金莲花软胶囊质量标准提升研究*

林凤屏，翁 嘉，陈霞飞，李锦妹，欧阳珠

（惠州市食品药品检验所，广东 惠州 516003）

金莲花软胶囊由金莲花单味药材经煎煮、干燥、粉碎、制粒而成，有抗菌消炎作用，主要用于治疗上呼吸道感染、牙周炎、腮腺炎、口腔溃疡、手足口病，为儿科常用药，具有副作用小、疗效确切的优点。有研究表明，金莲花软胶囊可抑制人冠状病毒OC43 复制及病毒感染引起的宿主细胞相关因子的高表达［1-3］。该制剂现行标准为原国家食品药品监督管理局标准（标准号YBZ02792008，YBZ30232005 - 2010Z）。前一标准中收载了金莲花药材的理化鉴别、薄层色谱（TLC）鉴别及芦丁含量的测定方法（紫外- 可见分光光度法），后一标准中收载了金莲花药材的TLC 鉴别及槲皮素含量测定的高效液相色谱（HPLC）法，但此2 种标准内容与2020 年版《中国药典（一部）》金莲花制剂（包括口服液、片、胶囊、颗粒、润喉片）相比专属性不强。鉴于此，本研究中参考2020 年版《中国药典》及相关文献［4-11］对金莲花软胶囊质量标准的提升进行探讨。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Shimadzu LC - 20A 型 及Agilent 1260 型高效 液 相色谱仪（日本Shimadzu 公司及美国Agilent 公司，均配置二极管阵列检测器）；XS205型及XS204型电子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度分别为0.01 mg，0.1 mg）；Camag Peprostar 3 型薄层成像系统（瑞士Camag 公司）；KQ - 250 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

金莲花软胶囊样品10批（A厂，批号分别为L17K061，L17C061，L17L161，L18C051，L18B281，L18A111，L17A131；B 厂，批号分别为170408，170904，180108）；荭草苷对照品（批号为111777-201302，含量≥98%），牡荆苷对照品（批号为111687-200602，含量≥98%），金莲花对照药材（批号为121089 - 201204），均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G 薄层板（青岛海洋化工厂）；甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

取样品内容物1.5 g，混匀，加80%乙醇25 mL，超声（功率250 W、频率40 kHz，下同）处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3 次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，即得供试品溶液。取荭草苷、牡荆苷对照品各适量，分别加甲醇制成每1 mL含荭草苷0.6 mg、牡荆苷0.3 mg的单一对照品溶液。取金莲花对照药材0.5 g，加80%乙醇15 mL，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。按金莲花软胶囊处方及工艺制备缺金莲花药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液各1µL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯- 丁酮- 甲酸- 水（12∶6∶1∶1.5，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和单一对照品溶液色谱相应位置显相同的荧光斑点，且阴性对照无干扰。详见图1。

1-3.供试品溶液 4.阴性对照品溶液 5.对照药材溶液6.荭草苷对照品溶液 7.牡荆苷对照品溶液图1 薄层色谱图1 - 3.Test solution 4.Negative reference solution 5.Reference medicinal solution 6.Orientin reference solution 7.Vitexin reference solutionFig.1 TLC chromatograms

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇- 乙腈- 0.1%磷酸水溶液（10∶12∶78，V/V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：349 nm；柱温：35 ℃；进样量：10µL。

2.2.2 溶液制备

取荭草苷对照品10 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀；精密吸取2 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液。将10粒样品内容物混匀，取约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理20 min，放冷至室温，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：分别吸取2.2.2 项下对照品溶液、供试品溶液及2.1 项下阴性对照品溶液各10 µL，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。详见图2。

1.荭草苷A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性对照品溶液图2 高效液相色谱图1.OrientinA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

线性关系考察：取荭草苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制得不同质量浓度的系列对照品溶液；各取10µL，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以荭草苷质量浓度（X，µg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=25.699X+8.276 2（R2=0.999 9）。结果表明，荭草苷质量浓度在1.68～168.97 µg/ mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取2.2.2项下对照品溶液10µL，按2.2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果的RSD为0.40%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品（批号为L17K061）溶液适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，12，24 h时按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果的RSD为0.70%（n=7），表明供试品溶液室温下放置24 h内基本稳定。

重复性试验：取样品（批号为L17K061）适量，精密称定，共6 份，按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果荭草苷的平均含量为4.21 mg/ g，RSD为0.60%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量（4.211 mg/ g）的样品（批号为L17K061）6份，每份约0.125 g，精密称定，分别加入荭草苷对照品溶液（质量浓度为0.165 45 mg/mL）3 mL，按2.2.2项下方法制备供试品溶液（从“精密加入甲醇50 mL”起），按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取10 批样品各适量，按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，按外标法计算样品含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（mg/g，n=3）Tab.2 Results of content determination of orientin in samples（mg/g，n=3）

3 讨论

3.1 薄层色谱

预试验中考察了不同展开剂，包括乙酸丁酯- 甲酸-水（7∶2.5∶2.5，V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1∶8∶1∶1，V/V/V/V）的上层溶液、三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（7∶3∶4，V/V/V）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（8∶6∶1∶1.5及12∶6∶1∶1.5，V/V/V/V），根据试验结果及考虑减少有毒有害试剂的使用，确定展开系统为乙酸乙酯- 丁酮- 甲酸- 水（12∶6∶1∶1.5，V/V/V/V）。同时对不同厂家（德国Merck公司，青岛海洋化工厂，烟台市化学工业研究所）的薄层板、不同试验温度（4 ℃和40 ℃）和相对湿度（32%和88%）进行考察，结果表明，不同板材及温度、湿度变化对色谱效果无影响，表明本方法耐用性良好。

3.2 含量测定

金莲花软胶囊抗菌主要有效成分为黄酮类化合物，包括荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、金莲花苷等成分［12-14］。现行标准中缺少对金莲花药材有效成分的定量研究，无法更好地满足该制剂的质量控制要求。本研究中采用HPLC 法测定金莲花软胶囊中荭草苷的含量，方法简便，专属性强，重复性好。另外，预试验中还对不同流速（0.9 mL / min 和1.1 mL/ min）、不同柱温（30 ℃和40 ℃）及不同色谱柱进行了考察，结果三者小幅变动对测定结果无影响，表明所建立的测定方法耐用性良好，可用于金莲花软胶囊的含量测定。