20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂的分析方法

2023-12-08高婷婷高立明王广成李婷许艳秋

世界农药 2023年11期

高婷婷，高立明，王广成，李婷，许艳秋

(1.成都市食品检验研究院，成都 611135；2.四川省农业农村厅植物保护站，成都 610041)

苯唑草酮(topramezone)又称苯吡唑草酮，是一种对羟基苯基丙酮酸酯双氧化酶(HPPD)类抑制剂，具有安全性高、选择性好等特点，能有效防除玉米田一年生禾本科和阔叶杂草[1]。氯氟吡氧乙酸异辛酯(fluroxypyr-meptyl)是吡啶类内吸传导型苗后除草剂，其施用后能被植物叶片和根迅速吸收和快速传导，使敏感作物出现典型的激素类除草剂反应，导致植株畸形、扭曲，最终枯死，主要用于防除阔叶类杂草，对禾本杂草无效[2]。因此，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯混配不仅可以达到同时防除禾本科和阔叶类杂草的效果，还可提高药效，延缓杂草抗药性的产生。目前，关于苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯的检测方法已有文献报道[2-4]，但2 种药剂混配的分析方法未见报道。基于此，本文采用反相高效液相色谱法对20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂进行同时测定，在选定的色谱条件下2 种有效成分与杂质可以完全分离，此方法简便、快速、准确，能同时测定2 种有效成分的含量，是一种理想的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

Agilent 1260 型高效液相色谱仪配二极管阵列检测器(美国安捷伦科技有限公司)；AB204-S 电子天平[梅特勒-托利多贸易(上海)有限公司]；KH-500E 超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；过滤器：滤膜孔径0.45 μm(天津津腾实验设备有限公司)。

苯唑草酮标准品(≥98.0%，Dr.Ehrenstorfer)；氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品[≥98.0%，国家农药质检中心(沈阳)]；20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂；甲醇(色谱纯，飞世尔科技公司)；磷酸(分析纯，四川西陇化工有限公司)。

1.2 色谱条件

色谱柱：ZORBAXSB-C18不锈钢柱(5µm，4.6mm×150 mm；流动相：甲醇+0.1%磷酸溶液；梯度洗脱条件如表1 所示；流量：1.0 mL/min；柱温：(30±2)℃；检测波长240 nm；进样体积：3.0µL。在该色谱条件下，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯的保留时间分别约为5.7、15.1 min。典型色谱图见图1。此外，实验中可根据仪器特点适当调整色谱操作条件以获得最佳效果。

图1 20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂样品的高效液相色谱图

表1 流动相梯度淋洗表

1.3 测定步骤

1.3.1 标准品溶液的配制

准确称取苯唑草酮标准品0.04g(精确至0.0002 g)、氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品0.06 g(精确至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超声5 min，加入25 mL 甲醇超声溶解10 min，恢复至室温后，用甲醇定容，备用。

1.3.2 样品溶液的配制

准确称取20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂样品0.5 g(精确至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超声5 min，加入25 mL 甲醇超声溶解10 min，恢复至室温后，用甲醇定容，经0.45µm 孔径滤膜过滤，收集滤液备用。

1.3.3 测定

仪器于前文所述色谱条件下稳定，待基线稳定后，连续进标准品溶液数针至相邻2 针峰面积变化小于1.5%，按照标准品溶液、样品溶液、样品溶液、标准品溶液的顺序进样测定。

1.3.4 计算

将标准品和样品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)的峰面积带入下式计算，试样中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)的质量分数为ω(%)。

式中：A1为标准品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)峰面积的平均值；A2为样品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)峰面积的平均值；m1为称取苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)标准品的质量(g)；m2为称取样品的质量(g)；ω1为标准品中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸异辛酯)的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 溶剂的选择

苯唑草酮微溶于水，在有机溶剂中的溶解度(g/L，20 ℃)：二氯甲烷25～29，DMF 114～133，丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷、异丙醇、甲醇、正辛醇、甲苯＜10；氯氟吡氧乙酸异辛酯于27.7°C 时在水中溶解度0.9 mg/L，在丙酮中大于4%，在氯仿和二氯甲烷中大于50%。因该2 种有效成分在二氯甲烷中均具有满足需求的溶解度，且二氯甲烷与甲醇能互溶，故选择二氯甲烷作为有效成分的溶解溶剂，甲醇作为稀释定容溶剂。

