缺血性脑卒中患者血清LncRNA SNHG8的表达及临床意义

高继英，石代乐，王 刚

（河北北方学院附属第一医院 a.神经外科高压氧舱室；b.神经外科；c.神经内科，河北张家口 075000）

缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）约占脑卒中病例总数的70%，具有极高的发病率及致残率，严重威胁人类生命健康，早期诊断并评估IS病情，给予及时有效干预，具有重要意义[1-2]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）可参与调节脑缺血损伤、神经发育和神经可塑性等多种病理生理过程[3]。LncRNA小核仁RNA宿主基因8（long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene 8，LncRNA SNHG8）为LncRNA之一，可通过调控靶基因表达参与细胞增殖、分化、上皮间质转化、血管生成等多种生物学过程[4]。研究显示，LncRNA SNHG8在大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）大鼠脑组织和氧-葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation，OGD）的原代小胶质细胞中低表达，上调LncRNA SNHG8表达可通过调控miRNA-425-5p/沉默信息调节因子（silent information regulator，SIRT）1/核因子-κB轴抑制脑缺血性诱导小胶质细胞炎症和保护血脑屏障损伤[5]。以上研究表明，LncRNA SNHG8在脑损伤中发挥保护作用，但LncRNA SNHG8在IS中的临床价值尚不清楚。因此，本研究拟探讨IS患者血清LncRNA SNHG8表达情况及其诊断价值，为IS的诊疗提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2019年5月～2021年12月在河北北方学院附属第一医院神经内科住院的IS患者115例作为研究对象（IS组），其中男性70例，女性45例，年龄46～78（61.20±10.50）岁；吸烟35例，饮酒41例，高血压58例，糖尿病27例，冠心病12例。另选取同期在本院体检人员120例作为对照组，同时排除既往有脑卒中史、头部外伤史等系统疾病者，其中男性64例，女性56例，年龄46～80（60.70±11.80）岁；吸烟28例，饮酒33例，高血压46例，糖尿病23例，冠心病15例。两组性别、年龄及吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、冠心病比例比较，差异均无统计学意义（χ2=1.361,t=0.343,χ2=1.509,1.809,3.486,0.652,0.246,均P＞0.05）。所有研究对象或其直系亲属签署知情同意书，且经河北北方学院附属第一医院伦理委员会审核、批准后实施。

IS组纳入标准：①符合中国缺血性脑卒中诊治指南（2018）中诊断标准[7]；②首次发病且在发病24h内入院就诊；③经头颅CT或3.0 MRI检查确诊且排除其他脑部病变。排除标准：①短暂性脑缺血发作、出血性脑梗死、脑外伤、高血压脑病及脑膜炎者；②并发肝肾功能障碍者；③有恶性肿瘤者；④临床资料不全者。根据入院时国立卫生研究院卒中量表评分（national institute of health stroke scale，NIHSS）[6]对IS组患者进行神经功能损伤评分，将患者分为轻度组（NIHSS评分≤4分，n=39）、中度组（4分＜NIHSS评分≤20分，n=35）和重度组（NIHSS评分＞20分，n=41）。

1.2 仪器与试剂 ABI 7300 PCR仪（美国Applied Biosystem公司），总RNA提取试剂（Trizol）（美国Invitrogen公司，货号15596018），反转录试剂盒（Reverse Transcriptase M-MLV）（货号H2640A，日本Takara）及TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒（2×Probe qPCR Mix）（货号HS0616，日本Takara），LncRNA SNHG8及内参GAPDH的引物（上海生物工程有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 样品采集及保存：采集IS组患者入院24h内、治疗1周、治疗2周后及对照组人员体检当天肘静脉血5 ml，常温3 000×g离心10 min后收集血清，置于-80℃保存待检。

1.3.2 实时荧光定量PCR（real time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）法检测血清LncRNA SNHG8表达水平：采用Trizol试剂提取血清中总RNA，取1μg RNA使用反转录试剂盒合成cDNA。反应条件：95 ℃ 10 min；然后95 ℃ 10 s，60℃60 s，共40个循环。LncRNA SNHG8上游引物：5’-CCC GAGAACCGTCAGTTTGA-3’，下游引物：5’-ACAC CCGTTTCCCCAACTAC-3’；GAPDH上游引物：5’-AATCCCATCACCATCTTC-3’，下游引物：5’-AG GCTGTTGTCATACTTC-3’。反应结束后，以GAPDH为内参，采用2-∆∆Ct法计算LncRNA SNHG8的相对表达量。

1.3.3 临床资料收集：收集入选人员性别、年龄、疾病史、血脂指标，血脂指标包括总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）与高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0统计学分析，计量资料均符合正态分布检验，以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。计数资料采用n（%）表示，组间比较采用χ2检验。Spearman相关性分析IS患者血清LncRNA SNHG8与NIHSS评分的相关性；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线分析血清LncRNA SNHG8对IS的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血脂及血清LncRNA SNHG8表达水平比较 见表1。IS组血清TC，LDL-C水平高于对照组，而 HDL-C及LncRNA SNHG8表达水平低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.001）；对照组与IS组患者血清TG水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 两组血脂及血清LncRNA SNHG8表达水平比较（±s）

项目IS组（n=115）对照组（n=120）t值P值TG（mmol/L）1.59±0.671.65±0.810.6170.538 TC（mmol/L）5.26±1.214.35±1.435.255＜0.001 HDL-C（mmol/L）1.39±0.411.72±0.366.564＜0.001 LDL-C（mmol/L）2.23±0.531.51±0.659.284＜0.001 LncRNA SNHG80.78±0.111.05±0.1515.680＜0.001

