决明子炮炙前后对菊楂决明饮有效成分及泻下作用的影响

李筱玲，邓寒霜，霍鸿飞，张亦琳

（1. 商洛学院 生物医药与食品工程学院，陕西 商洛 726000；2. 陕西秦岭特色生物资源产业技术研究院，陕西 商洛 726000）

菊楂决明饮为民间验方，具有平肝疏风、活血化瘀、润肠通便、降血压等功效，由菊花、生山楂片、决明子三味中药组成，其制备方法为取菊花10 g，生山楂片、决明子各15 g，用水煎煮2次后，合并煎煮液即得。现代药理研究发现，菊楂决明饮对于高血压和高血脂患者具有较好的疗效，对阴虚阳亢、大便秘结等症更有效，有预防动脉粥样硬化（AS）和心脑血管病作用[1]。菊楂决明饮可药食两用，民间多作为茶饮，是用来治疗心脑血管疾病常用的中医食疗方，长期服用可降血压、降血脂、减肥，特别适用于中老年人。处方中的决明子为豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，主要有效成分是蒽醌类和萘并吡喃酮类[2]。橙黄决明素是决明子中重要的蒽醌类成分，能明显降低高血脂症大鼠体内的胆固醇、甘油三脂和低密度脂蛋白胆固醇的含量[3]，主要副作用为肠蠕动增加、大便松软、排便次数增加等[4]。本文拟通过探究生决明和不同炮制工艺炒决明对菊楂决明饮中有效成分溶出及其泻下作用的影响情况，为临床依据患者实际选用不同决明子炮制品制备菊楂决明饮提供帮助。

1 仪器与试药

1.1 仪器

TB-215D电子天平[丹佛仪器（北京）]；TDL-40C离心机（上海安亭科学仪器厂）；RE-52旋转蒸发仪（北京科技永兴仪器公司）；KH5200E超声波清洗仪（昆山市科学仪器公司）；LC-20A高效液相色谱仪[日本岛津（中国）]。

1.2 试药和动物

菊花（批号：20180424）、山楂（批号：20180607）、决明子（批号：20180738）（国药控股商洛大药房）；橙黄决明素对照品（批号：B W B 5 0 1 7 9）、大黄酚对照品（批号：BWB50252）（北京世纪奥科）；复方地芬诺酯片（批号：20191102，长春长江制药）；麻仁丸（批号：200606，湖北诺得胜制药）。SPF级昆明小鼠，体重20～30 g，共70只[西安交通大学实验动物中心，许可证：SCXK（陕）2008-001]。

2 方法与结果

2.1 不同炮制规格决明子的制备

生决明：取决明子净制去杂，即得。

炒决明：取9份生决明，每份约200 g，分3组。分别于160，180，210 ℃下炒制12 min，取出，放凉，即得。

2.2 菊楂决明饮中有效成分含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil Gold十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6 mm×250 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A）-0.1 %磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～15 min，40 %A；15～30 min，40 %～90 %A；30～40 min，90 % A）；检测波长：284 nm。进样量：10 µl；流速：1.0 ml/min[5]。

2.2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取大黄酚8.4 mg、橙黄决明素5.33 mg，用乙酸乙酯-无水乙醇（1:2）混合溶剂溶解、定溶至25 ml，精密量取上述溶液1 ml用相同溶剂定溶至10 ml，即得。

2.2.3 供试品溶液制备 取菊花、山楂、决明子药材适量，粉碎后过50目筛。分别精密称取上述药材粉末，菊花1.0 g 、山楂1.5 g、决明子1.5 g，置入具塞三角瓶中，精密加入80 %乙醇100 ml，塞密，称定重量，于65 ℃超声提取50 min，再次称定重量，以80 %乙醇补足失重，过滤，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取2.2.2项下混合对照品溶液2，4，8，10，16，20 μl注入液相色谱仪，按2.2.1项下条件进样分析。以峰面积为纵坐标（Y），以浓度（μg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程。得大黄酚标准曲线方程为：Y=1×106X+19387，R²=0.9991，表明大黄酚在浓度4.26～42.6 μg/ml范围内线性关系良好。橙黄决明素的标准曲线方程为：Y=7×106X+6170.7，R²=0.9999；表明橙黄决明素在浓度为6.72～67.2 μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.5 含量测定及结果分析 按照2.2.3项下方法，分别用生决明、炒决明制备菊楂决明饮供试品溶液，照2.2.1项下条件进样分析，结果见表1。

表1 不同处理菊楂决明饮中有效成分含量

由表1可见，炒决明中橙黄决明素及大黄酚含量明显比生品高，其中180 ℃炒决明样品的橙黄决明素含量最高，210 ℃炒决明的大黄酚含量最高。分析原因可能是决明子中所含蒽醌苷在炒制过程中受热分解为苷元所致。

