宫颈癌组织中BAG3蛋白表达水平及意义

冯 宁,刘 艳

陕西省西安市中心医院妇产科,陕西西安 710061

宫颈癌是我国发病率仅次于乳腺癌的恶性肿瘤,既往研究显示宫颈癌以中老年居多,但近年来发病逐渐向年轻化发展[1],根据相关数据发现,全世界每年约有50万宫颈癌新发病例,且约有50%女性死于宫颈癌[2]。宫颈癌已成为威胁女性生命健康的重大公共卫生问题。近年有研究发现部分分子标志物与宫颈癌进展有关,对疾病治疗疗效及预后评估具有重要意义[3]。Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)具有调节细胞生长、发育、凋亡及蛋白降解等作用[4],并且广泛存在恶性肿瘤中,参与多种肿瘤的形成与发展[5-6]。但BAG3在宫颈癌组织中的表达水平及意义少见报道。因此,本研究拟通过检测BAG3蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和宫颈正常组织中的表达情况,分析其与宫颈癌患者病理特征、预后的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年10月至2018年10月西安市中心医院收治的201例研究对象的宫颈组织标本作为研究对象。201例标本中宫颈正常组织标本35例(正常组,因子宫肌瘤手术行全子宫切除术而获取),年龄25～65岁、平均(45.66±3.45)岁;宫颈上皮内瘤变组织标本96例(宫颈上皮内瘤变组),年龄24～66岁、平均(44.96±3.25)岁,其中低级别宫颈鳞状上皮内瘤变(LSIL)组织标本46例(LSIL组)、高级别宫颈鳞状上皮内瘤变(HSIL)组织标本50例(HSIL组);宫颈癌组织标本70例(宫颈癌组),年龄23～65岁、平均(44.85±3.41)岁,FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期40例、Ⅲ～Ⅳ期30例,分化程度:高/中分化43例、低分化27例,有淋巴结转移28例,浸润深度≥1/2有33例、<1/2有37例。纳入标准:(1)宫颈癌患者均符合宫颈癌诊断标准[7],并经病理检查确诊;(2)所有患者术前均未行放化疗治疗。排除标准:(1)伴其他恶性肿瘤等疾病者;(2)伴严重肝、肾功能障碍者;(3)妊娠期或哺乳期女性;(4)既往有精神病史者;(5)临床资料不全者。宫颈上皮内瘤变组与宫颈癌组的年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究已获得本院医学伦理委员会审核批准, 所有研究对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1临床特征资料 收集所有纳入对象预后结局及随访时间等。

1.2.2BAG3蛋白表达检测 宫颈组织标本均经60 ℃熔点石蜡包埋、4 μm连续切片后,采用二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水及苏木精染色,并在确定病变区域后采用柠檬酸修复液高温高压修复抗原,冷却后经PBS漂洗3次(每次3 min),随后加入按1∶1 000稀释的一抗(兔抗人BAG3多克隆抗体)4 ℃孵育过夜,PBS漂洗3次(每次3 min),再加入1∶100稀释二抗(兔抗人BAG3单克隆抗体)37 ℃孵育30 min,PBS漂洗3次(每次3 min),最后使用DAB显色,苏木精复染,酸酒精进行短暂分化,之后脱水、透明及封片。最后在显微镜下观察染色情况。所有操作均严格按照SP试剂盒说明书进行。兔抗人BAG3多克隆抗体、兔抗人BAG3单克隆抗体、DAB显色试剂盒等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2.3BAG3蛋白表达结果判定[8]BAG3蛋白表达以细胞质或细胞核内出现棕色颗粒为阳性。免疫结果由2位高年资的病理医师共同利用双盲法对染色结果进行半定量分析,随机选取30个高倍镜视野(×200),每个视野读取细胞计数200个细胞,随后根据细胞染色强度与阳性细胞百分比进行综合评分。细胞染色强度评分:无色为0分、浅黄色为1分、棕色为2分、深褐色为3分。细胞占总细胞百分比:<25%为1分、25%～50%为2分、>50%～75%为3分、>75%为4分。最终得分为阳性细胞百分比和染色强度平均分数的乘积,总分≥3分为高表达(阳性),<3分为低表达(阴性)。

1.3随访 出院后均采用电话、门诊复诊或上门等方式对本研究所有出院患者进行随访,随访时间以患者出院日开始,截止于2021年10月31日,若中途出现转移或死亡,随访即停止。

2 结 果

2.1不同宫颈组织中BAG3蛋白表达水平比较 BAG3蛋白在正常组的低表达率为85.71%,高表达率为14.29%;在LSIL组的低表达率为63.04%,高表达率为36.96%;在HSIL组的低表达率为36.00%,高表达率为64.00%;在宫颈癌组的低表达率为20.00%,高表达率为80.00%。BAG3蛋白在宫颈癌组中的高表达率>HSIL组>LSIL组>正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同宫颈组织中BAG3蛋白表达水平比较 [n(%)]

