血清miR-384、LIN28B 在糖尿病视网膜病变中的表达及其诊断价值分析

唐云户,赵 媛,代 艳

（电子科技大学医学院附属绵阳医院/绵阳市中心医院眼科，四川 绵阳 621000）

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是2 型糖尿病常见的微血管并发症，是老年人视力丧失的主要原因[1-2]。DR 的发展与糖尿病病程、高血糖密切相关[3]。目前，DR 的治疗已取得了进展，但由于医疗资源有限，部分地区眼底检查率较低，导致DR 的治疗延误，患者预后不佳[4]。因此，寻找更多的血液学生物标志物诊断DR 十分重要。miR-384 作为非编码内源性microRNA（miRNAs）被广泛研究。研究表明，miRNAs 可通过调控血管内皮生长因子的表达，从而在血管生成过程中发挥重要作用[5]。也有研究指出，miR-384-3p 在DR 小鼠模型中低表达，可影响模型小鼠视网膜新生血管的形成[6]，提示miR-384 可能参与DR 的发生发展。LIN28B 是一种高度保守的RNA 结合蛋白，在调控机体发育中具有重要作用。研究发现，乳腺癌组织中LIN28B 的阳性率明显高于癌旁组织，LIN28B的表达与患者远处转移、肿瘤分化程度、淋巴结转移呈正相关[7]。据报道，在糖尿病中miR-384和LIN28B 之间具有一定联系[8]。然而，关于miR-384 和LIN28B在DR患者血清中的表达水平及作用目前仍未可知。基于此，本研究通过检测DR 患者、非DR 患者及健康体检者血清中miR-384 及LIN28B 的表达水平，分析其与DR 患者临床资料的关系，并绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线以评价miR-384、LIN28B在DR患者中的临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2020 年1 月至2021 年11 月于本院确诊的100 例2 型糖尿病患者作为观察组，其中男52 例，女48 例；年龄39～70 岁，平均（56.51±7.92）岁。纳入标准：①符合2 型糖尿病诊断标准[9]；②完成DR 筛查；③首次确诊并接受治疗。排除标准：①精神状态异常，无法正常交流；②合并青光眼、白内障等眼部疾病；③处于妊娠期或哺乳期；④临床信息不完整；⑤合并恶性肿瘤。根据是否合并视网膜病变将观察组患者分为非DR组（40例）和DR组（60例）；另选取同期本院的健康体检者40 例作为对照组，其中男18 例，女22 例；年龄38～68 岁，平均（54.78±6.56）岁。观察组与对照组年龄和性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究通过本院医学伦理委员会的批准（20191108002），患者及其家属了解本研究并签署知情同意书。

1.2 研究方法

收集整理患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史、BMI、糖尿病病程、血糖等临床资料。采用qRT-PCR 法检测DR 组、非DR 组患者及对照组健康体检者血清miR-384、LIN28B的相对表达水平，并进行比较。

1.3 统计学分析

利用SPSS 25.0 统计软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t或F检验。Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 与LIN28B 表达的相关性。Logistic回归分析DR 发生的影响因素。ROC曲线分析血清miR-384、LIN28B 水平对DR 患者的诊断价值。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清miR-384、LIN28B表达水平比较

DR 组患者血清miR-384水平明显低于非DR 组和对照组（P＜0.05），且非DR 组低于对照组（P＜0.05）；DR 组患者血清LIN28B 水平明显高于非DR 组和对照组（P＜0.05），且非DR 组高于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 各组血清miR-384、LIN28B的表达情况（±s）

表1 各组血清miR-384、LIN28B的表达情况（±s）

*:与对照组比较，P＜0.05；#：与非DR组比较，P＜0.05

组别对照组非DR组DR组F P n 40 40 60 miR-384 0.97±0.21 0.72±0.20*0.62±0.15*#44.390＜0.001 LIN28B 1.03±0.26 1.31±0.32*1.61±0.44*#31.137＜0.001

2.2 DR 患者血清miR-384、LIN28B 表达水平与临床资料的关系

分别以DR 患者血清miR-384、LIN28B 表达水平的中位数0.64、1.38 为临界值，将DR 组患者分为miR-384 高、低表达组和LIN28B 高、低表达组，各30 例。分析miR-384、LIN28B 表达水平与DR 患者临床资料的关系，结果显示，miR-384、LIN28B 表达水平与患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史、BMI无关（P＞0.05），与糖尿病病程、血糖有关（P＜0.05），见表2。

表2 DR患者血清miR-384、LIN28B表达水平与临床资料的关系[例（%）]

