某集团使用新型猪蓝耳灭活疫苗控制猪蓝耳病类NADC30 和类NADC34毒株混合感染案例

赖庆光 ，杨茂春 ，欧伟业 ，卫秀余

（1.浙江美保龙生物技术有限公司，浙江 金华 321016；2.上海市奉贤区兽医研究所，上海 201400）

1 猪场背景

某养猪集团公司在2021年10—12月期间，有四个生产基地出现母猪流产、死胎增加的现象，保育猪死淘率升高，部分批次可达40%，送检病料检测到猪蓝耳病病毒核酸阳性。猪蓝耳病暴发前一直使用某进口猪蓝耳病经典株活疫苗，由于生产不稳定，2021年11月增加了自家组织灭活疫苗和定制五联苗（猪蓝耳、猪圆环病毒病、支原体、链球菌、副猪嗜血杆菌灭活疫苗）免疫母猪和仔猪，效果不理想。

美保龙技术服务团队应约在2021年12月20日过去交流，建议采样检测摸底评估和初步确定蓝耳灭活疫苗免疫方案，随后隔离开展驻场服务。

2 现场临床和解剖情况

2022年1月6日-20日，美保龙技术服务团队进入HMX 和HMD场，母猪流产、死胎有一定比例。发现保育猪伤亡严重，保育期死淘高达20%。临床表现为：部分仔猪突然倒地、神经症状、四肢划水；部分皮肤发红，这类猪解剖多数有心内膜炎、心瓣膜和心耳处有大量白色血栓或者混色血栓堵塞，心外膜血管怒张，造成血液循环障碍，肺主要表现间质性肺炎、有的实变严重，有出血点，肺门淋巴结和纵隔淋巴结肿大出血，个别脾脏肿大；部分仔猪严重消瘦、腹式呼吸、关节肿大，解剖主要是浆膜炎，心包炎、腹膜炎纤维素性渗出，关节有黄色脓性渗出物或者软组织水肿；有不少猪死后尸僵不全、苍白、皮下黄染，解剖发现，有的呈现血液凝固不良、皮下脂肪黄染、腹部肌肉渗出血水严重、系水力明显下降；个别仔猪外表看有胃肠鼓气的，一般皮肤苍白，解剖结肠、回肠肠道出血严重，肠胃胀气严重，肝脾有肿大。当时初步判断有梭菌和附红细胞体感染，梭菌造成死后快速胀气，肠道出血，皮肤苍白，附红细胞体造成血液凝固不良，尸僵不全，皮下黄疸。部分剖解图片如下图（图1）。

图1 保育猪解剖图

2021年12月20日交流后提出检测方案和初步免疫建议。了解目前猪蓝耳病感染压力和感染节点。采样方案如下：采集流产胎儿肺组织，出生仔猪的脐带血、睾丸液，产房和保育弱死仔猪病料淋巴结、肝脾肺等，20、40、60日龄仔猪血液，检测蓝耳抗原和抗体。同时对保育猪病料进行分离细菌，血液涂片是否有附红细胞体。

3 猪场现场采样检测情况

2021年12月26日到2021年12月29日期间四个猪场随机采样检测，送到华南某第三方检测机构检测结果如表1。

表1 样品PRRSV、PCV2 核酸检测结果（qPCR）

表1 中H M D、H M X、X L、TE 四个猪场的病原检测报告，脐带血、睾丸液、20日龄、40日龄、60日龄、死胎、病猪解剖病料组织基本上蓝耳核酸检测阳性，CT 值非常低。同时HMX 场和TE 场40日龄仔猪血液检测到PCV2 抗原阳性。

图2 为XL 场血液检测猪蓝耳N 蛋白抗体结果。

图2 XL 场蓝耳N 蛋白ELISA抗体检测结果

图2 是XL 场猪蓝耳N 蛋白抗体检测结果，60日龄抗体全部阴性。整体N 蛋白抗体水平不高，大部分低于1.5，母猪阳性率比较高。反观表1 XL 场猪蓝耳核酸检测结果：睾丸液猪蓝耳抗原阳性率20%、产房断奶前弱猪蓝耳抗原检测率30%，CT 值分别最低为33.19和32.24，仔猪20日龄血液蓝耳核酸阳性率33.3%，CT 值为31.3，此时N 蛋白抗体也不高，S/P 值为0.47，阳性率50%；60日龄血液抗原阳性率为40%，CT 值最低为30.5，但是N 蛋白抗体基本上是阴性，低于0.4，表现出抗原阳性、抗体阴性的结果。但是，当时临床上4 ～8 周龄保育猪主要是呼吸道相对较多、咳嗽、打喷嚏、个别皮肤发红，倒地神经症状死亡，有些是消瘦、浆膜炎，死淘在12%左右。说明60日龄仔猪目前正在处于感染期，目前N 蛋白抗体阴性，处于感染早期，N 蛋白抗体还不足于检测到阳性。