2.2不同临床病理特征的宫颈癌患者BAG3蛋白表达水平比较 不同年龄、FIGO分期、肌层浸润深度的宫颈癌患者BAG3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);但低分化、淋巴结转移宫颈癌患者的BAG3蛋白高表达率分别高于高/中分化、无淋巴结转移患者(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床病理特征的宫颈癌患者BAG3蛋白表达水平比较

2.3宫颈癌患者预后生存情况 70例宫颈癌患者随访时间为3～46个月,随访3年生存率为60.00%(42/70),其中BAG3蛋白高表达、低表达患者3年生存率分别为53.57%(30/56)、85.71%(12/14)。K-M生存曲线显示,BAG3蛋白高表达患者的生存率低于低表达患者,差异有统计学意义(Log-rankχ2=4.821,P=0.023)。见图1。

图1 不同BAG3表达水平宫颈癌患者生存曲线图

2.4不同临床病理特征的宫颈癌患者3年生存率比较 不同分化程度、有无淋巴结转移、不同BAG3蛋白表达水平的宫颈癌患者3年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.5影响宫颈癌患者3年生存率的多因素Cox回归分析 多因素Cox回归分析结果显示,低分化、淋巴结转移、BAG3蛋白高表达均是宫颈癌患者3年生存率的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响宫颈癌患者3年生存率的多因素Cox回归分析

3 讨 论

近年来随着环境的改变及性传播疾病的影响,我国宫颈癌发病率不仅逐年升高,且逐渐趋向年轻化[9]。据相关流行病学研究显示,宫颈癌发病率可达234/10万人～555/10万人[10],已经成为现代妇科肿瘤学者们面临的严峻挑战。目前导致宫颈癌发生的主要病因是高危型HPV感染,尽管HPV感染的筛查技术已得到推广,但宫颈癌后期复发与转移的概率仍未得到明显改善[11]。宫颈癌是一个由多因素、多种分子参与的复杂病理过程,虽然病因明确,但发生、发展的分子机制目前尚不清楚。因此,寻找与宫颈癌病情进展有关的因素对疾病诊断、治疗及预后有重要价值。但近年来众多学者在探讨宫颈癌发病机制及预后的过程中发现,生物学因子在宫颈癌发生、发展及预后中起重要作用[12]。因此。本研究主要分析了BAG3蛋白在宫颈癌组织中的表达水平及临床意义。

本研究发现,BAG3蛋白在宫颈癌组中的高表达率>HSIL组>LSIL组>正常组(P<0.05),表示BAG3蛋白随着宫颈组织恶化程度而逐渐升高。既往有研究发现,BAG3蛋白在结肠癌癌组织中呈高表达[13],与本研究结果一致。同时本研究显示,不同分化程度、有无淋巴结转移的宫颈癌患者BAG3蛋白高表达率存在差异(P<0.05),说明BAG3蛋白可能与宫颈癌的发展密切相关。同时本研究通过3年随访结果显示,宫颈癌患者3年生存率为60.00%,其中BAG3高表达患者3年生存率高于低表达患者,说明BAG3蛋白表达与宫颈癌预后有关,且高表达提示预后不良。本研究多因素Cox分析结果显示,BAG3高表达是影响宫颈癌患者3年生存率的独立危险因素(P<0.05),进一步证实BAG3参与宫颈癌发生、发展,有望作为评估宫颈癌预后的有效指标。宫颈癌作为最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一,有研究认为其发生与细胞凋亡机制的紊乱有关[14]。BAG是一个多功能的抗凋亡家族,其表达与多种肿瘤的发病及预后相关,同时也是目前研究最多的与细胞凋亡有关的蛋白家族。而BAG3蛋白作为BAG家族中的一员,基因位于10q25,参与机体的生长发育、细胞增殖、迁移和侵袭等,同时BAG3拥有BAG结构域,通过借助自身的结构域跟Bcl-2结合,促进伴侣蛋白的活性,维持蛋白稳定,诱导癌细胞增殖、侵袭与转移[15-16]。并且有较多研究发现,BAG3蛋白表达升高能够抑制肿瘤细胞凋亡[17-18]。同时BAG3也可能是通过影响宫颈癌的上皮间充质转化过程而发挥促癌作用,因为既往细胞实验研究显示,BAG3可促进胶质母细胞瘤细胞和三阴性乳腺癌细胞的上皮间充质转化过程,上皮间充质转化过度正是癌症发生的机制之一[19]。因此,本研究中BAG3蛋白表达水平升高有可能使宫颈癌细胞凋亡受到影响,促进细胞增殖、侵袭、迁徙和上皮间充质转化过程,进而导致宫颈癌患者病情加重。具体机制有待进一步研究验证。

综上所述,BAG3蛋白在宫颈癌和癌前病变组织中的表达高于宫颈正常组织,且表达水平在不同分化程度、是否淋巴结转移的宫颈癌患者有差异,可作为评估宫颈癌预后的有效指标。但本研究选择的样本来自单中心,因此更多研究结果需进一步探索。