2.2 不同病情严重程度IS患者血清LncRNA SNHG8表达水平比较 轻度组、中度组和重度组患者血清中LncRNA SNHG8表达水平分别为0.85±0.10，0.77±0.09和0.71±0.08，三组比较差异有统计学意义（F=24.173，P＜0.001）；与轻度组比较，中度与重度组患者血清中LncRNA SNHG8表达水平降低，差异有统计学意义（t=3.601，6.931，均P<0.05），与中度组比较，重度组患者血清中LncRNA SNHG8表达水平降低，差异有统计学意义（t=3.077，P=0.003）。

2.3 IS患者血清LncRNA SNHG8表达与临床病理参数的关系 见表2。不同年龄、性别、梗死分型的IS患者血清LncRNA SNHG8表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

表2 IS患者血清LncRNA SNHG8表达与临床病理参数的关系

2.4 IS患者血清LncRNA SNHG8与NIHSS评分的相关性 相关性分析显示，IS患者血清LncRNA SNHG8与NIHSS评分呈负相关性（r=-0.501，P<0.001）。

2.5 血清LncRNA SNHG8对IS的诊断价值 血清LncRNA SNHG8表达水平评估IS患者的ROC曲线下面积为0.873（95%CI为：0.823～0.913），最佳截断值为0.89，敏感度和特异度分别为85.22%，73.33%。

2.6 IS患者治疗前、后血清LncRNA SNHG8表达水平变化 IS患者在入院24 h内、治疗1周后、治疗2周后血清LncRNA SNHG8表达水平分别为0.78±0.11，0.85±0.09和0.93±0.08，表达水平依次升高，差异有统计学意义（F=73.064，P<0.001）。

3 讨论

IS是临床最常见的脑血管疾病之一，IS的发病机制复杂，其中脑缺血再灌注损伤及其炎症反应引起神经损伤，涉及多基因、多信号转导途径参与的过程[8]。

LncRNA在脑组织中表达广泛，通过调控其靶基因表达来发挥调控细胞生物学功能，在帕金森病、阿尔兹海默症、中风等中枢神经系统疾病发生发展中起着重要作用[9-10]。研究显示，LncRNA可通过调控氧化应激、神经炎症反应、凋亡与自噬、血管生成等过程参与IS的发生发展[11]。报道显示，IS患者脑组织与血清中LncRNA异常表达，可能成为诊断IS的潜在标志物，如LncRNA H19，LncRNA GAS5，LncRNA RNF5P1等[12-13]。LncRNA SNHG8是LncRNA之一，在多种病变组织、肿瘤中均异常表达，参与调控肿瘤细胞增殖、迁移与耐药性、心肌缺血再灌注引起的心肌损伤等多种生理病理过程[14-15]。研究显示[16]，过表达LncRNA SNHG8可改善MCAO大鼠神经功能缺陷，降低脑含水量、血脑屏障通透性及脑组织损伤和炎症，在OGD诱导的小胶质细胞中，过表达LncRNA SNHG8或可增加细胞活力并降低乳酸脱氢酶活性，其作用机制与调控miRNA-449c-5p/SIRT1/叉头框转录因子O1通路有关。另有研究显示[17]，在慢性脑缺血诱导的神经细胞中过表达LncRNA SNHG8可通过miRNA-384/同源盒基因A13/序列相似性家族3A轴抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。以上研究结果表明，LncRNA SNHG8在脑损伤过程中发挥保护作用。本研究结果表明，LncRNA SNHG8在IS患者血清中表达水平降低，并随着患者病情加重而降低，提示LncRNA SNHG8与IS发病及患者疾病的严重程度有一定相关性，IS患者由于脑缺血造成脑局部缺氧，致使氧化损伤、兴奋性毒性及神经元凋亡，进而破坏血脑屏障，而炎症反应及神经元坏死产生的细胞因子可加重脑损伤，LncRNA SNHG8可能通过调节神经炎症反应与神经元凋亡参与IS的发展，而上调LncRNA SNHG8表达可抑制神经炎症反应与神经元凋亡[5]，提示LncRNA SNHG8在脑损伤过程中发挥神经保护作用，可能成为IS治疗的靶向标志物。

NIHSS评分可用于评估IS患者病情的严重程度，评分越高，表示患者病情越严重，有研究显示[18]，LncRNA与IS患者的NIHSS评分相关，推测LncRNA可能对IS的病情严重程度产生影响。本研究相关性分析显示，IS患者血清LncRNA SNHG8与NIHSS评分呈负相关，进一步提示LncRNA SNHG8表达水平与IS患者的疾病严重程度相关。一般认为外周血中的LncRNA来源于体内凋亡或坏死的细胞，LncRNA可以通过血脑屏障，脑组织LncRNA水平与血清中LncRNA水平一致，LncRNA SNHG8可能来源于受损的脑组织，在脑损伤组织中表达水平降低，可能通过参与调节神经炎症与神经元凋亡，促进IS疾病进展，有望通过检测血清中LncRNA SNHG8表达水平预测IS的疾病发生与进展。进一步研究发现，血清LncRNA SNHG8对评估IS患者发生有一定指导价值，可能成为诊断IS的分子标志物。本研究还显示，IS患者在治疗后血清LncRNA SNHG8表达水平升高，表明LncRNA SNHG8在IS患者中起到神经保护作用，这可能与其参与调节小胶质细胞炎症反应与神经元凋亡有关。

综上所述，LncRNA SNHG8在IS患者血清中表达水平降低，与IS患者疾病严重程度有关，对IS有一定诊断价值，可能成为诊断IS的分子标志物。但由于本研究纳入的临床资料及样本量相对较少，且LncRNA SNHG8与IS发生发展的具体作用机制尚未明确，后续将收集更多的临床资料并扩大样本，增加基础研究内容，以深入探讨LncRNA SNHG8在IS中的作用。