TE 场血液抗体检测结果见图3。

图3 TE 场猪蓝耳N 蛋白ELISA 抗体检测结果

图3 是TE 猪场猪蓝耳N 蛋白抗体S/P 值分析。21、40、60日龄阳性率（S/P 值大于0.4）只有10%～30%，21、40、60日龄猪N蛋白抗体阳性率很低，只有10%、10%、30%， 均值为0.26、0.26、0.33，大部分均为阴性，但是离散度非常高，高达80%以上。母猪群体离散度较小，S/P 值大部分在1.12 ～1.35。对应表1 来看，TE场20日龄仔猪抗原阳率为13.3%，CT 值最低是35.2，40日龄仔猪抗原阳性率为73.3%，CT 值最低为28.3，60日龄仔猪抗原阳性率为100%，CT 值最低为30.5。反观这个时候猪场非常不稳定，断奶仔猪在30日龄开始出现发病，皮肤发红、发热、神经症状、突然倒地划水死亡，或者厌食消瘦，关节炎和浆膜炎严重，死淘高。产房母猪分娩仔猪睾丸液阳性率100%，CT值最低为30.1，病弱猪抗原阳性率100%，CT 值最低为26.7，母猪临床表现为死胎多。说明这些猪采样时，N 蛋白抗体水平很低，很多阴性，但是核酸检测却是阳性，表明这些20 ～60日龄猪刚刚发病，处于病毒血症，N 蛋白抗体还没有产生足够高，很多还是阴性。

图4 是HMD 和HMX 两个猪场的猪蓝耳N 蛋白抗体检测分析。仅仅从N 蛋白抗体S/P 值来看，抗体水平不高，大部分低于1.5 以下，离散度最大的是哺乳母猪和20日龄仔猪。这两个猪场实际上在同一个地方两条独立生产线。母猪免疫时间和程序一样，仔猪免疫程序也是一样。整体看两个猪场40日龄仔猪抗体水平不一样，一个阳性率是90%，但是另外一个是0，全部阴性，S/P 值为1.04 和0.1。哺乳母猪阳性率也是相差很大，阳性率一个是90%，另一个是10%。S/P 均值为0.86和0.09.均相差如此大。

图4 HMD 和HMX 场猪蓝耳N 蛋白ELISA 抗体检测结果

2022年1月2日根据核酸检测结果进行测序，测序结果如下，HMD、HMX 测序见图5 和图6。

图5 HMD 和HMX 两个场PRRSV ORF5 核苷酸遗传进化树分析

图6 HMD 和HMX 两个场PRRSV ORF5 基因核苷酸同源性分析

HMD 和HMX 两个场PRRSV ORF5 核苷酸遗传进化树分析，测序毒株命名为：HAIMENCHANG、H A I M E N C H A N G 2 、HAIMENCHANG3。

2022年1月2日HMD 和HMX 场测序结果，表明是场内感染猪蓝耳类NADC34 毒株。

2022年1月同时对XL 场进行PRRSV ORF5 核苷酸测序，结果见图7 和图8：对XL 场PRRSV ORF5核苷酸遗传进化树分析结果，测序毒株命名为：XINGLINGCHANG。

图7 XL 场PRRSVORF5 核苷酸遗传进化树分析

图8 XL 场PRRSVORF5 核苷酸同源性对比

这是XL 场测序结果表明该场也是类NADC34 毒株感染，三个场均为2022年1月2日测序结果，表明该集团公司主要感染类NADC34毒株。

2022年1月中旬，采HMD、HMX、TE 场对应90—120日龄育成猪血样检测，猪群血样可以同时检测到NADC34 和类NADC30 毒株混合感染。对应毒株名称为粉色线条，见图9。

