4-(三氟甲基)烟酰胺的高效液相色谱分析

张凯，郭勇飞，潘理想，李乐乐，张小军

(中农立华生物科技股份有限公司，北京 100052)

氟啶虫酰胺(flonicamid)化学名称为N-(氰甲基)-4-(三氟甲基)烟酰胺，是由日本石原产业株式会社发现并开发的一种低毒、高效的新型吡啶酰胺类昆虫生长调节剂类杀虫剂，其通过对蚜虫等刺吸式口器害虫的神经毒性和快速拒食活性而表现出杀虫活性，具有触杀、内吸和渗透作用，且与其他类化合物无交互抗性，可用于防治苹果黄蚜、蔬菜蚜虫、柑橘蚜虫和粉虱、水稻稻飞虱等害虫[1-4]。4-(三氟甲基)烟酰胺是氟啶虫酰胺的主要代谢物之一，具有杀虫活性，在1 h 时的毒力甚至高于母体[5-6]。部分农药企业已申请或取得了该化合物的杀虫组合物等专利，防治对象包括蚊虫、棉蚜、白粉虱、水稻褐飞虱等，农业农村部认为该化合物用于预防、控制危害农业、林业的虫害，依据《农药管理条例》第2 条规定，应按照农药管理[7]。

目前，相关分析方法国外未见公开报道，国内主要为采用液相色谱-质谱联用法对氟啶虫酰胺及其代谢物的残留量进行检测[8-10]，分析方法较为复杂，仪器设备昂贵，不适于工业化生产的质量控制和定性定量判定。基于此，本文采用高效液相色谱仪开展了4-(三氟甲基)烟酰胺的定量分析方法研究，旨在为该产品生产的质量控制和标准制定提供技术支撑[11]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260 型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)和色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；BSA124S 型电子天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]；KQ5200DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

甲醇(色谱纯，赛默飞世尔科技公司)；冰乙酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；超纯水(实验室自制)；4-(三氟甲基)烟酰胺标准品(质量分数99.7%，广州佳途科技股份有限公司)；98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品(上海麦克林生化科技股份有限公司)。

1.2 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸水溶液(20∶80，体积比)；流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：266 nm；进样体积：5.0 μL。在上述色谱操作条件下，4-(三氟甲基)烟酰胺的保留时间约为7.3 min。标样及样品的高效液相色谱图见图1。

图1 4-(三氟甲基)烟酰胺的高效液相色谱图

1.3 溶液的配制

1.3.1 标样溶液的配制

称取0.05 g 4-(三氟甲基)烟酰胺标样(精确至0.000 2 g)于50 mL 容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，冷却至室温后定容至刻度，摇匀，脱气后待用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取含4-(三氟甲基)烟酰胺0.05 g (精确至0.000 2 g)的样品于50 mL 容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，冷却至室温后定容至刻度，摇匀，脱气后待用。

1.4 测定

待仪器基线稳定后，按照以上色谱条件连续注入数针标样溶液，直到相邻2 针标样响应值的相对变化小于1.5%后，方可按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的次序进行测定。

1.5 计算

试样中4-(三氟甲基)烟酰胺的质量分数X(%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中4-(三氟甲基)烟酰胺平均峰面积值；A2为试样溶液中4-(三氟甲基)烟酰胺平均峰面积值；m1为4-(三氟甲基)烟酰胺标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；P为标样中4-(三氟甲基)烟酰胺的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

在甲醇中溶解度较好，优先选择甲醇为有机相。当采用甲醇-水作为流动相时，峰型对称，且加入0.5%冰乙酸后峰型和分离度变得更好。当流动相中甲醇比例太高时，4-(三氟甲基)烟酰胺出峰时间过早，经过反复测试，在流速1.0 mL/min，甲醇-0.5%冰乙酸水溶液的体积比为20∶80 时，4-(三氟甲基)烟酰胺的出峰时间相对适中，且峰型尖锐对称无拖尾，分离效果好。

2.2 检测波长的选择

采用DAD(二极管阵列检测器)对4-(三氟甲基)烟酰胺标准品溶液在200～400 nm 波长下进行扫描，其紫外吸收光谱图如图2 所示。由图2 可知：4-(三氟甲基)烟酰胺的最大吸收波长为266 nm，且能够得到较好的峰型同时避免杂质的干扰。因此，最后选定本分析方法的检测波长为266 nm。

图2 4-(三氟甲基)烟酰胺的紫外吸收谱图

图3 4-(三氟甲基)烟酰胺质量浓度与峰面积线性关系图

2.3 分析方法的线性相关性

分别配制5 个不同质量浓度的4-(三氟甲基)烟酰胺标准品溶液，按照1.2 节所述的液相色谱条件进行进样测定，每个质量浓度溶液分别测定2 次，取其平均值。以4-(三氟甲基)烟酰胺的进样质量浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线(图4)，得到线性方程为y=5 623.6x+53.957，相关系数为R2=0.999 9，说明该方法在测定质量浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.4 分析方法的精密度

从同一批98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品中准确连续称取6 个试样，在上述操作条件下进行分析测定，计算其含量平均值、标准偏差、变异系数，结果见表1。可见，4-(三氟甲基)烟酰胺样品的标准偏差为0.25，变异系数为0.25%。说明该方法的重现性好、精密度高，满足工业分析的定量要求。

表1 分析方法的精密度测定

2.5 分析方法的准确度

准确称取5 个98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品，加入一定量的4-(三氟甲基)烟酰胺标准品，按上述方法进行测定，并计算回收率，结果见表2。可见，4-(三氟甲基)烟酰胺的回收率为98.77%～101.43%，平均回收率均为100.25%，符合分析标准。

表2 分析方法的准确度测定

3 结论

本文采用高效液相色谱仪建立了一种能够定量测定4-(三氟甲基)烟酰胺的分析方法。该方法分离效果良好，方法的准确度和精密度均较高，且简单高效易操作，可用于4-(三氟甲基)烟酰胺的质量控制和定性定量判定，具有很强的可行性和实际应用价值。