2.2 流动相的选择

选择常用的反相填料ZORBAX SB-C18不锈钢色谱柱，依据有效成分的理化性质选择甲醇水体系为流动相。因2 种物质极性差异较大，当甲醇+水=40+60(体积比)时，苯唑草酮出峰时间约为6 min，但氯氟吡氧乙酸异辛酯的出峰时间大于40 min；当甲醇+水=80+20(体积比)时，氯氟吡氧乙酸异辛酯出峰时间约为10 min，但苯唑草酮出峰时间小于2 min。为保证目标物峰形对称，出峰时间适中，最终选择1.2 节所述的梯度洗脱条件进行检测。

2.3 检测波长的确定

采用DAD 检测器，对苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品在200～400 nm 波长下进行扫描，紫外吸收图见图2。苯唑草酮的主吸收波长为200、285 nm，氯氟吡氧乙酸异辛酯的主吸收波长在200、240 nm，2 种物质的紫外曲线最大交叉点为215 nm。在215 nm波长下干扰明显，因此选择波长240 nm 为检测波长，在该波长条件下氯氟吡氧乙酸异辛酯有吸收平台，苯唑草酮有较大吸收，且无杂质干扰。

图2 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品的紫外扫描图

2.4 线性关系的测定

分别称取98%苯唑草酮标样(0.019 7、0.032 3、0.043 5、0.0553 1、0.075 2 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 个不同质量浓度的苯唑草酮标准品溶液(0.386 1、0.633 1、0.852 6、1.084 1、1.473 9 mg/mL)，按上文所述条件测定，以苯唑草酮质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得工作曲线(图3)。苯唑草酮标样的质量浓度(x)与峰面积(y)满足线性关系y=5 518.7x-80.651，线性决定系数R2=0.999 9。

图3 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯质量浓度与其响应值之间的线性关系图

分别称取98%氯氟吡氧乙酸异辛酯标样(0.029 8、0.048 9、0.065 8、0.083 7、0.113 9 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 个不同质量浓度的氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品溶液(0.584 1、0.958 4、1.289 7、1.640 5、2.232 4 mg/mL)，按上文所述条件测定，以氯氟吡氧乙酸异辛酯质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得工作曲线(图3)。氯氟吡氧乙酸异辛酯标样质量浓度(x)与峰面积(y)满足线性关系y=3 893.8x-29.951，线性决定系数R2=1.000 0。

2.5 方法精密度

对同一20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂样品按上述方法进行6 次平行测定，计算其标准偏差及变异系数。根据CIPAC 方法验证指南，当精密度测定中的RSD 小于修改的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67 计算结果，表明方法精密度测定结果符合要求。精密度测定结果见表2，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸异辛酯的质量分数平均值分别为8.05%和12.16%，方法的标准偏差分别为0.026 8 和0.061 5，变异系数(RSD)分别为0.33%和0.51%。2 者RSD 均小于修改的Horwitz 公式计算值，表明该方法精密度的测定结果符合要求。

表2 分析方法的精密度测定

2.6 方法准确度

准确称取98%苯唑草酮标准品0.212 9 g、98%氯氟吡氧乙酸异辛酯标准品0.322 6 g(精确至0.000 2 g)于100 mL 的容量瓶中，按上述方法配制得到所设计的苯唑草酮(2.086 mg/mL)与氯氟吡氧乙酸异辛酯(3.161 mg/mL)的混合标准溶液。平行称取6 份20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸异辛酯可分散油悬浮剂样品，准确加入苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸异辛酯混合标准溶液10.0 mL，按上述方法测定其回收率，结果见表3。可见，苯唑草酮酯的添加回收率为99.17%～100.17%，平均回收率为99.65%；氯氟吡氧乙酸异辛酯的添加回收率为99.09%～100.56%，平均回收率为99.87%。说明该方法可满足产品中苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸异辛酯的检测要求。