基于多指标权重分析结合正交试验筛选补肾活血膏提取工艺

董晓蕊　张亮

【摘要】目的：筛选补肾活血膏提取工艺条件。方法：以高效液相色谱法测定补骨脂素、异补骨脂素、红景天苷含量。以补骨脂素、异补骨脂素、红景天苷的综合评分值为指标，采用AHP-CRITIC混合加权法结合正交试验，分析加水量、提取时间、提取次数对提取工艺的影响。结果：筛选出补肾活血膏提取工艺为组方药材加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。结论：以AHP-CRITIC混合加权法结合正交试验确定的提取工艺科学可靠，为后期补肾活血膏工业化生产提供依据。

【关键词】补肾活血膏；提取工艺；层次分析法；AHP－CRITIC 混合加权法；综合评分

【中图分类号】R28【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2023）18-0060-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.18.zgmzmjyyzz202318012

Extraction Process Screening of Bushen Huoxue Decocting Paste Based on Orthogonal Design And Multi-index Weight AnalysisDONG XiaoruiZHANG Liang

Qinghai Traditional Chinese Medicine Hospital， Xining 810000，ChinaAbstract：Objective  Screening the extraction process conditions of Bushen Huoxue decocting paste.Methods  Psoralen， isopsoralen， and salidroside were determined by HPLC. Using the comprehensive score values of psoralen， isopsoralen and salidroside， the AHP-CRITIC mixed weighting method combined with orthogonal test， and analyzed the influence of water addition， extraction time and extraction times on the extraction process.Results The extraction process of Bushen huoxue decocting paste was determined to soak it in water for 12h， add 10 times the amount of water， and extract 2 times for 2h each time. Conclusion The extraction process determined by AHP-CRITIC mixed weighting method combined with orthogonal test is scientific and reliable， which provides the basis for the later industrial production of Bushen huoxue decocting paste.

Keywords：Bushen Huoxue Decocting Paste; Extraction Technology; Hierarchical Analysis Method; AHP-CRITIC Mixed Weighting Method; Comprehensive Score

膏滋系指飲片用水煎煮，取煎煮液浓缩，加炼蜜或糖（或转化糖）制成的半流体制剂［1］。膏滋药有滋补、保健、强身、延年之功效，因膏剂黏稠，在体内吸收慢，停留时间长，比其他剂型更能发挥滋养作用［2］，具有很高的营养价值，有助于预防和治疗相关疾病，实乃滋补上品，在中医药宝库中占据很重要的地位［3］。

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease， COPD）是一种特殊的慢性消耗性疾病，容易复发，即使经过常规治疗后也需要长期的调理，中医膏方作为祖国医学历史悠久的八大剂型之一，其药力缓和，方便携带，口感佳，易保存，因而用药的依从性高，可起到防治结合的作用［4］。补肾活血膏是我院肺病科专科用药，联合多索茶碱片治疗COPD稳定期，能改善患者症状，提高肺功能及生活质量，其原因可能与降低IL-18、α-AT1、TGF-β1水平，使气道炎症减轻、气道重塑改善有关，临床疗效优于单纯应用多索茶碱片治疗，值得临床推广应用［5］。

补肾活血膏组方中包含炙补骨脂、党参、黄芪、红景天等27味中药，具有扶正固本，祛痰逐瘀，活血通脉的作用。补骨脂温肾助阳、纳气平喘、温脾止泻，主要活性成分为黄酮类、香豆素类及单萜酚类化合物［6］，其中总香豆素是补骨脂止喘的主要成分［7］，补骨脂素、异补骨脂素及其糖苷补骨脂苷、异补骨脂苷是香豆素的主要活性成分［8］。红景天益气活血、通脉平喘［9］，主要含有黄酮类、苯烷基苷类、有机酸类、多糖类等化合物［10］。本研究拟通过多指标权重分析结合正交试验对补肾活血膏提取过程进行分析，筛选补肾活血膏提取工艺，为后期补肾活血膏生产工艺的确定及质量标准的制定奠定基础。

1仪器与试药

1.1仪器D3（H）021403电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；QUINTIX35-1CN电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；Agilent 1120 高效液相色谱仪；Direct-Q5UV超纯水仪（默克密理博）。

1.2试药补骨脂素（批号21010802，含量以99.99%计）、异补骨脂素（批号19101704，含量以99.31%计）对照品均购自成都格利普生物科技有限公司；红景天苷（批号10338-51-9，含量以99.2%计）购自中国食品药品检定研究院。试剂均为色谱纯，水为超纯水。试验用中药饮片均符合《中国药典》2020版各药材相关项下之规定。