图9 PRRSV ORF5 核苷酸遗传进化树分析

采血液涂片检测附红细胞体阳性，采取发病仔猪的淋巴结、肺、肾、关节液到内部实验室进行分离到链球菌和副猪嗜血杆菌，药物敏感试验结果如图10。

图10 副猪嗜血杆菌革兰氏染色图片

图11 为副猪嗜血杆菌的PCR鉴定图片（其目标条带为821 bp）。

图11 副猪嗜血杆菌PCR 鉴定图片

图12 为链球菌革兰氏染色图片。

图12 链球菌革兰氏染色图片

分离链球菌进行12 种抗菌药物的最小抑菌圈，见表2。

表2 分离链球菌药物敏感试验

分离的链球菌药物敏感试验结果，提示阿莫西林、头孢、青霉素钠敏感。

对HM 两个场分离的副猪嗜血杆菌做11 中抗菌药物的最小抑菌圈，结果如下见表3。

表3 分离副猪嗜血杆菌药物敏感试验

分离的四株副猪嗜血杆菌，提示对氟苯尼考高度敏感，对泰妙菌素、多西环素中度敏感。

根据上述情况汇总，基本确诊该农场为猪蓝耳感染后，继发链球菌、副猪嗜血杆菌，个别猪肠道菌群失调造成猪梭菌发作。

4 防控方案建议

建议该集团两大片区六个猪场的种猪全部接种一次猪蓝耳灭活疫苗2 mL，连续两次，间隔10 ～14 d。后续间隔三个月一次。产房仔猪1—10日龄接种0.5 mL 猪蓝耳灭活疫苗，10日龄以上产房仔猪接种1 mL 灭活疫苗，保育猪接种一次1 mL。这样普免以后，下一批出生仔猪改为10—14日龄先接种猪蓝耳活疫苗，28 ～30日龄注射猪蓝耳灭活疫苗、46 ～49日龄保育猪进行第二次猪蓝耳灭活疫苗接种。后备母猪入群前全部接种两次猪蓝耳灭活疫苗，每次2 mL，间隔10 ～15 d，经过连续两次采血和唾液核酸检测猪蓝耳抗原，确保抗原阴性进入基础群母猪舍。

根据细菌分离和药物敏感试验结果，优化给药方式。5 ～6 周龄保育猪饮水添加阿莫西林和泰妙菌素饮水，同时在饲料添加多西环素和七星败毒颗粒。10—12 周育成猪添加阿莫西林、泰妙菌素和七星败毒颗粒饮水，分开添加到水中进行饮水。同时在断奶仔猪饲料中适量添加乳清粉、脂肪粉，改善适口性和增加能量摄入量，减少断奶由于采食量不足造成仔猪营养不足和应激。

加强洗消，降低环境中病毒载量。使用二氧化氯加强水帘消毒、环境带猪雾化消毒、及时排放猪栏中的水泡粪，减少环境带毒；空栏期间产房、保育房熏蒸消毒，空栏洗消后使用高锰酸钾+甲醛熏蒸消毒，目的是降低环境中有害微生物数量。

优化猪群流动和混群，及时处理病弱猪，对阉割小公猪建议断奶后销售，降低肥猪和保育猪密度，改善通风量。及时跟踪晚上保育舍和肥猪舍氨气浓度和氧气含量，减少由于大栏缺氧造成下半夜死亡多的现象。

5 后续生产和检测结果跟踪情况

这四个猪场按照上述方案接种，母猪流产问题逐渐稳定，产房仔猪生产恢复正常，生产成绩好转，保育猪死淘率快速下降。猪群在1月22日，该集团兽医主管和各个猪场报上来的数据分析，断奶仔猪健康度非常好，整个猪群健康度目前恢复很快，死亡率大大降低，母猪不再流产，弱仔胎控制在正常范围。

2022年2月5日四个猪场开始采样，每个场采集脐带血五窝，睾丸液五窝，不同日龄断奶仔猪血液10 头，荧光定量PCR 检测猪蓝耳核酸。

2022年2月7日检测结果见表4。

表4 各牧场猪蓝耳核酸检测结果（qPCR）

核酸检测结果分析：HMD 场，25 个样品8 个混样检测，均为阴性；TE 场，17 份样本，6 个混样后检测，发现脐带血还有阳性，CT 值为34.68，睾丸液和断奶仔猪血液全部阴性；XL 场20 个样本8 个混样，睾丸液、脐带血、血清核酸检测全部阴性；HMX 场20 个样本8 个混样，发现睾丸液、脐带血全部核酸阴性，但是断奶仔猪血液还有阳性，一个样本CT 值为21.55。分析原因，HMX 猪场脐带血和睾丸液混样检测均为核酸阴性，但是断奶仔猪检测核酸阳性，说明在保育猪栏内还有猪群携带病毒，或者产房和保育房环境带毒污染导致，也有可能是HMX 猪场接种了活疫苗后采样的。截止到2022年2月17日，四个猪场反馈，稳定生产，尤其是母猪和产房，非常健康，产仔数和断奶体重，PSY 均超越以前同期水平。TE场和XL 场出来的保育猪非常健康，68日龄平均体重可以达到27.8 kg，死淘率只有5%。HMD 和HMX 两个猪场产房死亡率从14.2%下降到6.35%，保育猪死淘率从29.32%下降到9.2%。母猪生产数据情况，两个片区母猪断奶发情率从2021年1月的89.4%、79.7% 上升到2022年4月的92.9%，91.5%。115 d 分娩率从84.4%上升到92.2%。母猪分娩障碍明显下降，窝均健仔提高1.65 头。

