水平;3为HBV-DNA载量高水平。

3 讨 论

乙型肝炎肝硬化因早期缺乏典型的临床表现常被人们所忽视,一经确诊多已处于较为严重的阶段,预后不甚理想[11]。故选择有效的血清学检测指标对患者进行病情评估很有必要。

本研究发现,随着HBV-DNA载量水平升高,各组GPT、GOT、TBIL水平比较,均低水平组<中水平组<高水平组。持续的HBV感染可以诱导肝脏炎症反应,引起肝组织纤维化,当病情进展到一定程度时,可发展为肝硬化。GPT存在于肝脏细胞胞质内,GOT主要存在于线粒体,在肝细胞受到损伤时,GPT、GOT会相继释放入血,其血清水平升高可以反映肝细胞损伤程度。此外,肝细胞损伤还会影响肝细胞对胆红素的摄取和转化,导致血清TBIL水平升高。

本研究结果显示,随着HBV-DNA载量水平升高,各组α-SMA、AFP水平比较,均低水平组<中水平组<高水平组。α-SMA在肝内胶原形成和肝纤维化中发挥重要的调节作用,其作用机制可能与转化生长因子-β/Smad信号通路有关[12]。临床可以通过降低血清α-SMA表达,抑制肝星状细胞活化,进而改善肝纤维化。AFP是由卵黄囊和胎肝细胞产生,目前多被认为是肝癌高特异性蛋白质[13]。HBV-DNA与肝细胞DNA结合后,改变了细胞的遗传特性,使AFP调控基因发生改变,AFP大量合成[14]。肝细胞的损伤和修复过程均会伴随肝脏纤维化形成,而修复与再生的肝细胞会产生大量AFP,故而呈现较高水平AFP。本文进一步分析可见,HBV-DNA载量水平与α-SMA、AFP均呈正相关,表明α-SMA、AFP水平检测可以用于评估其病情进展,指导临床治疗,但具体关系仍需未来进一步深入研究。

本研究发现,随着HBV-DNA载量水平升高,各组HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比较,均低水平组<中水平组<高水平组,且相关性分析可见,HBV-DNA载量水平与上述指标均呈正相关。HA是由肝脏间质细胞组成,对于诊断肝硬化患者肝脏纤维化具有较好的灵敏度。LN主要存在于基底膜中,伴随纤维细胞增加可生成大量LN。Ⅳ-C是基底膜重要组成部分,常被作为肝脏纤维化的临床诊断标志物。肝脏纤维化病变会使PC-Ⅲ水平明显升高,PC-Ⅲ常被用于早期肝硬化的诊断与评估工作[15]。乙型肝炎肝硬化患者由于长期HBV感染,使肝脏长期处于损伤的病理状态,肝脏结缔组织增生,不断促进肝脏纤维化进程,临床可以通过上述指标检测评价肝脏的纤维化程度,以此评估HBV复制的活跃性。

综上所述,乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA载量水平越高,α-SMA、AFP水平越高,肝脏纤维化程度越严重,且α-SMA、AFP及肝纤维化水平与HBV-DNA载量水平呈正相关,临床可以通过上述指标检测判断疾病的严重程度,为疾病的防治提供参考和借鉴。