红景天苷对肺炎支原体感染大鼠肺组织损伤的干预作用

戚婷婷，郑 怡，赵静婷

（1.蚌埠市中医医院，安徽 蚌埠 233000；2.安阳市人民医院，河南 安阳 455000）

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）缺乏细胞壁，可以和呼吸道纤维上皮毛细胞结合，快速增殖，然后引起肺炎支原体肺炎（MPP）［1-3］。MP 感染以毛细支气管炎和间质性肺炎病理变化为主［4］。临床治疗MP 感染的药物耐药性较差，临床疗效不佳，会产生肠胃不适等副作用［5］。比如使用罗红霉素、阿奇霉素等抗生素治疗MP 时，其发病率并未下降，因此在选择用药时要合理，及时注意畜禽的患病状态［6］。TNF-α、IL-6、IL-10 等细胞因子在MP 感染过程中起着举足轻重的作用［7-9］，并可促使炎性反应扩大化。红景天苷（Salidroside，SAL）是从藏药红景天中提取的活性成分，具有提高免疫力及抗炎等功效，但其作用机制有待进一步研究［10］。Lan 等［11］研究发现红景天苷对脓毒症引起的肺组织损伤有显著的治疗作用。Qi 等［12］通过研究红景天苷对LPS 诱导炎症反应的影响，发现红景天苷可显著减少炎症细胞的浸润，降低血清TNF-α 和IL-6 水平。李风峰等［13］的研究发现，低氧性肺动脉高压大鼠经红景天苷干预治疗后，肺组织病理损伤得到改善，肺组织中炎性因子TNF-α 和IL-6 蛋白水平下降。因此，本试验建立大鼠MP 模型，研究红景天苷对大鼠肺组织损伤的影响，为临床上红景天苷治疗重症肺炎的应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物和分组

选择36 只30 日龄、体重（150±10）g 的健康大鼠。随机分为3 组，即对照组（注射生理盐水）、模型组（前5 d 鼻腔内接种50 μL 1×1010CCU/L 菌液，每天1 次，）和红景天苷干预组（前5 d 鼻腔内接种50 μL 1×1010CCU/L 菌液，每天1 次，第6 天腹腔注射等容积40 mg/kg 的红景天苷），试验周期6 d。饲养温度21～27 ℃，湿度40%～70%，自由摄食和饮水。

1.2 主要仪器与试剂

微量电子天平（型号AE260），购自Deltalange 公司；OLYMPUS 光学显微镜（型号CX41），购自日本奥林巴斯株式会社；RM2135 切片机（型号Leica），购自上海精学科学仪器有限公司；IL-10、IL-6、TNF-α 含量检测试剂盒均购自武汉艾美捷科技有限公司。

1.3 肺组织干/湿比检测

使用电子天平称量大鼠右前叶肺组织的湿重，烘箱内烘干后再次称量大鼠肺组织的干重。计算出肺干/湿比（肺干重/肺湿重×100），将肺组织固定于10%的中性福尔马林及液氮中。

1.4 ELISA 试验检测红景天苷对肺炎大鼠相关炎症因子水平的影响

取各组大鼠2 mL 尾部静脉血，离心取上清液，并按照试剂盒说明检测IL-6、IL-10 和TNF-α 水平。

1.5 HE 染色观察各组大鼠肺组织病理形态

取各组大鼠肺组织于多聚甲醛溶液中固定24 h。随后取肺组织石蜡组织，将固定好的大鼠肺组织从福尔马林固定液中取出，经过梯度脱水、水杨酸甲酯透明后，置于65 ℃烘箱内浸蜡、包埋、制作石蜡切片（切片、展片、捞片、烘片）；之后经脱蜡、复水、染色、脱水、透明等过程制作HE 染色切片，并将封好的切片用光学显微镜进行观察、拍照。

1.6 统计学分析

采用SPSS 17.0 软件进行单因素方差分析，试验数据以“平均数±标准差”表示，其中，P＜0.05 表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 各组大鼠肺组织干/湿比比较

由表1 可知，与对照组比较，模型组大鼠肺组织干/湿比显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，红景天苷干预组大鼠肺组织干/湿比显著降低（P＜0.05）。对照组与红景天苷干预组相比差异不显著（P＞0.05）。