连续对睾丸液、断奶仔猪血液、5 ～8 周仔猪唾液，13 周龄、20 周育肥猪血液和唾液检测猪蓝耳抗原变化，发现母猪在第二次免疫以后，出生仔猪睾丸液、断奶仔猪血液猪蓝耳抗原检测率直线下降，睾丸液检测猪蓝耳核酸从开始22%～30%阳性率下降到3%，母猪在4月初第三次免疫后，睾丸液和24日龄断奶仔猪检测不到猪蓝耳抗原。5 ～8 周仔猪猪蓝耳抗原变化，XL 场、TE 场、HMD 检出率从阳性率30%～100%，降到10% 以内，HMX 从100% 猪蓝耳抗原阳性率下降到18%。

6 防控效果与讨论分析

加强后备猪入群管理，猪群合理混群和流动。本案例中集团公司虽然没有从外面引入种猪，但是内部种猪群调动未遵循严格的检测规定，不同区域调运猪只和混群，由于疫苗免疫程序和个别疫苗厂家不一样，加上猪群流动和混群不合理，造成猪蓝耳病NADC34 和NADC30混合感染，造成母猪流产等繁殖障碍，保育猪发病死淘严重。经过笔者团队不断建议，改善猪群流动，及时销售阉割公猪，不同来源的断奶仔猪和保育猪尽量不混群，减少混群带来的不稳定，优化猪群流动，做好后备猪蓝耳必须抗原阴性入群。

利用新型猪蓝耳病灭活疫苗和中药来降低母猪体内猪蓝耳病病毒载量，减少垂直传播，控制传染源，这样可以减少断奶仔猪和保育猪带毒，减少群体感染压力。通过不断减低母猪垂直传播，逐步生产出出生仔猪猪蓝耳抗原阴性的群体，减少断奶仔猪猪蓝耳病携带野毒，减少散毒。

另外一方面，该两个区域猪场，由于排污不及时，水泡粪液面过高，加上湿度大，造成环境病毒载量高，多次检测环境样本均带毒严重。通过洗消猪栏、加大水泡粪的排出、加强带猪空气消毒和水帘、风机外面气溶胶消毒，使得猪场周边气溶胶传播减少，加强监测，降低环境病毒载量后，明显可以降低水平传播能力和降低猪群循环感染压力。

细菌分离和药物筛选对控制保育猪细菌感染是非常有意义的。之前该猪场一直使用替米考星或者泰万菌素、阿莫西林等效果不理想，后来优化药物浓度和给药方式，筛选不同企业生产的阿莫西林，很快减低了细菌感染造成的死淘。

新型猪蓝耳病灭活疫苗有快速启动细胞免疫作用，通过自噬小体抑制病毒在体内复制，所以不仅可以快速降低体内病毒载量，多次免疫后可以达到体内抗原阴性，同时由于没有蓝耳病毒在体内复制，N蛋白抗体水平自然下降，可以通过血液检测发现，血液中N 蛋白抗体水平逐步下降，尤其在3 ～5 周龄仔猪可以发现大量猪蓝耳双阴仔猪。说明通过新型猪蓝耳灭活疫苗免疫，可以减少猪群传染源，减少猪蓝耳病毒在猪体内复制，提高易感猪群的感染阈值。本案例也说明新型猪蓝耳灭活疫苗不仅可以有效预防猪蓝耳病发生，也可以紧急预防与治疗猪蓝耳病。因为逐步降低猪群蓝耳病毒载量，就可以降低感染压力，进一步预防猪蓝耳病的发生；在猪群暴发猪蓝耳病时，通过快速降低病毒载量，降低猪蓝耳病感染排毒和散毒，可以让发病猪群快速稳定下来，给临床防控猪蓝耳病提供了新的思路和方法。

团队2022年到目前发稿前，在潍坊、齐齐哈尔、漳州、吉安等多个集团规模场均类似猪蓝耳2 个毒株以上混合感染，造成母猪流产，保育猪继发细菌感染造成大量死亡的防控案例，证明确实有效。