2方法与结果

2.1单因素考察通过直观考察不同浸泡時间下饮片浸润及溶剂透心程度，确定制备补肾活血膏样品的饮片浸泡时间。由于补肾活血膏方中阿胶、鹿角胶、龟板胶、紫河车粉均在收膏时加入，黄酒用于胶类的烊化，均不在本次试验的考察范围内，因此在后续试验中制备样品时均将上述细料药剔除。取除阿胶、鹿角胶、龟板胶、紫河车粉外其它处方中药饮片3份，加入2倍量水，分别浸泡5 h、12 h、15 h，观察饮片浸润程度及溶剂透心程度。结果显示，浸泡12 h后，处方中所有饮片完全浸透，故在后续提取工艺研究试验中，固定饮片浸泡12 h。见表1。

2.2补骨脂素、异补骨脂素、红景天苷含量测定

2.2.1色谱条件Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）PN 959990-902；补骨脂素、异补骨脂素以甲醇-水（55∶45）为流动相，检测波长为246 nm［11］195；红景天苷以甲醇-水（15∶85）为流动相，检测波长为275 nm［11］162；流速为1 mL/min，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。

2.2.2补肾活血膏浓缩液制备精密称取除阿胶、鹿角胶、龟板胶、紫河粉外车其它处方中药饮片9份，按照表2因素水平进行提取，提取液趁热滤过，滤液浓缩至300 mL。

2.2.3供试品溶液的制备精密量取各正交试验所得的补肾活血膏浓缩液20 mL，精密加入甲醇20 mL，加热回流2 h，放冷，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4对照品溶液的制备补骨脂素对照品20.04 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得；异补骨脂素对照品20.44 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。红景天苷对照品20.20 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.5炙补骨脂、红景天阴性对照品溶液的制备精密称取除炙补骨脂、红景天、阿胶、鹿角胶、龟板胶、紫河车粉外其它处方中药饮片1份，加水浸泡12 h，加8倍量水，提取2次，每次2 h，提取液趁热滤过，滤液浓缩至300 mL。按照2.2.3项下供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.6专属性试验精密吸取各对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪。结果如图1所示。

2.2.7线性关系考察按照2.2.4项下方法，分别配制浓度为0.0626 mg/mL、0.1253 mg/mL、0.2505 mg/mL、0.5010 mg/mL、1.0020 mg/mL、2.0040 mg/mL的补骨脂素对照品溶液，浓度为0.0634 mg/mL、0.1269 mg/mL、0.2538 mg/mL、0.5075 mg/mL、1.0150 mg/mL、2.0300 mg/mL的异补骨脂素对照品溶液，浓度为0.1376 mg/mL、0.2753 mg/mL、0.5506 mg/mL、1.1011 mg/mL、2.2023 mg/mL的红景天苷对照品溶液，按2.2.1项下条件进样10 μL，测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得标准曲线的回归方程为： 补骨脂素：Y＝3955.9374X+2.0239，相关系数r＝1.0000；异补骨脂素：Y＝3709.0685X-1.5040，相关系数r＝1.0000；红景天苷：Y＝283.9616X-3.4279，相关系数r＝0.9999。表明补骨脂素含量在0.0626～ 2.0040 mg/mL之间范围内线性关系良好；异补骨脂素含量在0.0634～2.0300 mg/mL之间范围内线性关系良好；红景天苷含量在0.1376～2.2023 mg/mL之间范围内线性关系良好。

2.3正交试验设计采取正交试验，以补骨脂素、异补骨脂素及红景天苷含量为指标，研究补肾活血膏最佳提取工艺。因素水平及结果见表2。

2.4正交试验权重分析

2.4.1基于层次分析法（AHP）的正交试验结果分析AHP是美国著名运筹学家Saaty教授于20世纪 70 年代初提出的一种权重决策分析方法。首先，采用1～9标度法对三项指标进行两两比较评判重要性［12］，判断并建立各指标的优先矩阵，确定优先顺序为红景天苷>补骨脂素=异补骨脂素，见表3。利用SPSSAU软件计算红景天苷、补骨脂素、异补骨脂素3个指标权重系数。见表4。

由表4可知，三项指标的权重值分别是：26.111%、32.778%、41.111%；同时，评价本次权重结果的一致性，计算一致性指标CR值（CR=CI/RI），CR=0.052<0.1，矩阵满足一致性检验，计算所得权重具有一致性。

