儿童肺炎支原体感染现状及其检测方法对比

倪洁 陆定

(上海市第八人民医院儿科,上海 200235)

虽然儿童肺炎支原体感染在发病之后存在一定特殊的临床表现和影像学变化,但是与病毒、细菌等引发的感染之间存在相似性,需要通过更加科学的实验室检验方法,对感染类型进行确定[1]。以往对于肺炎支原体的实验室诊断主要依靠血清学检测,但是儿童第2份血清标本本身难以获得,抗体容易受到年龄、免疫情况的影响,因此肺炎支原体抗体IgG滴度、肺炎支原体IgM使用受到影响。而肺炎支原体咽拭子DNA检测这种生物学检验措施样本获取更加便捷,实际使用过程中效果较好[2]。本文对比分析儿童肺炎支原体感染现状及其检测方法。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年7月至2020年12月我院收治的疑似儿童肺炎支原体感染患儿200例,其中男患儿102例,女患儿98例,年龄0～13岁,平均年龄(6.54±1.32)岁,病程2～12d,平均病程(6.13±1.34)d。其中≤3岁患儿58例、4～6岁患儿77例、7～11岁患儿65例。纳入指标:符合实用儿科学对于呼吸道感染的诊断标准[3];临床出现发热、鼻塞、咳嗽等症状[4];经X等影像学检查确定支气管、肺部存在疾病征象;患儿家属知情同意。排除指标:先天性血液疾病;先天性心脏、肾脏重大疾病;先天性免疫缺陷;中途退出实验。

1.2方法 (1)血清学检测包括肺炎支原体抗体IgG滴度、肺炎支原体IgM,均采集患儿静脉血并进行血清分离,将血清在2～8℃环境中保存,24h内完成检测。肺炎支原体抗体IgG滴度检验试剂为日本富士瑞必欧株式会社生产,操作流程需要严格按照说明书中步骤进行操作,共12孔,取25 μl进行倍比稀释,之后加入第1孔中,将未致敏粒子25 μl加入第2孔中,将致敏粒子25 μl加入3～12孔中,充分震荡混匀后在室温下等待3h,如结果第3孔滴度1:40、第4孔滴度1:80、第5孔滴度1:160、第6孔滴度1:320、第7孔滴度1:640、第8孔滴度1:1 280、第9孔滴度1:2 560、第10孔滴度1:5 120、第11孔滴度1:10 240、第12孔滴度1:20 480则表示符合检查指标,如抗体滴度高于1:40表示阳性;肺炎支原体IgM检验,按照SERODIA-MYCOⅡ试剂盒说明书的要求进行操作,自2 ml全血中分离出血清,加入血清稀释液、感作粒子、未感作粒子,30 min时间内与血清稀释液复溶,充分混合之后等待3 h,抗体稀释自1:40开始至1:1 280,如高于1:160表示阳性。(2)生物学检验主要开展肺炎支原体咽拭子DNA检测,在清晨未洗漱状态下获取咽部分泌物,接种到预温的培养基中,使用PCR毛细管电泳片段分析试剂盒对逆转录-聚合酶联反应进行检测,之后使用GEXP自动化平台进行检测,并使用相关配套软件对荧光数据进行分析,获得阈值循环数,如数值高于40表示阴性,低于38为阳性,38～40之间进行复检,而复检之后数值在38～40之间为阴性。

1.3观察指标 分析各年龄段儿童肺炎支原体感染感染率;分析各年龄段不同检测方法检出率;分析各年龄段联合检测结果。

2 结 果

2.1分析各年龄段儿童肺炎支原体感染感染率 ≤3岁儿童肺炎支原体感染感染率最高为82.12%,其次为4～6岁患儿感染率为74.14%,7～11岁患感染率最低为66.15%,总感染率为75.00%。

2.2分析各年龄段不同检测方法检出率 ≤3岁患儿生物学检测检出率更高,7～11岁患儿血清学检测准确率更高(P<0.05);4～6岁患儿血清学检测、生物学检测准确率之间对比无差异(P>0.05)。见表1。

表1 分析各年龄段不同检测方法检出率n(%)

2.3分析各年龄段联合检测结果 联合检测在≤3岁、4～6岁、7～11岁年龄段检出率均较高。见表2。

表2 分析各年龄段联合检测结果

3 讨 论

肺炎支原体是一种介于病毒和细菌之间的无细胞壁型微生物,因自身的体积较小,可通过飞沫传播,因此在儿童集体中的爆发率较高。但是对该病的临床疾病特征进行分析,发现典型性不足,影像学检查也无明显的特异性,无法准确将其与细菌、病毒感染区分[5]。实验室检验对于该病的诊断具有积极作用,常规使用血清学检验和分子生物学检验,需要对两种检测方法的使用价值进行分析,更好的对疾病急性诊断[6]。

实验室对肺炎支原体感染的诊断金标准为培养法,但是需要耗费较长的时间,操作过程也非常复杂,阳性率低,不利于快速检测,而血清学检验包括肺炎支原体抗体IgG滴度、肺炎支原体IgM检验[7],检测试剂盒成熟,成本低,具有较好的应用价值。但是该检测方法在0～3岁儿童中检出率较低,这是因为该年龄段儿童自身的免疫应答水平较低,使IgM、IgG的检出率不高,而7～11岁患儿自身免疫系统发育逐步完善,对于IgM、IgG的检出率则显著提升[8];从DNA检测阳性率分析,7～11岁阳性率较高,这是因为该阶段患儿自身的抵抗能力较好,对于疾病存在一定抗体,自身携带肺炎支原体抗体的概率较高[9],而肺炎支原体在呼吸道中分布,因此容易检出。但是肺炎支原体DNA检测虽然可以确定患儿携带和感染病原菌,没有一个确切的区域确定患儿是否感染,因此该指标阳性意义不大;为了提升疾病的诊断质量,可将两种方法进行结合[10],对比分析血清学检验、分子生物学检验的阳性检出结果,结合不同年龄选择适合的检测措施,联合应用2种方法进行早期检测,提升疾病的诊断质量,规范漏检的问题,减少假阳性的出现,提升检验的准确性[11]。

综上,肺炎支原体抗体IgG滴度、肺炎支原体IgM、肺炎支原体咽拭子DNA检测在儿童肺炎支原体感染中诊断率均较高,均可用于疾病诊断,为了提升检验质量,可以将3种检测方法进行结合,提升诊断准确率。