2.3 决明子炮制规格对菊楂决明饮泻下作用的影响

2.3.1 受试药物的制备

2.3.1.1 称取菊花10 g、山楂15 g、决明子（捣碎）15 g置入容器，加水煎煮3次。前两次液料比为8:1，煎煮时间30 min；最后1次为液料比为6:1，煎煮时间20 min。过滤，合并3次滤液，减压浓缩至含决明子原药0.375 g/ml的药液，即得菊楂决明饮药液，冷藏备用。

2.3.1.2 取复方地芬诺（每片含盐酸地芬诺酯2.5 mg）研磨成粉后加水配制成混悬液。

2.3.1.3 麻仁丸研磨粉碎加水制得所需浓度的混悬液。给药前先将药液配成含2 %墨汁的受试药物。

2.3.2 实验动物及分组给药方案 取SPF级昆明小鼠70只，适应性饲养1周后，随机分为7组，每组10只。第一组为复方地芬诺酯模型组（10 mg/kg灌胃）；第2组为麻仁丸阳性对照组（4 g/kg灌胃）；第3～6组分别为生决明组、160 ℃炒决明组、180 ℃炒决明组、210 ℃炒决明组，给药量为相当于原药7.5 g/kg；第7组为生理盐水组，给药与生决明组等量，苦味酸标记。

2.3.3 小鼠便秘模型的制备 各组小鼠禁食不禁水24 h后，除生理盐水组给予生理盐水（0.02 ml/g体重），其他各组灌胃10 mg/kg的复方地芬诺酯，计时30 min后建立便秘模型。模型组与生理盐水组小鼠的首次排黑便时间和黑便数量差异有统计学意义，则说明小鼠便秘模型建立成功[6]。

2.3.4 泻下排便实验方法 造模成功后，实验当天小鼠禁食4 h，各给药组分别灌胃含2 %墨汁的受试药液，生理盐水对照组和模型组灌胃含2 %墨汁的生理盐水，给药体积为0.2 ml/10g体重。灌胃后小鼠均单笼饲养，并恢复正常饲料和饮水，然后观察泻下情况。连续记录6 h内每只小鼠开始排出黑便的时间及6 h黑便总数量。比较生决明与炒决明子的菊楂决明饮对便秘型小鼠排便的影响差异性[7]。

2.3.5 菊楂决明饮泻下作用实验结果分析 观察、记录首次排黑便时间和黑便数至给药6 h后。采用SPSS19.0（中文版）软件进行数据统计和均值分析，实验数据以均数（±s）表示，各组间比较采用t检验，P＜0.05具有显著统计意义，P＜0.01表示差异具有极显著统计学意义。结果见表2～4。

表2 不同处理菊楂决明饮对小鼠排便的影响

表3 不同处理组实验小鼠首次排黑便时间对照表

表4 炮制前后不同组6 h黑便点数对照表

由表2可见，模型组首次排黑便时间最晚，6 h后黑便点数最少；麻仁丸组明显比模型组的首次排黑便时间最早，6 h后黑便点数最多；由表3和表4可见，模型组与生理盐水对照组比较，黑便总点数和开始排黑便时间有明显差异（P＜0.01），表明便秘模型建立成功。炒决明组与生决明组比较，首次排黑便时间明显更晚、6 h黑便点数明显更少（P＜0.01），且炒制温度越高，实验小鼠首次排便时间越晚、排便量越少，表明以炒制决明子制备菊楂决明饮，可显著降低其泻下作用。分析原因可能是炒制高温时，决明子中的泻下成分蒽醌苷受热分解，同时决明子中油脂也会部分破坏，造成泻下作用减弱。

3 结论与讨论

本文研究发现，以炒决明子制备的菊楂决明饮中大黄酚、橙黄决明素含量较生决明有明显增加，同时其泻下的作用也得到明显缓和，表明炒制有助于具有泻下作用的蒽醌苷类成分分解为游离蒽醌，有助于降血压、降血脂类有效成分的溶出。有鉴于此，临床应用菊楂决明饮时，应视患者辨证情况选用不同炮制规格的决明子组方。辨证论治是中医独有特色，中药药味不变时，可通过中药炮制来调整或者纠正药物的偏性、缓和药性[8-9]。决明子经过炒制后泻下作用缓和，用于菊楂决明饮中，使该方的泻下作用相应减弱。因此对于高血脂人群，脾虚便溏者，在服用菊楂决明饮时应选用炒决明，以避免出现腹泻等不良反应。