表1 各组大鼠肺干/湿比比较（n=12）

2.2 红景天苷对肺炎大鼠炎症水平的影响

TNF-α、IL-6、IL-10 等细胞因子在MP 感染过程发挥重要作用，并可促使炎性反应扩大。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测三者含量发现，各组大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α 含量差异有统计学意义（P＜0.05）。由表2 可知，与对照组比较，模型组大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α含量均增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，红景天苷干预组中IL-6、IL-10、TNF-α 含量均减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 各组血清IL-6、IL-10、TNF-α 水平比较（单位：ng/L）

2.3 大鼠肺组织病理学变化

HE 染色观察发现，与对照组大鼠相比，模型组大鼠肺泡结构破坏，肺间质破坏严重，并可见大量淋巴细胞浸润，支气管周围肺泡间隔可见纤维增生，间隔增宽。红景天苷干预组大鼠肺泡结构相对完整，全肺组织肺泡腔无渗出现象（图1）。

图1 各组大鼠肺组织病理学观察（HE 染色，×100）

3 小结与讨论

红景天苷是红景天全草或根茎提取的主要生物活性成分，研究表明红景天苷具有抗炎、抗肿瘤、神经保护等功效，因此被广泛应用于中药和保健品领域［10］。李风峰等［13］的研究发现，红景天苷具有抑制炎症的功能，对大鼠肺脏组织炎症有改善作用。此外，红景天苷还可以改善哮喘小鼠的肺功能和降低炎性因子水平。吴明亮等［14］的研究发现，哮喘小鼠经过红景天苷处理以后，肺组织损伤程度明显改善，肺组织中炎性因子水平降低。在癌症治疗方面，红景天苷可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，诱导其凋亡，同时还可以增强放疗和化疗的效果，减少放疗和化疗的副作用。在神经系统疾病治疗方面，红景天苷可以保护神经系统免受损伤，改善认知和行为功能，缓解老年痴呆症的症状。除了治疗肺炎和癌症等疾病外，红景天苷还可以提高机体免疫力，增强机体抵抗力，预防感冒和其他疾病的发生。总之，红景天苷作为一种天然的活性物质，具有广泛的药理作用和临床应用前景，未来还有望在更多领域得到应用［10，14］。MP 是介于细菌和病毒之间的最小病原微生物［15］，是引起人类支原体肺炎的病原体，感染后会对肺外器官造成严重损害，但具体致病机理尚不清楚。研究红景天苷对治疗MP 感染具有重要意义。本研究初步发现感染MP 后大鼠体重下降，同时感染后大鼠肺干/湿比升高，表明MP 感染会对大鼠肺组织有相应的损伤。

本次试验发现，感染MP 的大鼠肺干/湿比明显上升，可能是由于MP 大鼠肺脏有渗出物和炎性细胞浸润所导致，经过红景天苷干预后肺干/湿比降低，表明红景天苷能有效改善肺炎大鼠的肺功能。此外，给予红景天苷治疗后的肺炎大鼠的病理形态有所改善，炎性细胞浸润明显降低，全肺组织肺泡腔无渗出现象。李俊梅等［16］、尹延凤等［17］的研究发现，过度炎性反应在MP 感染中起着重要的作用，而调节血清细胞炎症因子水平可以减少炎症的发生，减轻机体的免疫损伤。白细胞介素-6 是与免疫应答密切相关的炎症因子，也是判断感染炎症损伤程度的指标之一［18］。本研究结果显示，感染MP 大鼠血清IL-6 水平上调，但经40 mg/kg 红景天苷腹腔注射后，血清IL-6 水平下调。白细胞介素10 是一种负性调节因子，主要机制是调节免疫细胞、肿瘤细胞等的分化、增殖［19］。本研究结果显示，感染MP 后，大鼠血清IL-10 水平提高，但对MP 感染大鼠用40 mg/kg 红景天苷腹腔注射治疗后，血清IL-10 水平降低。TNF-α 是评价炎症的关键炎性介质［20］。本研究结果表明，感染MP 后，大鼠血清TNF-α 水平显著升高，经40 mg/kg 红景天苷作用后，大鼠血清TNF-α 水平下降，但影响机理还需进一步研究证明。由此可见，MP 感染可影响炎性细胞因子水平，从而引发机体炎症反应。

综上，红景天苷可能是治疗重症肺炎的有效药物，对重症肺炎的大鼠血气指标有改善作用，并对大鼠肺炎相关炎症因子的升高有抑制作用，对肺组织炎症介质的释放和炎性细胞数量有降低作用，为临床应用红景天苷治疗重症肺炎提供了相关理论依据。