2.3 DR患者血清miR-384与LIN28B的相关性分析

Pearson法分析结果显示，DR 患者血清中miR-384与LIN28B 的表达呈负相关（r=-0.296，P＜0.05），见图1。

图1 DR患者血清miR-384与LIN28B的相关性分析

2.4 多因素Logistic回归分析DR发生的危险因素

将2型糖尿病患者是否发生DR作为因变量（1=发生，0=未发生），以血清miR-384、LIN28B 水平为自变量进行Logistic回归分析，结果显示，miR-384、LIN28B是DR发生的独立影响因素（P＜0.05），见表3。

表3 Logistic回归分析影响DR发生的危险因素

2.5 血清miR-384、LIN28B 水平对DR 患者的诊断效能

ROC曲线分析结果显示，miR-384、LIN28B 单独诊断DR 患者的ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）及特异度均低于二者联合诊断的AUC及特异度，见表4、图2。

图2 血清miR-384、LIN28B水平对DR患者的诊断效能

表4 血清miR-384、LIN28B水平对DR患者的诊断效能

3 讨论

DR 是由高血糖诱导的代谢应激引起神经胶质和血管损伤之间复杂的相互作用而导致的[10]。临床上DR 可分为非增殖性DR 和增殖性DR，非增殖性DR 代表DR 的早期阶段，其中血管通透性增加和毛细血管闭塞是视网膜脉管系统中的2 个主要观察结果；增殖性DR 是DR 的晚期阶段，其特征是新生血管形成[11]。目前，DR 的发病率不断增加，对其进行早期诊治，可提高患者及家属的生活质量。因此，寻求潜在的DR血清学生物标志物以尽早诊断DR，对该病的治疗尤为重要。

miRNA是一种具有18～25个核苷酸的单链非编码RNA，其可以参与胚胎分化、增殖、血管生成的过程。研究发现，miRNA 可影响DR 分期及病程，对DR 的病情发展具有较强的诊断价值[12]。miR-384 作为一种小分子RNA，近年来被广泛研究。据报道，miR-384在癌细胞中呈低表达，其在多种肿瘤中发挥抑制细胞增殖、迁移和促进凋亡的作用[13-14]。也有研究指出，与正常细胞相比，大鼠缺血心肌细胞和缺氧H9c2 细胞中miR-384-5p 的表达水平降低[15]，提示miR-384-5p 可能是机体内一种重要的保护因子。因此，本研究通过检测DR 患者中miR-384 的表达探讨其在DR 中的作用，结果显示，DR 组患者血清中miR-384 水平明显低于非DR 组和对照组，且非DR 组低于对照组。表明miR-384 异常与DR 的进展密切相关。通过分析miR-384 表达水平与DR 患者临床资料的关系发现，血清miR-384 表达水平与患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史、BMI 无关，与糖尿病病程、血糖有关，这提示miR-384可能是DR发生的临床诊断指标。

LIN28B是一种高度保守的结构蛋白，可在调节干细胞活性方面发挥作用，也是调节发育分化的关键因子[16-17]。研究发现，在结肠癌组织中检测到LIN28B 过表达[18]。也有研究表明，LIN28B 可促进神经母细胞瘤迁移，沉默LIN28B 可抑制肿瘤的生长，并明显延长患者的生存期[19]。LIN28 属于Blet-7 miRNA 家族的一员，Blet-7 miRNA 通过抑制LIN28B 的表达来减弱糖尿病相关动脉粥样硬化中的炎症作用[20]，提示LIN28B 可能参与了糖尿病并发症的进程。Fu 等[21]研究发现，miR-152/LIN28B 轴可以通过调节VEGF 信号来影响高糖诱导的人视网膜内皮细胞的血管生成，并可影响DR 的进程。然而血清LIN28B 在DR 中的作用目前尚不清楚。本研究结果显示，DR 组患者血清中LIN28B水平明显高于非DR 组和对照组，且非DR 组高于对照组；LIN28B 表达水平与糖尿病病程、血糖有关。以上结果均提示LIN28B 可能参与了DR 的病理过程，值得进一步的探究。

本研究采用Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 与LIN28B 表达的相关性，结果发现，DR 患者血清中miR-384与LIN28B 表达呈负相关，且miR-384、LIN28B 均是DR 发生的独立影响因素。这表明miR-384与LIN28B的表达密切相关，miR-384、LIN28B可能是DR潜在的生物标志物，从基因水平增加miR-384的表达或干扰LIN28B 的表达，可能是治疗DR 的一个新思路。ROC曲线结果显示，miR-384、LIN28B二者联合检测诊断DR 患者的AUC及特异度均高于单项检测。可见，二者联合能够弥补单项血清LIN28B 或miR-384检测的不足，对DR的临床诊断具有较高的应用价值。

综上所述，DR 患者血清中miR-384 呈低表达，LIN28B 呈高表达，miR-384、LIN28B 表达水平与DR 患者糖尿病病程、血糖有关；且DR 患者血清中miR-384与LIN28B 表达呈负相关，miR-384、LIN28B 均是DR 发生的影响因素，二者有望成为DR临床诊断的指标。