2.4.2基于CRITIC法的正交试验结果分析中药膏方成分复杂，在提取过程中各有效成分间的相互作用对最终提取效果的影响不明确，因此单凭主观确定权重系数有失偏颇，可采用CRITIC客观赋权法对各指标进行权重分析。结果见表5。

2.4.3AHP-CRITIC混合加权法计算权重本试验共采用AHP法和CRITIC法两种方法分别计算权重，AHP法是主观赋值权重，量化了评价指标两两间比较判断的优先信息，CRITIC法是客观赋值权重，AHP-CRITIC 混合加权法融合了不同类型赋权方法的优点，在保持权重稳定性的同时，更能区分样本数据，保证数据点均匀分散，实验结果稳定可靠［13］，将两种方法结合使得到的权重系数更加合理。按如下公式：

ω=αβ/∑αβ

ω表示综合权重，α为AHP法所得权重值，β为CRITIC法所得权重值。

计算得补骨脂素、异补骨脂素、红景天苷权重系数分别为12.14%、15.84%、21.85%。

2.4.4结果采用 AHP-CRITIC 混合加权法得到的权重系數对试验结果进行综合评分，综合评分=［（ 补骨脂素含量/ 补骨脂素最大含量） × 0.1341+（异补骨脂素含量/异补骨脂素最大含量）×0.1410+（红景天苷含量/红景天苷最大含量）×0.2185］×100%［14］（表2）；利用SPSSAU对正交试验结果进行分析，直观分析结果见表6。

由表6结果直观分析可知，试验各因素对于补肾活血膏提取工艺的影响主次顺序为B>C>A，最优工艺为ABC。因此，补肾活血膏提取工艺确定为：按处方比例，取炙补骨脂、党参、黄芪、红景天等27味药材，加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。

3讨论

近些年来，随着中医治未病理念的不断推广，膏方的临床应用日益受到青睐，已逐步成为群众广为接受的慢病调理、改善体质、养生保健的有效手段［15］。膏方制剂的质量控制，是目前亟待解决的一个问题，除了在制备过程中（诸如浸泡、煎煮、浓缩、收膏和储存等环节）要把好质量关外，尚如浸泡饮片的加水量及浸泡时间、药物的煎煮时间及煎液的浓缩温度控制，收膏中糖和蜂蜜的用量以及成膏后包装材料的选择等环节，均有待于进一步深入探讨［16］。

补肾活血膏为中药配伍组方，成分众多，其疗效的发挥是方中多种有效成分综合作用的结果。方中补骨脂对肾阳虚衰，肾不纳气之虚喘，可奏标本兼顾之效［9］。补骨脂总香豆素对豚鼠过敏性哮喘及组胺性哮喘潜伏期有显著的延长作用，作用机制可能与补骨脂总香豆素调节体内环磷酸腺苷、环鸟苷酸的量及比值变化有关［17］。红景天及其有效成分红景天苷具有抗疲劳、抗抑郁、增强免疫力、清除活性氧自由基（ROS）、抗肿瘤等药理活性，常用于治疗高原反应，对心脑血管系统、神经系统、呼吸系统等的疾病均有一定疗效［18］。同时，研究［18］表明红景天及红景天苷对多种肺部疾病（如肺动脉高压、肺组织纤维化、COPD）均具有一定的疗效，其机制主要与抗氧化、抗炎、抗凋亡有关。故本试验选择了组方中疗效确切，含量较高的补骨脂素、异补骨脂素及红景天苷作为检测指标。

多个指标共同指导工艺往往难以获得一致的评价结果，所以对于多指标成分来说，如何进行合适的权重划分是最终确定最佳提取工艺的关键［19］。针对权重系数分配，目前常用方法有 AHP 法、CRITIC法。其中，AHP法虽体现了中药复方君臣佐使配伍的规律特点，但受研究者主观判断影响；CRITIC法权重结果受客观试验数据影响，忽略了中药复方各药材的配伍特点［20］。本试验以AHP-CRITIC混合加权法分配权重系数，主观与客观结合，使总体评价的结果更具科学性和合理性。

综上所述，本研究通过正交试验前单因素试验，考察确定了组方饮片的浸泡时间，采用AHP-CRITIC 混合加权法得到权重系数对试验结果进行综合评分，利用SPSSAU软件对正交试验结果进行分析，确定了补肾活血膏的提取工艺为组方药材加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。研究所得结果科学合理，为日后补肾活血膏工业化生产提供了支持，具有一定的应用价值。参考文献

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（收稿日期：2022-12-26编辑：杜玲玉珊）