复合微生态制剂对公犊牛肾阳虚功能性腹泻疗效观察

马尚杰，马 强，张 晋

（甘肃省家畜繁育改良管理站，甘肃武威 733000）

21 世纪以来，微生态制剂研发一直是行业内的研究热点。众多研究表明微生态制剂可以提高饲料转化率并提升动物免疫力，但其对幼龄家畜消化道疾病的预防、治疗方面临床应用甚少[1,2]。微生态制剂具有无毒、不产生耐药性，长期存活于消化道等优点，在疾病诊疗中是最理想的抗生素替代品，因此利用微生态制剂治疗疾病具有一定科研价值[3,4]。肾阳虚是最为常见的犊牛腹泻病类型，且公犊牛临床症状表征突出，以公犊牛肾阳虚功能性腹泻病症为基础研究微生态制剂对消化系统的干预作用最具代表性。本文旨在建立肾阳虚功能性腹泻公牛犊模型，并用复合微生态制剂对其进行治疗，为复合微生态制剂的科研提供药理学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 微生态制

复合微生态制剂配方：枯草芽孢杆菌+植物乳杆菌+低聚果糖。单一微生态制剂配方：枯草芽抱杆菌制剂（活菌数109CFU/g）。

1.1.2 试验动物

雄性3 月龄内公犊牛72 头（中国农业科学院兰州兽医研究所提供），体重(100±20)kg，饲养于武威市牛乐有限责任公司养殖场，自由饮水和采食。

1.1.3 试验器材

采血针、手术刀、医用手套、一次性注射器、电子体温计、真空采血管、电子天平、冷凝回流装置、实验室专用超纯水机CREAT、SHZ循环水真空泵、恒温箱和电冰箱等。

1.1.4 主要试剂

75%酒精（批号201910087）购自于甘肃兰州生工生物技术有限公司生产；甲醛（批号20190106）购自北京化工厂生产；水合氯醛（批号20190620）购自于北京北方生物技术有限公司生产。

1.2 试验方法

1.2.1 预试验

选西门塔尔公犊牛12 头，随机分为3 组，分别为：对照组、模型组、复合微生态制剂组。除肾阳虚功能性腹泻模型组采取肌肉注射氢化可的松以外，其余均进行灌服给药，给药前后测体温、体重，预试验为期7d。

1.2.2 正式试验

挑选72 头公牛犊，随机分为6 组，对照组、复合微生态制剂高、中、低剂量组、单一组和肾阳虚模型组，各组处理方式见表1。各组公犊牛体重进行t 检验，P=0.378＞0.05，差异不显著，说明各组之间犊牛体质量差别不会对试验结果造成影响。犊牛分群饲养，接受自然光照，可自由饮水和采食。公犊牛基础日粮与饲养管理按《实验动物 中国地鼠饲养管理》（DB14/T 1945—2019）标准执行。正式试验于2023 年6 月15 日至8 月3 日进行，共计50d。

表1 各试验组处理剂量

1.2.3 公犊牛临床症状观察

造模和给药前对72 头公犊牛进行体温和体重的测量，观察并记录其精神状态，采食量，饮水量，体毛光泽度和是否有蜷缩，弓背姿态等一般临床症状。给药和造模1h 后，再测量体重和体温，观察是否出现蜷缩弓背姿态等一般理指标。

1.2.4 公犊牛的剖检和采样

试验第25、50 天观察犊牛腹泻情况，用罗马Ⅳ标准诊断，计算腹泻发病率。给药共计50d，第50 天给药结束后，注射水合氯醛麻醉公犊牛后颈静脉采血，以4000r/min 离心15min 分离血清；处死公犊牛后，每组选4 头体重差异较小公犊牛，取肾脏、睾丸、丘脑、垂体、下丘脑称重并采样于甲醛溶液中固定。

1.2.5 数据分析

上述记录的数据录入Excel 2010，由他人核查数据，保证数据的高度精确后，导入SPSS 21.0 进 行t 检 验，P＜0.05 表示差异显著。试验数据用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 预试验结果

由表2 可知，灌服后肾阳虚功能性腹泻模型组、微生态组与对照组相比，体温、体重显著降低（P＜0.05），说明微生态制剂可能对公犊牛体温、体重具有一定影响。

表2 预试验用药前后平均体重和平均温度

2.2 正式试验结果

2.2.1 一般临床症状

对照组公犊牛在试验流程中被毛光滑洁白、活动性高、食欲饮水良好；模型组渐渐出现精神萎靡、倦怠少动、弓背竖毛、体温与体重度降低等症状，伴随给药天数的延长，上述症状日益明显，且出现不同程度的腹泻，表明模型建立成功；复合微生态制剂组与单一组无肉眼可见临床症状变化。

2.2.2 用药后对公犊牛体重、体温、腹泻率和脏器系数的影响

由表3 可知，模型组与空白组相比体重显著降低（P＜0.05），表明肾阳虚功能性腹泻证公犊牛体重增长缓慢；高剂量组与单一组相比，体重显著升高（P＜0.05），表明复合微生态制剂与单一促进肾阳虚功能性腹泻公犊牛体重增长，而且复合微生态制剂的促进效果随用药剂量升高而提升。

表3 用药后公犊牛体重、体温、腹泻率和脏器系数对比

模型组与空白组相比体温差显著降低（P＜0.05），与肾阳虚功能性腹泻临床症状畏寒肢冷是相互一致的，证明本试验模型建立成功；复合微生态制剂低剂量组、高剂量组与模型组体温相比显著升高（P＜0.05），表明复合微生态制剂与单一均能促进公犊牛产热致使体温升高，且复合微生态制剂明显优于单一微生态制剂。

模型组下丘脑和垂体脏器系数均高于对照组（P＜0.05），表明肾阳虚功能性腹泻损伤公犊牛下丘脑-腺垂体系统功能，抑制神经、体液性联系；复合微生态制剂高剂量组与模型组相比，下丘脑和垂体脏器系数明显偏高（P＜0.05），表明复合微生态制剂对下丘脑与垂体作用效果明显，能调节肾阳虚模型公犊牛下丘脑与垂体的机能。

模型组与空白组相比，睾丸指数显著降低（P＜0.05），且均低于其他组，表明肾阳虚证引起睾丸萎缩，降低睾丸质量。单一组、复合微生态制剂与对照组相比，睾丸质量无显著差异（P＞0.05），表明单一微生态制剂与复合微生态制剂对肾阳虚证引起的睾丸萎缩均有疗效。

肾阳虚模型组腹泻率最高（44.81%），证明公犊牛肾阳虚症状常伴随腹泻的出现；复合微生态制剂组和单一组腹泻率明显低于模型组，证明微生态制能降低腹泻的发生。第50 天时复合微生态制中剂量试验组与对照组相比，腹泻率降低，但低剂量、高剂量组高于对照组，低于单一组和模型组，证明微生态制剂对肾阳虚功能性腹泻有一定治疗作用。

3 结论

复合微生态制剂与单一枯草芽抱杆菌制剂均能改善公犊牛肾阳虚功能性腹泻临床症状，增加公犊牛体重、下丘脑和垂体指数，提升公犊牛体温，改善机体下丘脑—垂体—睾丸轴的功能，从而降低腹泻的发生。在体温调节方面，复合微生态制剂疗效整体优于单一枯草芽抱杆菌制剂。复合微生态制剂给药量10.2g/(kg·d)时治疗肾阳虚功能性腹泻效果最佳。